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新基因XTP11表达蛋白在酵母细胞中的转录激活功能研究
被引量：
1
1
作者
刘妍
徐东平
+2 位作者
戴久增
李进
成军
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期676-678,共3页
目的构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP11的酵母表达载体,探索应用酵母双杂交系统克隆与XTP11蛋白结合的肝细胞蛋白的可行性。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增XTP11编码基因,并在其5′端引入NcoI/BamHI酶切位点,连接入酵母表达载体pGB...
目的构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP11的酵母表达载体,探索应用酵母双杂交系统克隆与XTP11蛋白结合的肝细胞蛋白的可行性。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增XTP11编码基因,并在其5′端引入NcoI/BamHI酶切位点,连接入酵母表达载体pGBKT7中,构建编码XTP11全序列与酵母蛋白GAL4DNA结合域融合蛋白的酵母表达质粒,转化酵母细胞AH109并应用Westernblot方法检测XTP11蛋白表达。然后铺于含有X-α半乳糖的SD/-Trp和SD/-Trp-His-Ade营养缺陷型培养基上进行自激活验证(蓝/白筛选)。结果成功地构建了XTP11的酵母表达载体并在酵母细胞中表达相应的融合蛋白,转化了pG-BKT7-XTP11的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长,并且可以产生α-半乳糖苷酶,从而在铺有X-α半乳糖的培养基上呈现蓝色,表明XTP11蛋白代替了酵母GAL4蛋白的DNA激活域发挥作用,从而激活下游报告基因(ADE2,HIS3,MEL1和LacZ)的表达。结论全序列XTP11蛋白与GAL4DNA结合域的融合蛋白在酵母细胞中呈现转录激活功能,限制了应用酵母双杂交系统研究XTP11的肝细胞结合蛋白。
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关键词
乙型肝炎病毒X
蛋白
基因
XTP11
蛋白
酵母蛋白表达
转录激活
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职称材料
酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化
2
作者
徐灿
张震宇
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期99-104,共6页
以酿酒酵母基因组DNA为模板，根据GenBank上公布的酿酒酵母Rav1p基因（ray1）序列和表达载体特性设计特异性引物，PCR扩增得到4074bp的DNA片段，将PCR产物和原核表达载体pET28a（＋）同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达载体进行...
以酿酒酵母基因组DNA为模板，根据GenBank上公布的酿酒酵母Rav1p基因（ray1）序列和表达载体特性设计特异性引物，PCR扩增得到4074bp的DNA片段，将PCR产物和原核表达载体pET28a（＋）同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达载体进行连接，构建成重组质粒pET28a．rav1。再将pET28a．rav1转化到BL21（DE3）感受态细胞中。经IPTG16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Rav1p。诱导后的菌体进行超声波破碎，然后用GEheahhcare公司的AKTA蛋白纯化仪和HisTrapHP1mL亲和层析柱纯化目的蛋白。SDS—PAGE电泳分析和Westernblot分析显示在155kD有明显的条带，成功实现了Rav1p在大肠杆菌中的表达纯化。
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关键词
酿酒
酵母
RAVE复合物Ravlp克隆原核
表达
蛋白
纯化
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职称材料
题名
新基因XTP11表达蛋白在酵母细胞中的转录激活功能研究
被引量：
1
1
作者
刘妍
徐东平
戴久增
李进
成军
机构
解放军第
解放军第
北京地坛医院传染病研究所
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期676-678,共3页
文摘
目的构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP11的酵母表达载体,探索应用酵母双杂交系统克隆与XTP11蛋白结合的肝细胞蛋白的可行性。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增XTP11编码基因,并在其5′端引入NcoI/BamHI酶切位点,连接入酵母表达载体pGBKT7中,构建编码XTP11全序列与酵母蛋白GAL4DNA结合域融合蛋白的酵母表达质粒,转化酵母细胞AH109并应用Westernblot方法检测XTP11蛋白表达。然后铺于含有X-α半乳糖的SD/-Trp和SD/-Trp-His-Ade营养缺陷型培养基上进行自激活验证(蓝/白筛选)。结果成功地构建了XTP11的酵母表达载体并在酵母细胞中表达相应的融合蛋白,转化了pG-BKT7-XTP11的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长,并且可以产生α-半乳糖苷酶,从而在铺有X-α半乳糖的培养基上呈现蓝色,表明XTP11蛋白代替了酵母GAL4蛋白的DNA激活域发挥作用,从而激活下游报告基因(ADE2,HIS3,MEL1和LacZ)的表达。结论全序列XTP11蛋白与GAL4DNA结合域的融合蛋白在酵母细胞中呈现转录激活功能,限制了应用酵母双杂交系统研究XTP11的肝细胞结合蛋白。
关键词
乙型肝炎病毒X
蛋白
基因
XTP11
蛋白
酵母蛋白表达
转录激活
Keywords
HBV X protein
XTPll
protein expression
Transcriptional activation domain
分类号
R512.63 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化
2
作者
徐灿
张震宇
机构
江南大学生物工程学院、江南大学工业生物技术教育部重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期99-104,共6页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金，国家自然科学基金，工业生物技术教育部重点实验室主任基金
文摘
以酿酒酵母基因组DNA为模板，根据GenBank上公布的酿酒酵母Rav1p基因（ray1）序列和表达载体特性设计特异性引物，PCR扩增得到4074bp的DNA片段，将PCR产物和原核表达载体pET28a（＋）同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达载体进行连接，构建成重组质粒pET28a．rav1。再将pET28a．rav1转化到BL21（DE3）感受态细胞中。经IPTG16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Rav1p。诱导后的菌体进行超声波破碎，然后用GEheahhcare公司的AKTA蛋白纯化仪和HisTrapHP1mL亲和层析柱纯化目的蛋白。SDS—PAGE电泳分析和Westernblot分析显示在155kD有明显的条带，成功实现了Rav1p在大肠杆菌中的表达纯化。
关键词
酿酒
酵母
RAVE复合物Ravlp克隆原核
表达
蛋白
纯化
Keywords
Saccharomyces cerevisiae RAVE complex Ravlp Clone Prokaryotic expression Protein purification
分类号
Q492.4 [生物学—生理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
新基因XTP11表达蛋白在酵母细胞中的转录激活功能研究
刘妍
徐东平
戴久增
李进
成军
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
在线阅读
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职称材料
2
酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化
徐灿
张震宇
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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已选择
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