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酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶活性的调节
被引量：
1
1
作者
高金明
冯起平
+3 位作者
左瑾
方福德
蒋磊
郭子健
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期241-245,共5页
目的研究酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶(TPST)1和TPST2的调节作用。方法以人cDNA为模板,采用聚合酶链反应方法扩增人TPST1和TPST2基因野生型的全长cDNA序列,并融合入人IgG1的Fc编码区域;采用定点突变方法将TPST1和TPST2蛋白中可硫...
目的研究酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶(TPST)1和TPST2的调节作用。方法以人cDNA为模板,采用聚合酶链反应方法扩增人TPST1和TPST2基因野生型的全长cDNA序列,并融合入人IgG1的Fc编码区域;采用定点突变方法将TPST1和TPST2蛋白中可硫化的酪氨酸突变为苯丙氨酸。针对TPST1(259～275位核苷酸)和TPST2(73～94位核苷酸)基因,分别构建小干扰RNA(shRNA)1和shRNA2重组质粒。测定所有构建质粒开放读框序列。证实序列正确后,将上述质粒分别转染人肾胚胎上皮细胞(HEK)293T。24h后将细胞分成3份:1份用于35S-蛋氨酸/半胱氨酸或35S-亚硫酸钠标记,48h后再进行免疫沉淀反应;1份用于125I标记配基结合;1份用于流式细胞仪检测受体的表达水平。结果TPST1326位和TPST2325位酪氨酸在翻译后被硫化修饰,这一翻译后修饰被特异性的硫化抑制剂shRNA1和shRNA2及非特异性的硫化抑制剂NaClO3显著抑制。shRNA1和shRNA2可显著抑制补体3a和5a受体的硫化,并进一步降低这两种受体与特异性配基的结合效率。结论TPST1和TPST2翻译后受酪氨酸硫化修饰的调节,硫化抑制剂shRNA可以显著抑制TPST的活性,并进一步抑制补体3a和5a受体结合其特异性配基的作用。
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关键词
硫化
酪
氨
酸
酪氨酸硫化转移酶
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职称材料
题名
酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶活性的调节
被引量：
1
1
作者
高金明
冯起平
左瑾
方福德
蒋磊
郭子健
机构
中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院呼吸内科
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所分子生物学国家重点实验室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期241-245,共5页
基金
国家自然科学基金(30470767
30471930)
+2 种基金
北京自然科学基金(7072063)
留学归国人员启动基金
北京协和医院青年基金~~
文摘
目的研究酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶(TPST)1和TPST2的调节作用。方法以人cDNA为模板,采用聚合酶链反应方法扩增人TPST1和TPST2基因野生型的全长cDNA序列,并融合入人IgG1的Fc编码区域;采用定点突变方法将TPST1和TPST2蛋白中可硫化的酪氨酸突变为苯丙氨酸。针对TPST1(259～275位核苷酸)和TPST2(73～94位核苷酸)基因,分别构建小干扰RNA(shRNA)1和shRNA2重组质粒。测定所有构建质粒开放读框序列。证实序列正确后,将上述质粒分别转染人肾胚胎上皮细胞(HEK)293T。24h后将细胞分成3份:1份用于35S-蛋氨酸/半胱氨酸或35S-亚硫酸钠标记,48h后再进行免疫沉淀反应;1份用于125I标记配基结合;1份用于流式细胞仪检测受体的表达水平。结果TPST1326位和TPST2325位酪氨酸在翻译后被硫化修饰,这一翻译后修饰被特异性的硫化抑制剂shRNA1和shRNA2及非特异性的硫化抑制剂NaClO3显著抑制。shRNA1和shRNA2可显著抑制补体3a和5a受体的硫化,并进一步降低这两种受体与特异性配基的结合效率。结论TPST1和TPST2翻译后受酪氨酸硫化修饰的调节,硫化抑制剂shRNA可以显著抑制TPST的活性,并进一步抑制补体3a和5a受体结合其特异性配基的作用。
关键词
硫化
酪
氨
酸
酪氨酸硫化转移酶
Keywords
sulfation
tyrosine
tyrosylprotein sulfotransferase
分类号
Q756 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶活性的调节
高金明
冯起平
左瑾
方福德
蒋磊
郭子健
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
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