配对盒基因家族——发育过程中重要的转录因子 被引量：5

1

作者 管昊然 李梦琪 韩英伦 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期449-457,共9页

在大量的脊椎和无脊椎动物中发现的配对盒转录因子(paired box,PAX)及其同源物,在胚胎发育的许多阶段发挥着关键的作用。该基因家族因其具有保守的成对结构域而得名,除此之外其还具有八肽和同源域。根据结构域的组成和序列的同源性,该... 在大量的脊椎和无脊椎动物中发现的配对盒转录因子(paired box,PAX)及其同源物,在胚胎发育的许多阶段发挥着关键的作用。该基因家族因其具有保守的成对结构域而得名,除此之外其还具有八肽和同源域。根据结构域的组成和序列的同源性,该基因家族主要分为4个亚家族:PAX1/9(PAX1、PAX9),PAX2/5/8(PAX2、PAX5、PAX8),PAX3/7(PAX3、PAX7),PAX4/6(PAX4、PAX6)。各亚家族具有不同的特征结构,例如PAX1/9亚家族的PD-OP、PAX2/5/8亚家族的PD-OP-PTHD、PAX3/7亚家族的PD-OP-PTHD以及PAX4/6亚家族的PD和PTHD。其中,PAX家族的3个成员PAX2、PAX4和PAX6在胰腺发育和分化的多个阶段中发挥了重要作用,在调节胰岛激素的合成和分泌中也发挥了关键作用,揭示这些转录因子及其在胰腺中的原始和分化作用,为糖尿病的研究和治疗提供帮助。PAX1/9亚家族与肿瘤细胞的相互作用在癌症诊断和检测中具有重要作用,例如在肿瘤中PAX1的甲基化和PAX9表达程度等,而且PAX基因发挥作用具有时间性和空间性。在多种肿瘤中,发现PAX基因功能和结构异常。PAX3/7是作为骨骼肌发育的肌原性转录因子,PAX基因发挥作用具有时间性和空间性。在多种肿瘤中,发现PAX基因功能和结构异常。本文就上述内容进行综述。 展开更多

关键词 配对盒转录因子 胰腺 胚胎发育 骨骼肌发育 肿瘤

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认识人类配对盒基因Pax6,一个控制眼和大脑发育的关键基因 被引量：4

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作者 David Wan-ChengLi 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期577-587,共11页

人类配对盒基因6（Pax6）是控制眼和大脑发育的关键基因。Pax6基因突变或表达水平改变导致一系列的眼部疾病。作为转录因子，Pax6在胚胎发育早期多个不同组织原基表达，单独或与其他转录因子共同作用，直接或间接调控不同下游基因的表... 人类配对盒基因6（Pax6）是控制眼和大脑发育的关键基因。Pax6基因突变或表达水平改变导致一系列的眼部疾病。作为转录因子，Pax6在胚胎发育早期多个不同组织原基表达，单独或与其他转录因子共同作用，直接或间接调控不同下游基因的表达来调控眼、大脑、垂体、鼻及胰脏的发育。Pax6存在4种异构体，其功能受多种翻译后修饰的调控。全面认识Pax6的结构与功能及其与各种疾病的关系有助于眼科医师研究其突变或表达改变而引起的相关眼病的病理机制，为相关疾病的防治提供新的思路。 展开更多

关键词 配对盒基因6 转录因子 人 眼部异常基因 突变 基因表达调控 脑发育 眼发育

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草鱼cdx2基因密码子偏好性与进化分析

3

作者 罗君涵 李艳芳 +9 位作者 高星 唐翔 罗雅楠 曾鹏 卿艳玲 王辰浩洋 陈振峰 刘晶 宋梦玲 何志敏 《水产科技情报》 2025年第4期205-213,共9页

