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虹鳟传染性造血器官坏死病-传染性胰腺坏死病重组腺病毒载体的构建
1
作者 李守湖 张雪青 石建高 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2024年第1期86-95,共10页
传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病是以感染鲑科鱼类为主的两种传染病。为克隆传染性造血器官坏死病病毒IHNVG基因和传染性胰腺坏死病病毒IPNVVP2基因,并构建其重组腺病毒载体。利用RT-PCR方法分别扩增出IHNVG基因和IPNVVP2基因,... 传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病是以感染鲑科鱼类为主的两种传染病。为克隆传染性造血器官坏死病病毒IHNVG基因和传染性胰腺坏死病病毒IPNVVP2基因,并构建其重组腺病毒载体。利用RT-PCR方法分别扩增出IHNVG基因和IPNVVP2基因,通过多基因片段同源重组技术将IHNVG基因和IPNVVP2基因克隆到pAdTrack-CMV载体上,经过线性化后与pAdEasy-1载体在BJ5183菌体内同源重组,构建出重组腺病毒质粒,经PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后,再经PacⅠ线性化后用于转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒。通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达来监控重组腺病毒的复制情况,用western blot法分别检测糖蛋白(G蛋白)和VP2蛋白的表达,并测定重组病毒的滴度。结果显示,克隆出的IHNVG基因和IPNVVP2基因总长度为3036 bp。该病毒在HEK-293细胞中分别表达出蛋白分子质量约为58 kD和54 kD的产物,其滴度为1.0×10^(9.5)mL^(-1)TCID_(50)。结果表明,研究成功获得IHNVG基因和IPNVVP2基因重组腺病毒,该病毒在HEK-293细胞中滴度较高,能够稳定表达。研究结果为下一步研发传染性造血器官坏死病-传染性胰腺坏死病二联疫苗奠定了基础,并为进一步防控传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病提供了参考。 展开更多
关键词 虹鳟 传染性造血器官坏死病 传染性胰腺坏死病 G基因 VP2基因 腺病毒载体
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传染性造血器官坏死病毒糖蛋白抗血清的制备及应用 被引量：6
2
作者 朱旭 兰文升 +3 位作者 刘荭 高隆英 杜鹃 陈孝煊 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期112-117,共6页
应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从传染性造血器官坏死病毒(Infectious hemato-poietic necrosis virus,IHNV)感染的细胞悬液克隆病毒的糖蛋白基因,将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖... 应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从传染性造血器官坏死病毒(Infectious hemato-poietic necrosis virus,IHNV)感染的细胞悬液克隆病毒的糖蛋白基因,将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖蛋白。经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化并透析复性,最终得到了较高纯度的可溶性糖蛋白,分子量约为57kDa。Western-blot分析结果显示,所表达的蛋白能够被IHNV病毒制备的兔抗IHNV血清识别。用复性后的蛋白免疫小鼠制备抗血清,ELISA显示抗体效价可达1∶64000。经制备的抗血清可以作为一抗建立ELISA检测方法,用于检测细胞悬液的病毒粒子,将抗血清稀释到1∶16000仍能与IHNV全病毒发生反应。本研究利用重组的IHNV糖蛋白成功制备了高效价的抗血清,并能够与IHNV全病毒发生特异性结合,为IHNV免疫学检测方法建立奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死症病毒 糖蛋白 原核表达 抗血清
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重离子射线照射后家蚕胚胎造血器官的修复再生 被引量：2
3
作者 徐世清 木口憲爾 +3 位作者 凌尔军 白井孝治 深本花菜 屠振力 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期143-147,共5页
