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题名猪圆环病毒2型遗传标记毒株的构建及生物学特性鉴定
被引量：8
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作者
刘长明
危艳武
张超范
谭斌
陆月华
孔宪刚
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机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室
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出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期609-613,共5页
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基金
人事部高层次留学人才回国工作资助项目(2005)
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文摘
以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料,利用PCR法扩增病毒基因组,将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ限制性内切酶位点作为遗传标记,经重组质粒转染细胞获得带有遗传标记的新毒株。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫电镜、核酸序列分析表明,在病毒感染细胞中检出病毒特异抗原,其抗原性、病毒形态学及基因序列与亲本毒株一致。鉴于新病毒基因组内插入一个SalⅠ酶切位点,用PCR与限制性片段长度多态性分析法可与野生型病毒相鉴别。新毒株经细胞连续传60代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达10^(6．6)TCID_(50)/mL。取病毒培养物经静脉和滴鼻途径接种35日龄抗体阴性仔猪4头,接种后表现出体温升高、进行性消瘦、被毛粗糙及体表淋巴结肿胀症状,迫杀后多种脏器中均能检测到病毒抗原与核酸。研究表明,利用感染性分子克隆手段构建带有遗传标记的PCV2新毒株,为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、分子诊断等研究奠定了基础。
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关键词
猪圆环病毒2型
遗传标记病毒
生物学特性
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Keywords
porcine circovirus type 2
genetic marker virus
biological characters
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分类号
S852.659.2
[农业科学—基础兽医学]
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