为探讨草鱼cdx2基因在进化过程中形成的密码子偏好性及与某些动物的血缘关系,为草鱼cdx2基因的异源表达与分子调控研究提供参考,利用草鱼与其他8种动物(牛、原鸡、智人、小家鼠、塞内加尔多鳍鱼、褐家鼠、野猪、热带蟾蜍)的17个cdx2基因... 为探讨草鱼cdx2基因在进化过程中形成的密码子偏好性及与某些动物的血缘关系,为草鱼cdx2基因的异源表达与分子调控研究提供参考,利用草鱼与其他8种动物(牛、原鸡、智人、小家鼠、塞内加尔多鳍鱼、褐家鼠、野猪、热带蟾蜍)的17个cdx2基因,使用CodonW和EMBOSS软件对密码子的偏好性参数进行统计和分析,然后使用SPSS和MEGA软件对密码子偏好性和基因的聚类进行了分析。结果显示,草鱼cdx2基因密码子偏好性最强的是CUG,9种动物cdx2基因的高频密码子有7个,且均以C/G结尾,最优密码子为CUG。9种动物cdx2基因的有效密码子数(ENC)范围为33.01~58.08个,密码子适应指数(CAI)远小于1,密码子偏好性较弱。自然选择是形成大多数动物cdx2基因密码子使用偏好性的重要驱动力。不同动物之间及同种动物之间,cdx2基因对同义密码子的偏好性均存在不同。动物cdx2基因的同义密码子相对使用度(RSCU值)聚类结果与基于系统进化树的结果近似,但其准确度稍弱于系统进化树。 展开更多

关键词 草鱼 尾型同源盒转录因子cdx2基因 密码子偏好性 进化分析

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PAX3对靶基因MITF转录活性调控的实验研究 被引量：4

4

作者 张华 常尚揆 +3 位作者 冯永 钱敏飞 李吉平 张淳 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期505-509,共5页

目的探讨配对盒基因(pair box 3,PAX3)突变对小眼球畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因转录活性的影响及其在I型Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome,WS)发病中的作用。方法野生型PAX3及... 目的探讨配对盒基因(pair box 3,PAX3)突变对小眼球畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因转录活性的影响及其在I型Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome,WS)发病中的作用。方法野生型PAX3及其致病突变H80D和H186fsX5表达质粒瞬时转染293T细胞,应用荧光素酶活性检测系统对MITF报告基因活性检测,观察野生/突变PAX3蛋白对其靶基因MITF转录活性的调控作用及二个突变蛋白对野生PAX3蛋白功能的影响;应用生物素标记的含序列attaat的DNA寡核苷酸链探针分别沉淀PAX3、H80D和H186fsX5蛋白,检测野生/突变PAX3蛋白与靶基因MITF启动子的结合力。结果尽管H80D蛋白仍残余部分功能可增加MITF启动子转录活性,但与野生PAX3蛋白相比,二者差异有显著统计学意义(P<0.01),而H186fsX5蛋白则完全失去调控MITF启动子转录活性作用(P<0.01);二者均未对野生PAX3蛋白功能产生显性负效应作用(P>0.05)。突变H80D蛋白与野生PAX3蛋白均可与MITF启动子特异DNA序列attaat结合,而突变H186fsX5蛋白则不能与之结合。结论 H80D和H186fsX5影响靶基因MITF转录活性,使其表达下调、黑色素合成减少,以单倍体剂量不足效应致I型WS。 展开更多

关键词 WAARDENBURG综合征 配对盒基因 基因突变 小眼球畸形相关转录因子

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肠道上皮细胞特异转录因子CDX2研究进展 被引量：5

5

作者 冯幼 王修启 江青艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期65-69,共5页

CDX2是一种新发现的肠道上皮细胞特异性核转录因子,在调节肠道基因表达与肠道发育及对肠道上皮细胞分化、增殖方面具有重要调节作用。笔者就有关CDX2的研究进展作一综述。

关键词 肠道上皮 转录因子 CDX2 尾型相关同源盒基因

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肌节同源盒基因同系物2对小鼠晶状体发育的影响 被引量：1

6

作者 赵江月 孙琦 +2 位作者 赵江红 Yi-Hsin Liu 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期265-267,共3页