为了研究重离子射线照射后家蚕造血器官的修复再生作用,用碳离子射线局部照射家蚕接近孵化时紧贴翅原基内侧的胚胎造血器官,局部细微手术损伤造血器官,观察了对幼虫造血功能的影响,了解了造血器官的修复程度。100Gy以上剂量照射,家蚕出... 为了研究重离子射线照射后家蚕造血器官的修复再生作用,用碳离子射线局部照射家蚕接近孵化时紧贴翅原基内侧的胚胎造血器官,局部细微手术损伤造血器官,观察了对幼虫造血功能的影响,了解了造血器官的修复程度。100Gy以上剂量照射,家蚕出现变态困难,幼虫和蛹的生存率下降,眠中、化蛹或羽化时期出现死亡个体等缺血生理障碍,其影响程度随射线剂量增加而加重。200Gy照射组5龄存活幼虫血细胞含量下降,但其中部分个体的血细胞含量接近对照未照射处理,其体内出现了再生的造血器官。家蚕幼虫有很强的修复再生造血器官功能。 展开更多
关键词 重离子射线照射 家蚕 胚胎 造血器官 修复再生 局部细微手术 放射损伤
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常规PCR、实时定量PCR检测传染性皮下及造血器官坏死病毒的效果分析 被引量：6
4
作者 周优 岳志芹 +6 位作者 梁成珠 徐彪 朱来华 高宏伟 孙敏 刘荭 汪东风 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2008年第2期90-96,共7页
对虾传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)可感染世界各地养殖对虾,给对虾养殖业造成严重经济损失。本实验首次采用实时定量PCR法对广西地区的84份凡纳滨对虾样品进行检测,同时以常规PCR检测作对照。实时定量PCR检测阳性率为79·8%... 对虾传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)可感染世界各地养殖对虾,给对虾养殖业造成严重经济损失。本实验首次采用实时定量PCR法对广西地区的84份凡纳滨对虾样品进行检测,同时以常规PCR检测作对照。实时定量PCR检测阳性率为79·8%,常规PCR检测阳性率为40·5%,表明广西地区养殖的凡纳滨对虾IHHNV的感染率较高。将二者检测均呈阳性的30份样品扩增产物进行序列分析测序,测序结果通过DNA STAR软件包进行分析,并通过NCBI Blast与GenBank中的序列进行比对。结果证明,测定的是IHHNV序列。30份样品的IHHNV序列很保守,可以分为4种类型,仅有两个碱基的位置发生变异。实时定量PCR检测IHHNV,快速、灵敏、准确,特异性好,可以作为检测对虾感染病毒的有效方法。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV) 实时定量PCR 常规PCR 测序
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聚六亚甲基胍对异育银鲫造血器官坏死症的防治效果研究 被引量：3
5
作者 俞军 孙琪 +4 位作者 王会聪 蒋新益 胡鲲 杨先乐 黄保华 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2015年第4期49-55,共7页
分别采用腹腔注射含鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirusⅡ,Cy HV-2)的组织浆和患病鱼直接感染的方法进行人工感染实验,并对实验鱼发病组织病毒DNA进行巢式PCR检测,将扩增产物进行测序比对,研究聚六亚甲基胍(Polyhexamethylene guanide... 分别采用腹腔注射含鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirusⅡ,Cy HV-2)的组织浆和患病鱼直接感染的方法进行人工感染实验,并对实验鱼发病组织病毒DNA进行巢式PCR检测,将扩增产物进行测序比对,研究聚六亚甲基胍(Polyhexamethylene guanide,PHMG)对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)感染鲫造血器官坏死症(Crucian Carp Hematopoietic Necrosis)的防治效果。结果显示:两种人工感染的方法出现相似的感染症状,但后者感染周期相对较短;实验毒株与Gen Bank中已报道的Cy HV-2毒株的DNA解旋酶基因具有高度同源性(99.0%),该毒株与JSSY、YC110907等Cy HV-2其他病毒株属同一分支。药物预防实验表明:当PHMG浓度≥0.5 m L/m3时,保护率可达60%以上,对该病有显著抑制作用。治疗实验表明,药物对感染3 d后的鲫具有显著抑制作用,当PHMG浓度≥0.75 m L/m3时,保护率达63.33%以上,对该病有较好的治疗效果;当PHMG浓度≥2.5 m L/m3时,对感染5 d后的鲫具有显著抑制作用,保护率达63.33%以上。低浓度的药物治疗效果虽不显著,但可延长病鱼的存活时间。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒Ⅱ型 聚六亚甲基胍 异育银鲫(Carassius auratus gibelio) 鲫造血器官坏死症 防治
