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酶联免疫印迹法对弓形虫速殖子功能性抗原分析
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作者 张艳 刘宗文 +3 位作者 杨柳萍 冯祖梅 史崇敏 张维艳 《河南医科大学学报》 1999年第2期57-59,共3页
研究弓形虫功能性抗原,为开发弓形虫病诊断试剂及疫苗提供理论基础。方法:采用十二烷基硫 酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹方法,对弓形虫抗原及弓形虫速殖子抗原中能与免疫兔血清和 弓形虫抗体阳性人血清起... 研究弓形虫功能性抗原,为开发弓形虫病诊断试剂及疫苗提供理论基础。方法:采用十二烷基硫 酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹方法,对弓形虫抗原及弓形虫速殖子抗原中能与免疫兔血清和 弓形虫抗体阳性人血清起特异性反应的抗原组分进行分析。结果:弓形虫速殖子抗原的蛋白组分在SDS-PAGE中 用125 g/L的分离胶可产生较好的分辨率,分离出 30多条区带。免疫印迹分析表明 2种抗血清均能特异地识别弓 形虫速殖子抗原,共同识别的抗原组分相对分子质量为 43 000、33 000、27 000、14 000。结论:这些抗原组分是诱导 宿主产生对弓形虫感染免疫应答的功能性抗原。 展开更多
关键词 免疫印迹 弓形虫 速殖子抗原 免疫血清 SDS-PAGE
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弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答 被引量:17
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作者 高世同 吴少庭 +3 位作者 龙彩虹 张仁利 袁仕善 黄达娜 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第8期658-661,共4页
目的 构建弓形虫主要速殖子表面抗原 2 (SAG2 )编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2 ,并接种小鼠 ,分析其所诱导的免疫应答。方法 以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒 pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段 ,约5 92个bp ,将其插入... 目的 构建弓形虫主要速殖子表面抗原 2 (SAG2 )编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2 ,并接种小鼠 ,分析其所诱导的免疫应答。方法 以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒 pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段 ,约5 92个bp ,将其插入真核表达载体 pVAX1多克隆位点 ,构建重组质粒 pVAX1-SAG2 ,并转化大肠杆菌JM 10 9,阳性克隆以双酶切与PCR法鉴定。大量提取纯化重组质粒 pVAX1-SAG2 ,5 0 μg肌肉注射小鼠左后腿内侧肌肉 ,3周后加强免疫一次 ;RT-PCR检测SAG2在小鼠肌肉中的转录表达 ,流式细胞仪测定T细胞亚群 ,以速殖子虫体抗原作ELISA测定小鼠血清IgG抗体。结果 真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符合。RT -PCR从注射部位肌肉组织总RNA中扩增出SAG2目的基因条带 ;重组质粒 pVAX1-SAG2免疫组CD+ 4 细胞数为 32 .35± 5 .38,显著高于空质粒pVAX1及生理盐水 (NS)二对照组 (P <0 .0 1) ,后二者CD+ 4 细胞数分别为 19.6 5± 4 .2 1与 17.84± 1.5 9;免疫组CD+ 8细胞数为 18.6 7± 2 .37,但与空质粒及NS对照组相比 ,差别不显著 (P >0 .0 5 )。ELISA测定结果显示 pVAX1/SAG2免疫组小鼠血清中出现抗弓形虫特异性IgG抗体。结论 构建成功SAG2真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2 。 展开更多
关键词 弓形虫 主要表面抗原2基因 DNA接种 免疫应答
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