目的观察肌节同源盒基因同系物2(Msx2)表达缺失后晶状体早期发育过程的变化,探讨Msx2对晶状体早期发育的影响。方法利用Msx2基因敲除小鼠胚胎,采取组织学染色及免疫组织化学方法观察晶状体发育过程中的异常变化及细胞增殖情况。结果Msx... 目的观察肌节同源盒基因同系物2(Msx2)表达缺失后晶状体早期发育过程的变化,探讨Msx2对晶状体早期发育的影响。方法利用Msx2基因敲除小鼠胚胎,采取组织学染色及免疫组织化学方法观察晶状体发育过程中的异常变化及细胞增殖情况。结果Msx2基因敲除后,晶状体的发育受到明显的抑制,晶状体早期发育迟缓,晶状体与角膜组织分离延迟。同时Msx2表达缺失使晶状体细胞溴脱氧尿核苷(BrdU)标记比例下降。结论Msx2基因敲除小鼠晶状体发育出现异常,晶状体发育异常的原因之一是晶状体发育过程中晶状体上皮细胞细胞增殖受到抑制。 展开更多

关键词 晶状体发育 肌节同源盒基因同系物2 转录因子

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转录因子HBP1调控H_2O_2诱导的骨肉瘤细胞生长阻滞过程

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作者 董威 张晓伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期347-353,共7页

为探讨氧化应激对人骨肉瘤细胞增殖的影响及其作用机理,首先用H2O2处理U2OS细胞,采用Western印迹和real-time PCR检测HMG盒转录因子1(HBP1)及其下游靶基因DNMT1和p16表达水平的变化.用荧光素酶报告基因实验检测在H2O2诱导下,HBP1对于DN... 为探讨氧化应激对人骨肉瘤细胞增殖的影响及其作用机理,首先用H2O2处理U2OS细胞,采用Western印迹和real-time PCR检测HMG盒转录因子1(HBP1)及其下游靶基因DNMT1和p16表达水平的变化.用荧光素酶报告基因实验检测在H2O2诱导下,HBP1对于DNMT1和p16启动子的影响.用细胞增殖试验(BrdU掺入,细胞生长曲线)检测H2O2对细胞增殖的影响以及HBP1的作用.用衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测在H2O2诱导的细胞衰老中HBP1所起的作用.Western印迹,real-time PCR及荧光素酶报告基因实验结果显示,细胞经H2O2处理后,明显增高HBP1表达水平,转录抑制DNMT1的表达,促进p16蛋白的表达.细胞增殖实验结果显示,H2O2显著抑制了细胞的增殖,HBP1 knockdown可部分逆转这种抑制作用.SA-β-Gal染色实验说明,H2O2可诱导HBP1表达正常的U2OS细胞衰老,而HBP1 knockdown使这种促衰老作用减弱.研究结果说明,H2O2可抑制人骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞衰老.其作用机制是通过上调转录因子HBP1的表达,转录抑制或促进其下游靶基因DNMT1或p16的表达来抑制细胞增殖,促进细胞衰老. 展开更多

关键词 氧化应激 HMG盒转录因子1(HBP1) 骨肉瘤细胞 基因表达 增殖

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一种来自鹌鹑的同源异型盒基因qBm-1及其应用

8

《家禽科学》 2007年第6期45-45,共1页

内容介绍：本发明提供一种从鹌鹑胚胎cDNA文库中筛选得到的基因qBm-1和该基因编码的转录调节因子、含有上述基因序列的重组载体及其亚克隆和重组微生物．以及由这些亚克隆获得的反义探针。该基因属于一种新的同源异型盒基因，其表达产... 内容介绍：本发明提供一种从鹌鹑胚胎cDNA文库中筛选得到的基因qBm-1和该基因编码的转录调节因子、含有上述基因序列的重组载体及其亚克隆和重组微生物．以及由这些亚克隆获得的反义探针。该基因属于一种新的同源异型盒基因，其表达产物属于一种新的转录调节因子，本领域已部分了解同源异型盒基因及转录调节因子在基因的调控和胚胎发育过程中的重要功能。 展开更多