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鱼类造血器官坏死病病毒检测及其防控研究进展 被引量：5
6
作者 孙红岩 刘文青 赵宝华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期90-94,共5页
造血器官坏死病病毒(IHNV)为线性单链RNA病毒,是鱼类病毒性病原体的一种,能引起野生及养殖鲑鱼或鳟鱼的急性系统病。鱼类感染该病毒后会造成内脏器官的坏死,引起死亡。造血器官坏死病(IHV)是鱼类病害中较为难治的一种病毒病,截止到目前... 造血器官坏死病病毒(IHNV)为线性单链RNA病毒,是鱼类病毒性病原体的一种,能引起野生及养殖鲑鱼或鳟鱼的急性系统病。鱼类感染该病毒后会造成内脏器官的坏死,引起死亡。造血器官坏死病(IHV)是鱼类病害中较为难治的一种病毒病,截止到目前为止还没有有效的治疗方法。对IHN的防控,主要集中在预防及对IHNV的分子生物学特性研究方面;根据病毒生物学特性开发出有效的防控方法成为目前主要的研究重点。论文主要阐述了IHNV的分子生物学特征以及传染性造血器官坏死(Infectious hematopoietic necrosis,IHN)的临床症状等,综合近几年国内外对IHNV的研究现状,介绍了几种包括细胞培养、PCR、LAMP等技术在内的几种快速有效的IHNV检测技术,以及病毒疫苗、免疫佐剂、病毒干扰物等在内的主要防控方法。 展开更多
关键词 造血器官坏死病病毒 检测 预防
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传染性造血器官坏死病毒的新型环介导等温扩增(LAMP)荧光检测技术 被引量：7
7
作者 何俊强 史秀杰 +6 位作者 卢体康 贾鹏 郑晓聪 于力 兰文升 王津津 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2014年第6期68-73,共6页
本研究建立了一种检测传染性造血器官坏死病毒（IHNV）的新型荧光环介导等温扩增法,为实验室及现场检测IHNV提供特异性强、灵敏度高、快速、能实时观察扩增荧光信号的检测技术。针对IHNV全基因组序列设计了一组6条LAMP特异性引物,对4株... 本研究建立了一种检测传染性造血器官坏死病毒（IHNV）的新型荧光环介导等温扩增法,为实验室及现场检测IHNV提供特异性强、灵敏度高、快速、能实时观察扩增荧光信号的检测技术。针对IHNV全基因组序列设计了一组6条LAMP特异性引物,对4株不同来源的IHNV和8株不同的病毒进行特异性实验和灵敏度实验,结果表明该方法具有高度特异性,检测灵敏度可达3.64×10^-7μg/μL,比常规RT-PCR高1000倍,与荧光RT-PCR方法相当。通过环介导等温扩增技术（LAMP）和荧光检测技术相结合,使其检测时间能缩短至15～20分钟内完成检测,并可杜绝由于开盖加染料而导致的假阳性率偏高问题,在鱼病快速检测上具有重要意义。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒(IHNV) 环介导等温扩增(LAMP) 荧光检测
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传染性造血器官坏死病毒抗原表位富集区的原核表达及应用 被引量：2
8
作者 陶健 徐黎明 +5 位作者 刘淼 赵景壮 曹永生 卢彤岩 尹家胜 刘红柏 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2015年第2期49-55,共7页
以传染性造血器官坏死病毒Sn1203株(IHNV-Sn1203)基因组RNA提取物为模板,利用生物信息学软件分析,通过RT-PCR一步法扩增截短的G蛋白基因序列(约375 bp),将其克隆到表达载体p ET-27b中,构建重组表达质粒p ET-27b-IHNV-short G,通过大肠杆... 以传染性造血器官坏死病毒Sn1203株(IHNV-Sn1203)基因组RNA提取物为模板,利用生物信息学软件分析,通过RT-PCR一步法扩增截短的G蛋白基因序列(约375 bp),将其克隆到表达载体p ET-27b中,构建重组表达质粒p ET-27b-IHNV-short G,通过大肠杆菌Rosetta表达菌株获得高效表达。在IPTG浓度为0.25 mmol/L时,37℃诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析显示目的蛋白相对分子质量约为14 000,符合预期大小,并以包涵体的形式表达,4 h时目的蛋白表达量最大。蛋白经变性、复性处理后获得不带任何标签的纯化蛋白,并利用该蛋白制备兔抗血清。ELISA结果显示,兔抗血清的效价为1∶80 000,说明制备的兔抗血清能够识别表达的重组蛋白;间接免疫荧光结果表明兔抗G蛋白血清具有良好的特异性,并且与VHSV参考毒株没有任何交叉反应。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒 G蛋白 原核表达 抗血清
