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双重荧光逆转录-聚合酶链式反应与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒
1
作者
邓迎春
郭旭光
+3 位作者
牛会敏
任宝红
韩小改
郭瑞
《食品安全质量检测学报》
CAS
2024年第12期151-157,共7页
目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型...
目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒基因组保守序列设计引探,经过一系列引探浓度筛选,建立了双重荧光RT-PCR和恒温荧光RT-RAA两种检测方法,分别从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了比较研究;同时将这两种方法应用于实际临床样本检测中,并与GB4789.42—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验》进行比对验证。结果建立的两种方法特异性良好,敏感性均可达10 copies/μL;双重荧光RT-PCR方法质粒梯度变异系数(coefficient of variation,CV)值在0.1%~1.5%区间,恒温荧光RT-RAA方法CV值在1.0%~10.0%区间,稳定性和重复性显示双重荧光RT-PCR优于恒温荧光RT-RAA检测方法;31份诺如病毒阳性食品核酸样本均能检出,且50份食品盲样检测结果与国标一致。结论本研究成功建立了双重荧光RT-PCR与恒温荧光RT-RAA快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒方法,两种方法各有优缺点,双重荧光RT-PCR稳定性和重复性好,恒温荧光RT-RAA检测时间短,仅20 min就能完成扩增,可根据不同需求选择一种或两种作为食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的检测方法。
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关键词
荧光
逆转录
-
聚合
酶
链式反应
恒温荧光
逆转录
-
重组
酶
介导
等温
扩
增
GⅠ型诺如病毒
GⅡ型诺如病毒
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职称材料
用重组酶介导等温核酸扩增技术检测烟曲霉
被引量:
5
2
作者
廖新辉
易浔飞
+1 位作者
崔智慧
兰小鹏
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2015年第3期214-218,共5页
目的建立检测烟曲霉的重组酶介导等温核酸扩增技术(RPA)方法。方法筛选针对烟曲霉ITS1-2靶DNA序列的特异性引物。建立RPA快速检测烟曲霉方法并进行条件优化。分析RPA特异性和敏感性并与Taq PCR结果进行比较。结果RPA检测烟曲霉的优化...
目的建立检测烟曲霉的重组酶介导等温核酸扩增技术(RPA)方法。方法筛选针对烟曲霉ITS1-2靶DNA序列的特异性引物。建立RPA快速检测烟曲霉方法并进行条件优化。分析RPA特异性和敏感性并与Taq PCR结果进行比较。结果RPA检测烟曲霉的优化条件为:引物长度:18-30 bp;产物长度:200-700 bp;扩增温度:37-42℃,最低在27℃也可实现扩增;扩增时间:15-40 min,15 min即可达到凝胶电泳可检测的产物量;只需简单的恒温加热设备。RPA和Taq PCR可检测到的最低DNA浓度均为100 ng/m L。RPA仅对烟曲霉有特异性扩增,对黄曲霉、土曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、中国红酵母均无交叉扩增反应。结论建立的针对烟曲霉ITS1-ITS2靶DNA序列的RPA检测方法,可以快速、特异、灵敏地鉴定和检测烟曲霉。
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重组
酶
介导
等温
核酸
扩
增
技术
转录
间隔区1
-
2
烟曲霉
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职称材料
重组酶扩增技术概述及应用研究进展
被引量:
1
3
作者
陈兴浩
李鑫
+10 位作者
沈海潇
张校培
徐丽娜
张鹤平
葛菲菲
杨显超
刘健
白艺兰
王建
杨德全
赵洪进
《中国动物检疫》
CAS
2023年第11期76-81,共6页
重组酶扩增技术是近几年快速发展起来的一类等温扩增技术,相对于传统的核酸检测方法,具有设备要求低、操作简单等优势,在现场快速检测方面有着广阔的应用前景。本文简要介绍了重组酶扩增技术的技术原理、优点和难点,重点阐述了其在病毒...
重组酶扩增技术是近几年快速发展起来的一类等温扩增技术,相对于传统的核酸检测方法,具有设备要求低、操作简单等优势,在现场快速检测方面有着广阔的应用前景。本文简要介绍了重组酶扩增技术的技术原理、优点和难点,重点阐述了其在病毒、细菌、寄生虫及其他微生物检测领域的应用研究进展,旨在为重组酶扩增技术的进一步发展与应用提供参考。
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关键词
重组
酶
聚合
酶
扩
增
技术
酶
促
重组
等温
扩
增
技术
重组
酶
介导
等温
扩
增
技术
多
酶
恒温核酸快速
扩
增
技术
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职称材料
双重荧光RT-ERA技术快速检测贝类食品中诺如病毒
被引量:
5
4
作者
吴占文
王帅
+6 位作者
康婕
李涛
李红娜
蔡杰
张昊
杨艳歌
袁飞
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023年第18期355-363,共9页
目的:基于逆转录-酶促重组等温扩增(reverse transcription-enzymatic recombinase amplification,RTERA)技术,以MS2作为模式过程控制病毒,建立一种贝类食品中GI与GII型诺如病毒(norovirus,NoV)双重荧光RT-ERA快速检测方法。方法:分别...