关键词 同源异型盒基因 鹌鹑 转录调节因子 胚胎发育过程 应用 CDNA文库 重组微生物 基因编码

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中国一先天性无虹膜家系PAX6基因新致病突变位点的筛查及验证 被引量：1

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作者 刘宇莹 刘琼 +3 位作者 万文苹 杨鸽 夏昆 金学民 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期602-606,共5页

背景先天性无虹膜是临床上罕见的先天性遗传性眼病。研究显示，配对盒转录因子6基因（PAX6）与先天性无虹膜症密切相关，但不同患者中PAX6基因的突变位点不同。目的对中国一常染色体显性遗传先天性无虹膜家系进行PAX6基因突变位点分析... 背景先天性无虹膜是临床上罕见的先天性遗传性眼病。研究显示，配对盒转录因子6基因（PAX6）与先天性无虹膜症密切相关，但不同患者中PAX6基因的突变位点不同。目的对中国一常染色体显性遗传先天性无虹膜家系进行PAX6基因突变位点分析。方法于2014年8月在郑州大学第一附属医院收集一汉族先天性无虹膜家系，采集该家系9名成员及同期100名健康体检者的外周静脉血10ml，采用标准酚一氯仿提取法提取基因组DNA，对PCR扩增产物进行测序、对比及突变分析。采用实时荧光定量PCR法验证和比较该家系中患病者与该家系表型正常者和健康对照者淋巴细胞中PAX6mRNA的相对含量。结果该家系共3代9名成员，遗传方式符合常染色体显性遗传。家系中共5例患病者，成年患病者均表现为虹膜缺失和白内障，儿童患病者表现为无虹膜；其他4名家系成员表型正常。测序结果显示，家系患病者均存在11号染色体PAX6基因10号外显子的移码突变，第796位核糖核苷酸G缺失（C．796delG），产生提前终止密码子，而家系正常成员及100名对照者均无此突变。实时荧光定量PCR结果显示，家系中患病者淋巴细胞中PAX6mRNA表达水平比家系中正常成员约低50％，差异有统计学意义（Z=-2．449，P=0．016）。结论PAX6基因C．796delG为此先天性无虹膜家系的致病突变位点，扩增了PAX6基因突变谱。 展开更多

关键词 先天性无虹膜/遗传性 人类第11号染色体/基因 配对盒转录因子/基因 碱基序列 移 码突变 家系 中国人/基因

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烟酰胺单核苷酸对RIN-m5f细胞中胰岛素分泌及PDX-1和FoxO1基因表达的影响(英文) 被引量：3

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作者 盛飞凤 任贤 +7 位作者 戴幸平 徐潇静 董敏 裴奇 屈健 周智广 周宏灏 刘昭前 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期958-963,共6页

目的:在细胞水平研究烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子胰十二指肠同源盒基因(pancreatic and duodenalhomeobox-1,PDX-1)和分叉头框家族转录因子1(forkhead... 目的:在细胞水平研究烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子胰十二指肠同源盒基因(pancreatic and duodenalhomeobox-1,PDX-1)和分叉头框家族转录因子1(forkhead box-containing protein O-1,FoxO1)基因表达的影响。方法:采用大鼠胰岛素ELISA试剂盒检测RIN-m5f细胞胰岛素分泌水平。用Real-time PCR检测RIN-m5f细胞PDX-1和FoxO1的mRNA表达水平。用Western印迹检测RIN-m5f细胞PDX-1蛋白表达水平。结果:用瑞格列奈10 nmol/L+NMN 100μmol/L处理RIN-m5f细胞48 h,与空白对照及DMSO对照组相比,胰岛素分泌量均显著增高(P<0.05);与NMN 50μmol/L组比较,胰岛素分泌量的增高也有统计学意义(P<0.05)。10,50和100μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36 h,PDX-1的mRNA表达量均上调(依次为P<0.05,P<0.01,P<0.001)。100μmol/L剂量组与10μmol/L和50μmol/L剂量组比较差异也有统计学意义(P<0.001)。50,100和200μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36或48 h,PDX-1的蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NMN可以调控RIN-m5f细胞中胰岛素的分泌及PDX-1的mRNA表达水平。 展开更多