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二温式PCR检测对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒的研究 被引量：4
9
作者 庞耀珊 谢芝勋 +2 位作者 邓显文 唐小飞 刘加波 《水利渔业》 北大核心 2007年第1期94-95,共2页
根据对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列,设计了1对可以扩增356 bp IHH-NV某段基因序列的特异性引物,优化建立了能快速检测IHHNV的二温式PCR。特异性试验和敏感性试验结果表明,该技术只对IHHNV DNA模板进行扩增,得到356 b... 根据对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列,设计了1对可以扩增356 bp IHH-NV某段基因序列的特异性引物,优化建立了能快速检测IHHNV的二温式PCR。特异性试验和敏感性试验结果表明,该技术只对IHHNV DNA模板进行扩增,得到356 bp的DNA扩增片段,而对SPF南美白对虾组织DNA和其它对虾病原DNA/RNA的扩增结果为阴性;该技术最低能检测到10 pg的IHHNV感染对虾组织样品总DNA。应用该技术对400份对虾临床样品进行检测,结果有96份样品呈现阳性,表明该病在我国南方的养殖对虾中广泛存在,二温式PCR技术可以直接用于该病的临床快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 对虾 传染性皮下和造血器官坏死病毒
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金鱼造血器官坏死病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：3
10
作者 张旻 王姝 +3 位作者 王娜 景宏丽 徐立蒲 吴绍 《中国动物检疫》 CAS 2017年第11期99-103,共5页
金鱼造血器官坏死病毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus,GFHNV)是一种可感染金鱼等鲤科鱼类,并可导致其死亡的疱疹病毒。为了快速检测病原,本研究根据GFHNV的主要衣壳蛋白(Major captor protein,MCP)序列中的一段保守基因序列,... 金鱼造血器官坏死病毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus,GFHNV)是一种可感染金鱼等鲤科鱼类,并可导致其死亡的疱疹病毒。为了快速检测病原,本研究根据GFHNV的主要衣壳蛋白(Major captor protein,MCP)序列中的一段保守基因序列,设计引物和Taq Man探针,建立了GFHNV特异性的实时荧光定量PCR检测方法 ;并利用PCR反应扩增出的MCP基因,制备了p UC-GFHNV重组质粒作为阳性对照。经试验,该方法检测限最低可达10个拷贝数的目的基因,而且与锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)、甲鱼虹彩病毒(Softshell turtle iridovirus,STIV)、流行性造血器官坏死病毒(Epizootic haematopoietic necrosis,EHNV)、斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus,CCV)以及白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)等5种水生动物病毒无交叉反应。该方法具有简便、快速、敏感、特异等优点,为该病的诊断与病原检测提供了一个重要手段。 展开更多
关键词 鱼类病毒病 金鱼造血器官坏死病毒 主要衣壳蛋白 实时荧光定量PCR TAQMAN探针
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实时荧光定量PCR法检测对虾皮下和造血器官坏死病毒 被引量：2
11
作者 任聪 陈信忠 +2 位作者 龚艳清 徐菽菲 王寿昆 《中国动物检疫》 CAS 2009年第2期38-41,共4页
应用实时荧光定量PCR最常用的TaqMan探针技术设计了探针和引物,并且用质粒技术构建了含有传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)基因片段的阳性质控品,建立了检测IHHNVV的实时荧光定量PCR方法。对影响PCR的主要因素进行了优化,Mg2+浓度... 应用实时荧光定量PCR最常用的TaqMan探针技术设计了探针和引物,并且用质粒技术构建了含有传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)基因片段的阳性质控品,建立了检测IHHNVV的实时荧光定量PCR方法。对影响PCR的主要因素进行了优化,Mg2+浓度、引物和探针浓度、退火温度等均对扩增效率有明显影响。当Mg2+浓度为3.0-4.5mmol,退火温度为59～60℃时可获得最佳扩增效果。灵敏性试验表明该反应可检测体系中10拷贝的病毒核酸;该体系检测IHHNV具有很高特异性;对临床样品检测结果表明,该方法能快速、准确地检测样品中的IHHNV。 展开更多
