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3种细胞穿透肽对体外转录mRNA的递送效果
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作者 王军华 罗画叶 +1 位作者 张翠玲 李军伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第4期35-39,44,共6页
为了开发合适的mRNA递送载体,本试验采用体外转录、加帽、加尾修饰及氯化锂(LiCl)纯化的方法获得具有生物活性的绿色荧光蛋白mRNA(mRNA-EGFP),然后用合成的3种细胞穿透肽(RVG、RVG9dR、RVG11dR)进行递送。先通过凝胶阻滞试验确定mRNA与... 为了开发合适的mRNA递送载体,本试验采用体外转录、加帽、加尾修饰及氯化锂(LiCl)纯化的方法获得具有生物活性的绿色荧光蛋白mRNA(mRNA-EGFP),然后用合成的3种细胞穿透肽(RVG、RVG9dR、RVG11dR)进行递送。先通过凝胶阻滞试验确定mRNA与3种细胞穿透肽的最佳包被质量比例;再在293T细胞水平上测试3种细胞穿透肽的细胞毒性、包被mRNA后对RNase A的耐受性,并通过凝胶阻滞试验和细胞荧光试验来测试3种细胞穿透肽对mRNA的包被和递送效力。细胞毒性试验结果显示,3种细胞穿透肽的半抑制浓度(IC_(50))分别是95、90μmol/L和81μmol/L;RNase A保护试验结果显示,3种细胞穿透肽均可保护mRNA不被RNase A降解;凝胶阻滞试验和细胞荧光试验结果显示,3种细胞穿透肽均可成功包被mRNA-EGFP,并把mRNA递送到细胞内进行表达,其中RVG11dR对mRNA的递送效果最好。结果表明,在细胞穿透肽RVG的末端添加一定数量的精氨酸可提高其对mRNA的递送效力。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 狂犬病毒糖蛋白 MRNA 体外转录 递送效果
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