关键词 烟酰胺单核苷酸 胰十二指肠同源盒基因 分叉头框家族转录因子1 RIN-m5f

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一管酒精法提取转基因小鼠胚胎组织基因组的实验方法及应用 被引量：2

11

作者 翁敏杰 杜建霖 +4 位作者 蒲荻 张进 李晓群 刘亚杰 佘强 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期328-331,共4页

目的:优化提取基因组的方法,建立高效、简便、快速提取基因组DNA的方法,用于大批量转基因小鼠鉴定。方法:用一管酒精基因组DNA抽提法抽提基因组DNA。结果:经过分光光度法检测基因组DNA浓度、纯度及电泳分析DNA质量,显示一管酒精抽提法... 目的:优化提取基因组的方法,建立高效、简便、快速提取基因组DNA的方法,用于大批量转基因小鼠鉴定。方法:用一管酒精基因组DNA抽提法抽提基因组DNA。结果:经过分光光度法检测基因组DNA浓度、纯度及电泳分析DNA质量,显示一管酒精抽提法提取的基因组与经典酚/氯仿提取法提取的基因组产量、纯度及质量没有明显差别;酶切全基因组后,2种方法获得的基因组都可以被酶完全切开;两者模板都能成功应用PCR扩增来鉴定基因敲入小鼠并可应用于基因组测序及Real-time PCR检测基因敲入小鼠中外源基因并鉴定其相对拷贝数。结论:一管酒精基因组抽提法得到的DNA质量可靠,可高效、简便、快速鉴定转基因小鼠及进行基因组DNA酶切、测序、Real-time PCR等后续实验。 展开更多

关键词 T盒转录因子18 基因敲入 基因组DNA

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Pax6基因突变与胰腺发育和糖尿病发生关系的研究进展

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作者 陆玉凤 刘丽梅 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期663-666,共4页

配对盒因子6(Pax6)基因是Pax多基因转录因子家族成员之一,是与胰腺发育、α细胞分化、高血糖素基因的转录和激活、β细胞功能以及胰岛素表达密切相关的关键转录因子,在众多调节β细胞发育的基因中发挥中心作用,其突变/变异已成为糖耐量... 配对盒因子6(Pax6)基因是Pax多基因转录因子家族成员之一,是与胰腺发育、α细胞分化、高血糖素基因的转录和激活、β细胞功能以及胰岛素表达密切相关的关键转录因子,在众多调节β细胞发育的基因中发挥中心作用,其突变/变异已成为糖耐量异常和早发糖尿病的致病原因或易感位点。该文就Pax6基因突变与胰腺发育及糖尿病发病关系的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 配对盒因子6基因 突变 胰腺发育 糖尿病

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中国一先天性无虹膜家系的遗传分析及PAX6基因突变位点的检测 被引量：4

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作者 张陆希 杨鸽 +3 位作者 贾竞 万文萃 杨鑫 金学民 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期721-725,共5页