关键词 传染性皮下及造血器官坏死病毒 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR
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传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析 被引量：1
12
作者 谢三磊 温书香 +6 位作者 罗琳 马志宏 李桂萍 李铁梁 姜娜 邢薇 孙惠玲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第3期854-860,共7页
为研究传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)主要结构蛋白糖蛋白(G),本研究采用RT-PCR方法从IHNV中提取RNA并进行反转录,经PCR方法扩增获得1 380bp的G蛋白基因片段,将其克隆到pFB-LIC-Bse杆状病毒... 为研究传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)主要结构蛋白糖蛋白(G),本研究采用RT-PCR方法从IHNV中提取RNA并进行反转录,经PCR方法扩增获得1 380bp的G蛋白基因片段,将其克隆到pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,成功构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-G,转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得了重组杆粒rBacmid-G。将重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒。间接免疫荧光(IFA)和Western blotting分析显示,重组G蛋白可与抗组氨酸单抗(Anti-His)、抗IHNV鼠血清发生特异性反应,表明本研究克隆的IHNV G蛋白在真核表达系统中得到正确表达,且该蛋白具有良好的抗原性。本试验结果为研究G蛋白的功能及开发IHNV新型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病病毒 糖蛋白 重组杆状病毒
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传染性造血器官坏死病进境风险分析 被引量：1
13
作者 景宏丽 刘晓飞 +7 位作者 梅琳 仇松寅 徐立蒲 张舟 张旻 王娜 袁向芬 吴绍强 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期40-45,共6页
为评估传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)随国际贸易传入我国的风险,按照世界动物卫生组织(WOAH)动物卫生风险评估框架,从危害识别、风险评估及风险管理3个方面开展风险分析。结果显示:IHNV随... 为评估传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)随国际贸易传入我国的风险,按照世界动物卫生组织(WOAH)动物卫生风险评估框架,从危害识别、风险评估及风险管理3个方面开展风险分析。结果显示:IHNV随活易感鱼类(包括亲鱼、鱼卵和鱼苗)和鲜活饵料鱼类(野杂鱼)传入的风险为“高”;随非易感鱼类及运输活鱼的水、包装、运输工具和用具等传入的风险为“很低”;随食用易感鱼类(包括活的、冷冻的、冰鲜的以及鱼肉)和易感鱼加工产品传入的风险为“可忽略”。根据以上风险评估结果提出相应风险管理措施:不从疫区进口高风险产品,低风险产品可以自由贸易,对来自疫区的非易感鱼类和运输活鱼的水、包装、运输工具和用具实施消毒。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒 进境 风险分析 风险管理
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传染性造血器官坏死病毒(IHNV)实时荧光环介导等温扩增快速检测方法的建立 被引量：1
14
作者 陈进会 唐大运 +5 位作者 黄伟 邱杨 刘建丽 叶蕾 石磊 李红梅 《中国动物检疫》 CAS 2013年第12期53-58,共6页
