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Annexin32酵母分泌型表达载体的构建及其高拷贝转化子的快速筛选
被引量：
1
1
作者
杨湘越
武圣明
+1 位作者
陈蕊雯
孙树汉
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期695-696,共2页
关键词
Annexin32
酵母
分泌
型
表达
载体
构建
高拷贝转化子
快速筛选
毕赤
酵母
G418抗性筛选
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职称材料
抗HIV-1外膜蛋白单链抗体基因的酵母表达和生物活性分析
被引量：
4
2
作者
李昌
金宁一
+4 位作者
王宏伟
刘玉生
于芳
佟敬山
胡宁宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期1144-1146,共3页
目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应...
目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应位点,构建重组酵母表达质粒pPIC9-scFv。BglⅡ线性化后,电转化入受体酵母菌GS115中,筛选阳性重组子,进行甲醇诱导表达,并用RT-PCR、SDS-PAGE、双抗体夹心Dot-ELISA法分析目的蛋白表达情况。结果:通过表型筛选、PCR鉴定获得阳性重组酵母工程菌,RT-PCR、SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到很好表达,表达量可占培养液上清总蛋白量的18%,双抗体夹心Dot-ELISA法检测,表达产物能够特异识别重组HIV-1gp120抗原蛋白并与之发生特异性免疫反应,证明表达的重组scFv具有良好的抗体活性。结论:成功地实现了scFv基因的分泌性表达,为抗AIDS靶向治疗及进一步研究其抗HIV活性提供了依据。
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关键词
HIV-1
外膜蛋白
单链抗体
酵母分泌表达
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职称材料
题名
Annexin32酵母分泌型表达载体的构建及其高拷贝转化子的快速筛选
被引量：
1
1
作者
杨湘越
武圣明
陈蕊雯
孙树汉
机构
第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期695-696,共2页
基金
国家"8 63"计划资助项目 (10 1-0 6-0 5 -0 4) .
关键词
Annexin32
酵母
分泌
型
表达
载体
构建
高拷贝转化子
快速筛选
毕赤
酵母
G418抗性筛选
分类号
R78 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
抗HIV-1外膜蛋白单链抗体基因的酵母表达和生物活性分析
被引量：
4
2
作者
李昌
金宁一
王宏伟
刘玉生
于芳
佟敬山
胡宁宁
机构
军事医学科学院军事兽医研究所病毒室
南方医科大学免疫学教研室
长春理工大学
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期1144-1146,共3页
基金
吉林省科技厅资助项目(20060570)
文摘
目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应位点,构建重组酵母表达质粒pPIC9-scFv。BglⅡ线性化后,电转化入受体酵母菌GS115中,筛选阳性重组子,进行甲醇诱导表达,并用RT-PCR、SDS-PAGE、双抗体夹心Dot-ELISA法分析目的蛋白表达情况。结果:通过表型筛选、PCR鉴定获得阳性重组酵母工程菌,RT-PCR、SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到很好表达,表达量可占培养液上清总蛋白量的18%,双抗体夹心Dot-ELISA法检测,表达产物能够特异识别重组HIV-1gp120抗原蛋白并与之发生特异性免疫反应,证明表达的重组scFv具有良好的抗体活性。结论:成功地实现了scFv基因的分泌性表达,为抗AIDS靶向治疗及进一步研究其抗HIV活性提供了依据。
关键词
HIV-1
外膜蛋白
单链抗体
酵母分泌表达
Keywords
HIV-1
envelope glycoprotein
single chain Fv fragment （ scFv ）
secretory expression in pichia pastoris
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
Annexin32酵母分泌型表达载体的构建及其高拷贝转化子的快速筛选
杨湘越
武圣明
陈蕊雯
孙树汉
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
1
在线阅读
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职称材料
2
抗HIV-1外膜蛋白单链抗体基因的酵母表达和生物活性分析
李昌
金宁一
王宏伟
刘玉生
于芳
佟敬山
胡宁宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
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职称材料
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