背景先天性无虹膜是双眼发病的遗传性疾病，目前的研究表明先天性无虹膜患者配对盒转录因子6（PAX6）基因突变位点具有多样性。目的通过目标序列捕获测序结合一代测序验证技术对1个中国先天性无虹膜家系进行基因突变位点的筛查和遗传分... 背景先天性无虹膜是双眼发病的遗传性疾病，目前的研究表明先天性无虹膜患者配对盒转录因子6（PAX6）基因突变位点具有多样性。目的通过目标序列捕获测序结合一代测序验证技术对1个中国先天性无虹膜家系进行基因突变位点的筛查和遗传分析。方法采用横断面研究方法，本研究组于2016年3月纳入在郑州大学第一附属医院确诊的1个中国汉族先天性无虹膜家系，并对该家系成员进行致病突变基因检测。该家系全体成员均接受神经系统、口服葡萄糖耐量试验等全身体格检查以及眼科相关检查。采集现存家系所有成员前臂静脉血10ml以提取基因组DNA，以先证者基因组DNA为模板行前房角发育异常致病基因的目标基因定点捕获测序分析，经与各基因库比对筛选出候选致病基因位点，采用PCR法对该家系成员行致病基因位点DNA片段扩增，采用Sanger测序技术在该家系除先证者以外的2例患病者和表型正常成员中进行候选致病基因验证。结果该家系共3代9名成员，I1去世，现存8位成员，包括患病者3例（112及其子代Ⅲ1、Ⅲ2）和表型正常者5人，符合常染色体显性遗传模式。所有家系成员未发现神经系统异常，口服葡萄糖耐量试验结果均呈阴性。3例患病者视力均明显下降且不能矫正，眼压平均值为21mmHg（1mmHg=0．133kPa），患者均存在虹膜完全缺如、角膜基质层混浊、眼球水平震颤、黄斑中心凹发育不良症状。此外，Ⅱ2患者存在左眼上睑下垂、右眼先天性白内障表现，Ⅲ2同时存在双眼先天性白内障、双侧晶状体不全脱位。先证者目标序列捕获测序分析及数据库比对显示，所有患病者PAX6基因第6号外显子上碱基替换e．183C〉A，经Sanger测序验证后证实突变基因与表型共分离。结论PAX6基因c．183C〉A突变是该先天性无虹膜家系的致病突变位点。 展开更多

关键词 无虹膜/遗传性 人类第11号染色体/基因 配对盒转录因子6/基因 家系谱 中国人 目标序列捕获测序 无义突变

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HBP1--一种重要的肿瘤抑制因子 被引量：2

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作者 黄金莎 肖蓉 +1 位作者 逄越 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期913-918,共6页

HMG盒转录因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)是高泳动盒蛋白家族中的成员.HBP1是一种转录抑制因子,含有513个氨基酸残基的多肽,可与RB蛋白结合,抑制促细胞分裂基因的表达,从而抑制细胞的增殖.近期工作表明,HBP1转录因子和p38 ... HMG盒转录因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)是高泳动盒蛋白家族中的成员.HBP1是一种转录抑制因子,含有513个氨基酸残基的多肽,可与RB蛋白结合,抑制促细胞分裂基因的表达,从而抑制细胞的增殖.近期工作表明,HBP1转录因子和p38 MAPK信号通路共同参与细胞周期调控细胞早衰及抑制肿瘤的生长.此外,HBP1与Wnt信号通路中的蛋白相互作用抑制肿瘤生长.这些发现可以提供一个新的肿瘤抑制网络,进而可能有助于癌症的诊断和治疗.本文对HBP1在转录阻遏、细胞周期和抑制肿瘤生长等方面进行综述. 展开更多

关键词 HMG盒转录因子1 细胞周期 P38 MAPK通路 WNT信号通路 肿瘤抑制基因

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PAX3基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响及其机制

15

作者 万朝辉 曾良 +1 位作者 李晶 雷长城 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期647-655,共9页