建立了一套基于环介导等温扩增技术(LAMP)的实时荧光检测方法,用于IHNV的检测。根据IHNV的保守基因glyG,设计合成3套LAMP引物,LAMP反应在63℃下进行,引入环引物后,第3套LAMP引物显示出良好的扩增效率。以ESE-Quant tube scanner为恒温... 建立了一套基于环介导等温扩增技术(LAMP)的实时荧光检测方法,用于IHNV的检测。根据IHNV的保守基因glyG,设计合成3套LAMP引物,LAMP反应在63℃下进行,引入环引物后,第3套LAMP引物显示出良好的扩增效率。以ESE-Quant tube scanner为恒温反应及检测平台,对IHNV进行实时荧光检测,反应在40 min内可得出结果。本研究建立的IHNV实时荧光LAMP法检测限达到3.6 pg。特异性试验表明仅IHNV发生特异性扩增,而SVCV、VHSV、HRV、PFRV以及IPNV均不发生反应。所建立的恒温实时荧光检测法操作简单、反应迅速,同时具有较高的灵敏度和特异性。引入的ESE-Quant tube scanner平台设备要求低,同时使扩增过程数字化和自动化,适合IHNV的现场检测和大规模疫病的监控。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒 环介导等温扩增 恒温实时荧光 ESE Quanttube SCANNER
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传染性造血器官坏死病毒液相芯片检测技术 被引量：1
15
作者 尹伟力 林超 +4 位作者 刘宁 贾鹏 岳志芹 孙涛 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2015年第4期63-67,71,共6页
用DNAStar7.0软件对GenBank中IHNV的N基因进行序列分析,设计IHNV特异性引物并标记生物素,将探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号,建立了传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的液相芯片快速... 用DNAStar7.0软件对GenBank中IHNV的N基因进行序列分析,设计IHNV特异性引物并标记生物素,将探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号,建立了传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的液相芯片快速检测技术。结果表明液相芯片检测体系对IHNV病毒核酸的最低检出量为100pg,且特异性高,与其他病毒无交叉反应。应用建立的液相芯片技术检测鱼类中IHNV,并与RT-PCR方法进行比较,检测结果基本一致,但该方法比RT-PCR法更灵敏。表明初步建立了检测IHNV的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体快速高通量检测平台提供参考。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒 液相芯片 检测
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泰国输华斑节对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒的检测与分析
16
作者 于力 刘莹 +4 位作者 郑晓聪 王津津 贾鹏 何俊强 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2016年第6期83-85,89,共4页
为研究进口斑节对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus,IHHNV)的风险,本文采用了世界动物卫生组织(OIE)2015版手册中推荐的PCR方法,对2015年从泰国输华的329批次斑节对虾进行了IHHN... 为研究进口斑节对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus,IHHNV)的风险,本文采用了世界动物卫生组织(OIE)2015版手册中推荐的PCR方法,对2015年从泰国输华的329批次斑节对虾进行了IHHNV检测分析。结果发现,其阳性率高达36.8%,且主要是感染1型和2型,以及风险不明的未知型。因此,来自泰国的斑节对虾具有较高的IHHNV传入风险,应加强针对IHHNV的进口监测,减少其对我国对虾养殖的影响。 展开更多
关键词 传染性皮下和造血器官坏死病毒 斑节对虾 未知基因型 风险
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流行性造血器官坏死病病毒MCP蛋白表达
17
作者 刘宁 高志强 +7 位作者 高隆英 谷强 刘朋朋 江育林 景宏丽 张旻 张利峰 刘金华 《中国动物检疫》 CAS 2013年第9期72-76,共5页
采用RT-PCR方法克隆流行性造血器官坏死病病毒CH-1株MCP蛋白基因编码区,进而将膜外区编码基因片段,克隆于pET-32a,重组质粒pET-32a-MCP转化ROSETTA(DE3),经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blot试验证明表达产... 采用RT-PCR方法克隆流行性造血器官坏死病病毒CH-1株MCP蛋白基因编码区,进而将膜外区编码基因片段,克隆于pET-32a,重组质粒pET-32a-MCP转化ROSETTA(DE3),经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blot试验证明表达产物具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 流行性造血器官坏死 蛋白表达 RT-PCR
