目的挖掘呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)降解酶,应用双酶体系实现呕吐毒素的高效降解。方法利用生物信息学技术从国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库筛选潜在DON降解酶AKR18A2,在大肠杆菌E...目的挖掘呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)降解酶,应用双酶体系实现呕吐毒素的高效降解。方法利用生物信息学技术从国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库筛选潜在DON降解酶AKR18A2,在大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)中进行重组和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,经镍亲和层析纯化并鉴定AKR18A2的酶学性质,构建德沃斯氏菌(Devosiasp.)来源的DON降解酶QDDH和AKR18A2双酶作用体系,实现DON的高效降解。结果来自鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)的呕吐毒素降解酶(AKR18A2)由343个氨基酸组成。该酶属于醛酮还原酶超家族,45℃和pH7.0为最适反应条件。AKR18A2可在24h内降解15.42%DON,而双酶(QDDH和AKR18A2)协同作用4h后对DON的降解率可提高至98.02%。结论本研究鉴定了一种新型DON降解酶AKR18A2,并首次创新建立双酶联用体系进一步实现DON的高效降解。展开更多
目的探讨脱氧核苷酸转移酶末端相互作用蛋白1(deoxynucleotidyltransferase,terminal,interacting protein 1,DNTTIP1)通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路促进鼻咽癌侵袭及转移机制。方法选...目的探讨脱氧核苷酸转移酶末端相互作用蛋白1(deoxynucleotidyltransferase,terminal,interacting protein 1,DNTTIP1)通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路促进鼻咽癌侵袭及转移机制。方法选用人鼻咽癌细胞系(HK1)作为研究对象,分为观察组与对照组,观察组中细胞转入含有DNTTIP1基因的载体,对照组转入空白载体。采用Trizol法提取细胞中的总RNA,细胞划痕及Transwell小室实验检测细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测ERK信号通路相关蛋白的表达情况。结果DNTTIP1在观察组HK1细胞中的表达水平明显高于对照组(2.75±0.43 vs.1.00±0.01),差异有统计学意义(t=9.966,P<0.05)。观察组中HK1细胞迁移及侵袭明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,观察组HK1细胞中的p-ERKl/2蛋白表达水平明显上升(0.64±0.13 vs.1.26±0.15),差异有统计学意义(t=7.651,P<0.05)。ERK+3'-UTR+DNTTIP1组中ERK相对表达量明显高于ERK+3'-UTR组(1.71±0.21 vs.1.00±0.01),差异有统计学意义(t=8.272,P<0.05)。结论DNTTIP1通过ERK信号通路促进鼻咽癌侵袭及转移,该通路对鼻咽癌相关疾病的治疗具有潜在的医学价值。展开更多
文摘目的挖掘呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)降解酶,应用双酶体系实现呕吐毒素的高效降解。方法利用生物信息学技术从国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库筛选潜在DON降解酶AKR18A2,在大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)中进行重组和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,经镍亲和层析纯化并鉴定AKR18A2的酶学性质,构建德沃斯氏菌(Devosiasp.)来源的DON降解酶QDDH和AKR18A2双酶作用体系,实现DON的高效降解。结果来自鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)的呕吐毒素降解酶(AKR18A2)由343个氨基酸组成。该酶属于醛酮还原酶超家族,45℃和pH7.0为最适反应条件。AKR18A2可在24h内降解15.42%DON,而双酶(QDDH和AKR18A2)协同作用4h后对DON的降解率可提高至98.02%。结论本研究鉴定了一种新型DON降解酶AKR18A2,并首次创新建立双酶联用体系进一步实现DON的高效降解。
文摘目的探讨脱氧核苷酸转移酶末端相互作用蛋白1(deoxynucleotidyltransferase,terminal,interacting protein 1,DNTTIP1)通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路促进鼻咽癌侵袭及转移机制。方法选用人鼻咽癌细胞系(HK1)作为研究对象,分为观察组与对照组,观察组中细胞转入含有DNTTIP1基因的载体,对照组转入空白载体。采用Trizol法提取细胞中的总RNA,细胞划痕及Transwell小室实验检测细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测ERK信号通路相关蛋白的表达情况。结果DNTTIP1在观察组HK1细胞中的表达水平明显高于对照组(2.75±0.43 vs.1.00±0.01),差异有统计学意义(t=9.966,P<0.05)。观察组中HK1细胞迁移及侵袭明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,观察组HK1细胞中的p-ERKl/2蛋白表达水平明显上升(0.64±0.13 vs.1.26±0.15),差异有统计学意义(t=7.651,P<0.05)。ERK+3'-UTR+DNTTIP1组中ERK相对表达量明显高于ERK+3'-UTR组(1.71±0.21 vs.1.00±0.01),差异有统计学意义(t=8.272,P<0.05)。结论DNTTIP1通过ERK信号通路促进鼻咽癌侵袭及转移,该通路对鼻咽癌相关疾病的治疗具有潜在的医学价值。