目的:探讨配对盒转录因子3(PAX3)基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响,并阐明其可能作用机制。方法:采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌样细胞分化,观察诱导分化过程中细胞形态表现,并收集诱导分化第0天(0d组)和第10天(10 d组... 目的:探讨配对盒转录因子3(PAX3)基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响,并阐明其可能作用机制。方法:采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌样细胞分化,观察诱导分化过程中细胞形态表现,并收集诱导分化第0天(0d组)和第10天(10 d组)的细胞。采用shPAX3慢病毒感染P19细胞,将细胞分为对照组、sh-NC组(阴性对照)和sh-PAX3组(PAX3干扰),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测PAX3基因沉默的P19细胞构建情况。采用Notch信号激动剂Jagged1处理慢病毒感染后的P19细胞,并采用DMSO诱导分化10 d,将细胞分为DMSO组、DMSO+sh-NC组、DMSO+sh-PAX3组、DMSO+Jagged1组和DMSO+sh-PAX3+Jagged1组。RT-qPCR法检测各组细胞中GATA结合蛋白4(GATA4)、心房利钠尿多肽(ANP)、心肌肌钙蛋白(cTn)T、PAX3、Notch1、Notch胞内结构域(NICD)及Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)mRNA表达水平。Western blotting法检测各组细胞中PAX3、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平。免疫荧光染色法检测各组细胞中cTnI阳性表达情况和心肌样细胞分化率。结果:诱导分化第10天,可观察到自发性节律收缩的心肌样细胞簇。RT-qPCR和Western blotting法检测,慢病毒感染后,与对照组和sh-NC组比较,sh-PAX3组P19细胞中PAX3 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),表明PAX3基因沉默的P19细胞构建成功。RT-qPCR法检测,与0d组比较,10 d组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05),PAX3、Notch1、NICD和Hes1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均降低(P<0.05),DMSO+Jagged1组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+shPAX3+Jagged1组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与0d组比较,10 d组细胞中PAX3、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均降低(P<0.05),DMSO+Jagged1组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+sh-PAX3+Jagged1组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。免疫荧光法检测,慢病毒感染后,各组细胞中均有cTnI蛋白阳性表达,与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中cTnI蛋白阳性表达减少,心肌样细胞分化率降低(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+Jagged1组细胞中cTnI蛋白阳性表达增加,心肌样细胞分化率升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+sh-PAX3+Jagged1组细胞中cTnI蛋白阳性表达增加,心肌样细胞分化率升高(P<0.05)。结论:PAX3基因沉默可抑制P19细胞向心肌样细胞分化,其机制可能是通过降低PAX3基因表达抑制Notch信号通路活化实现的。 展开更多

关键词 P19细胞 配对盒转录因子3 NOTCH信号通路 心肌样细胞

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针刺损伤后修复中的淋巴样结构

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作者 陈丹丹 于宁 +1 位作者 刘然 孟繁伟 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期65-72,共8页

目的观察正常及损伤后小鼠脊髓中淋巴管的分布及特点,探讨脊髓损伤修复过程中有无淋巴管的参与。方法成年雄性KM小鼠39只,小鼠随机分为两组:正常组6只和损伤组33只。将损伤组小鼠随机分为术后1 d组、术后3 d组、术后5 d组、术后7 d组和... 目的观察正常及损伤后小鼠脊髓中淋巴管的分布及特点,探讨脊髓损伤修复过程中有无淋巴管的参与。方法成年雄性KM小鼠39只,小鼠随机分为两组:正常组6只和损伤组33只。将损伤组小鼠随机分为术后1 d组、术后3 d组、术后5 d组、术后7 d组和术后14 d组,每组6只。损伤组部分小鼠针刺损伤后死亡3只,后随机补充样本。正常组不损伤脊髓,损伤组采用针刺法制备脊髓损伤。通过免疫组织化学方法检测脊髓中淋巴管内皮细胞的分布,观察正常及针刺损伤后小鼠脊髓中淋巴管内皮细胞标记物同源异型盒基因转录因子1(prox-1)、淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lyve-1)、平足蛋白(podoplanin)以及血管内皮细胞标记物CD34的表达情况。通过对脊髓样本进行免疫荧光染色,观察lvye-1/prox-1、lyve-1/podoplanin及CD34/prox-1的共表达情况,探讨新生淋巴管内皮细胞的来源。结果正常成年小鼠脊髓中存在淋巴管样结构,并呈节段性分布,横向走行于白质与灰质间;针刺损伤处的脊髓出现新生淋巴管样结构,同时表达prox-1、podoplanin、lyve-1和CD34;脊髓损伤处瘢痕化后,新生的淋巴管样结构消失。结论正常成年小鼠脊髓中存在节段性横向分布的淋巴管样结构;脊髓损伤处重建过程中有新生淋巴管样结构的参与,新生淋巴管内皮细胞可能来源于周围既存的淋巴管或血管内皮细胞。 展开更多