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2018-2022年鲫造血器官坏死病病原检测能力验证结果分析
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作者 王娜 余卫忠 +5 位作者 张旻 景宏丽 王彩霞 冯春燕 李清 吴绍强 《中国渔业质量与标准》 2023年第4期39-44,共6页
通过开展鲫造血器官坏死病(CHN)病原检测能力验证,不断提高中国鲫造血器官坏死病病原检测的整体水平,加强相关实验室鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)检测能力,2018—2022年期间开展了5次该能力验证项目。能力验证样品经均匀性和稳定性检验后,随... 通过开展鲫造血器官坏死病(CHN)病原检测能力验证,不断提高中国鲫造血器官坏死病病原检测的整体水平,加强相关实验室鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)检测能力,2018—2022年期间开展了5次该能力验证项目。能力验证样品经均匀性和稳定性检验后,随机组合成每组4份样品发放。依据GB/T 36194—2018《金鱼造血器官坏死病毒检测方法》中推荐的聚合酶链式反应(PCR)方法进行检测,并对各参加单位提交的检测结果进行评价。2018—2022年全国共有411家/次实验室参加,测试结果满意率依次为86.57%、83.10%、86.50%、87.74%和85.86%。能力验证统计结果表明,大部分实验室具备了鲫造血器官坏死病病原检测能力和质量管理水平,可以承担该病原的检测和监测工作,为鲫造血器官坏死病监测预警提供了有力支撑。 展开更多
关键词 鲫造血器官坏死病 鲤疱疹病毒2型 能力验证 样品均匀性 样品稳定性
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传染性造血器官坏死病毒毒株核蛋白基因片段的克隆及序列分析 被引量：6
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作者 韩硕 赵前程 +2 位作者 吴斌 李叶 王玫 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期232-237,共6页
利用RTG-2细胞对传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的敏感性对IHNV-DL进行扩增,采用TR-Izol法提取病毒RNA,用IHNV核蛋白基因的一对通用引物进行RT-PCR扩增,将扩增出的一条786 bp的基因纯化、克隆至pMD18-T载体中进行序列测定,并与国内外已... 利用RTG-2细胞对传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的敏感性对IHNV-DL进行扩增,采用TR-Izol法提取病毒RNA,用IHNV核蛋白基因的一对通用引物进行RT-PCR扩增,将扩增出的一条786 bp的基因纯化、克隆至pMD18-T载体中进行序列测定,并与国内外已公布的病毒核蛋白基因进行比对和分析。结果表明:此病毒的核酸序列与标准毒株RB-1、代表毒株WRAC的同源性分别为96.3%和93.6%;翻译出的氨基酸序列与标准毒株RB-1、代表毒株WRAC的同源性分别为96.1%和93.5%。系统进化树分析结果表明,此毒株与中国近期公布的毒株zyx有密切的亲缘关系。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒 纯化 克隆 序列分析
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国外传染性造血器官坏死病的研究概况(3)
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作者 叶金云 杨国梁 顾志敏 《湖南水产》 1987年第3期42-44,共3页
Clark和Soriano曾报导了一些有趣的工作。他们描述了IHN病毒及两种其它鱼类的病毒(SVC和VHS)在非鱼类细胞培养物中的复制现象。这些病毒能在人体两倍体细胞株WI—38，在BHK／21以及一种或多种爬行类动物的细胞系中杂制，并产生CPE。SVS... Clark和Soriano曾报导了一些有趣的工作。他们描述了IHN病毒及两种其它鱼类的病毒(SVC和VHS)在非鱼类细胞培养物中的复制现象。这些病毒能在人体两倍体细胞株WI—38，在BHK／21以及一种或多种爬行类动物的细胞系中杂制，并产生CPE。SVS和VHS病毒在BHK／21细胞中复制的最适温度与在变温脊椎动物细胞培养物中测得的结果相一致。作者们指出， 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病 IHN病毒 结构蛋白 鱼病 免疫学性质
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