关键词 脊髓损伤 同源异型盒基因转录因子1 淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1 平足蛋白 CD34

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WIF-1阻断WNT通路对PAX2诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化作用的影响 被引量：2

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作者 李里 宫亮 吴玉斌 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期816-820,共5页

目的体外转染配对盒基因2(PAX2)观察其对WNT通路的激活作用,应用WIF-1阻断WNT信号通路后观察WNT通路对PAX2基因诱导转分化的作用,探讨PAX2基因转分化机制。方法应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,... 目的体外转染配对盒基因2(PAX2)观察其对WNT通路的激活作用,应用WIF-1阻断WNT信号通路后观察WNT通路对PAX2基因诱导转分化的作用,探讨PAX2基因转分化机制。方法应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选建立稳定表达PAX2细胞系,将实验细胞分为转染组、空载组和对照组,采用Western blot和实时PCR对各组进行WNT通路分子WNT4及β-catenin表达检测。加入WIF-1至稳定转染PAX2细胞中,分为WIF-1 5μg/mL组、WIF-1 10μg/mL组、WIF-1 15μg/mL组及稳转组。加药后48 h收集细胞,应用免疫荧光法、Western blot和实时PCR检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达。结果 Western blot和实时PCR结果显示,转染组WNT4和β-catenin蛋白和mRNA表达水平较空载组及对照组明显增加(P<0.05)。免疫荧光法、Western blot和实时PCR结果显示,WIF-1 5μg/mL组、WIF-1 10μg/mL组和WIF-1 15μg/mL组β-catenin和α-SMA蛋白及mRNA表达较稳转组下调(P<0.05),WIF-1 15μg/mL组下降明显,各浓度WIF-1组E-cadherin蛋白及mRNA较稳转组明显上调(P<0.05),WIF-1 15μg/mL组明显。结论 PAX2基因可以在体外肾小管上皮细胞激活WNT通路。应用WIF-1阻断WNT通路后出现转分化逆转。推测PAX2基因可能通过WNT通路诱导上皮细胞间充质转分化。 展开更多

关键词 配对盒基因2 肾小管上皮细胞 转分化 WNT抑制因子1

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组织PBX2/ELF2表达水平与非小细胞肺癌患者预后相关性分析

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作者 金淑清 浦予飞 +2 位作者 裘莹 青笹克之 森井英一 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期413-419,共7页

目的：检测前B细胞白血病转录因子-2（PBX2）／Ets家族转录因子-2（ELF2）的表达，探讨PBX2／ELF2表达与非小细胞肺癌（NSCLC）预后的关系。方法：对206例NSCLC手术切除标本进行ELF2、PBX2的免疫组织化学染色，采用χ^2检验、Fisher确... 目的：检测前B细胞白血病转录因子-2（PBX2）／Ets家族转录因子-2（ELF2）的表达，探讨PBX2／ELF2表达与非小细胞肺癌（NSCLC）预后的关系。方法：对206例NSCLC手术切除标本进行ELF2、PBX2的免疫组织化学染色，采用χ^2检验、Fisher确切检验、Cox’s回归等统计学方法分析比较PBX2／ELF2共表达与缬酪肽包含蛋白（VCP）表达、肿瘤浸润、转移、患者预后等的关系。结果：PBX2／ELF2表达与VCP表达高度相关（P=0．0126）。单变量分析PBX2表达、PBX2／ELF2表达、VCP表达、肿瘤直径、组织分化程度、胸膜转移、浸润深度、区域淋巴结转移、临床分期与NSCLC患者5年无病生存率、总体生存率相关（均P〈0．05），5年总体生存率与血管侵袭也相关（P=0．0322）；多变量分析显示PBX2／ELF2表达、组织分化程度是NSCLC预后的独立相关因子。结论：PBX2／ELF2表达与VCP表达呈正相关，PBX2／ELF2-VCP通路与NSCLC患者预后相关。 展开更多

关键词 PBX2 ELF2 非小细胞肺/病理学 转录因子 基因 同源盒 基因表达 预后 免疫组织化学

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