目的:基于逆转录-酶促重组等温扩增(reverse transcription-enzymatic recombinase amplification,RTERA)技术,以MS2作为模式过程控制病毒,建立一种贝类食品中GI与GII型诺如病毒(norovirus,NoV)双重荧光RT-ERA快速检测方法。方法:分别将GI、GII NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中,通过体外转录的方式获得高纯度NoV RNA参考样品。以设计的MS2噬菌体引物探针,与实验室前期筛选的GI、GII NoV引物探针进行双重荧光RT-ERA实验,并对反应体系和反应程序进行优化,分析方法的灵敏度。最后,采用建立的方法开展真实样本检测,以GB 4789.42-2016《食品微生物学检验诺如病毒检验》为参比方法进行检测结果对比,确定方法的准确性和可行性。结果:建立MS2与GI、MS2与GII两组双重荧光RT-ERA检测方法,最佳引物及探针体积分别为4.1μL与1.8μL,检测时间可缩短至10 min左右,且最低可检出102拷贝/μL的NoV核酸样品。应用所建立的方法对29份真实样品进行检测,检测结果与GB 4789.42-2016一致。结论:本研究建立的双重荧光RT-ERA检测方法可实现对MS2、GI和GII NoV的同时检测,且灵敏度高、准确性强,为今后NoV现场快速检测提供一定基础。
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关键词
诺如病毒
逆转录-酶促重组等温扩增技术
双重荧光
快速检测
贝类
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职称材料
核酸等温扩增方法在食品安全检测中的应用综述
5
作者
郭雨湄
贾振军
刘瑞
《食品与发酵工业》
2025年第11期435-448,共14页
随着全球食品安全问题日益严重,开发快速且灵敏的检测技术显得尤为重要。核酸等温扩增技术因其高效、快速和操作简便的特点,在食品安全检测领域中的重要性日益凸显。该文系统阐释了环介导等温扩增技术、滚环扩增技术、重组酶聚合酶扩增...
随着全球食品安全问题日益严重,开发快速且灵敏的检测技术显得尤为重要。核酸等温扩增技术因其高效、快速和操作简便的特点,在食品安全检测领域中的重要性日益凸显。该文系统阐释了环介导等温扩增技术、滚环扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术、酶促重组等温扩增技术、等温链置换技术、核酸多臂引物和环优化技术等核酸等温扩增技术在食品安全检测领域的应用现状,涵盖主要类型、基本原理、具体应用、与其他技术结合的优势以及未来发展趋势。通过分析近年来的研究成果,旨在为食品安全检测领域提供新的思路和参考,进一步促进相关技术的发展与应用。
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关键词
环介导
等温
扩
增
技术
滚环
扩
增
技术
重组
酶
聚合
酶
扩
增
技术
酶
促
重组
等温
扩
增
技术
等温
链置换
技术
核酸多臂引物和环优化
技术
食品安全检测
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职称材料
题名
双重荧光逆转录-聚合酶链式反应与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒
1
作者
邓迎春
郭旭光
牛会敏
任宝红
韩小改
郭瑞
机构
国家市场监管重点实验室(食品安全快速检测与智慧监管技术)
河南省食品和盐业检验技术研究院
郑州中道生物技术有限公司
出处
《食品安全质量检测学报》
CAS
2024年第12期151-157,共7页
基金
国家市场监管重点实验室(食品安全快速检测与智慧监管技术)科研项目(ZDSYS202309)
河南省市场监督管理局科技计划项目(2023sj99)。
文摘
目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒基因组保守序列设计引探,经过一系列引探浓度筛选,建立了双重荧光RT-PCR和恒温荧光RT-RAA两种检测方法,分别从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了比较研究;同时将这两种方法应用于实际临床样本检测中,并与GB4789.42—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验》进行比对验证。结果建立的两种方法特异性良好,敏感性均可达10 copies/μL;双重荧光RT-PCR方法质粒梯度变异系数(coefficient of variation,CV)值在0.1%~1.5%区间,恒温荧光RT-RAA方法CV值在1.0%~10.0%区间,稳定性和重复性显示双重荧光RT-PCR优于恒温荧光RT-RAA检测方法;31份诺如病毒阳性食品核酸样本均能检出,且50份食品盲样检测结果与国标一致。结论本研究成功建立了双重荧光RT-PCR与恒温荧光RT-RAA快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒方法,两种方法各有优缺点,双重荧光RT-PCR稳定性和重复性好,恒温荧光RT-RAA检测时间短,仅20 min就能完成扩增,可根据不同需求选择一种或两种作为食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的检测方法。
关键词
荧光
逆转录
-
聚合
酶
链式反应
恒温荧光
逆转录
-
重组
酶
介导
等温
扩
增
GⅠ型诺如病毒
GⅡ型诺如病毒
Keywords
fluorescent reverse transcription polymerase chain reaction
isothermal fluorescence reverse transcription recombinase
-
aided amplification
GI norovirus
GII norovirus
分类号
TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]
O657.3 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
用重组酶介导等温核酸扩增技术检测烟曲霉
被引量:
5
2
作者
廖新辉
易浔飞
崔智慧
兰小鹏
机构
第二军医大学福州总医院临床医学院
南京军区福州总医院检验科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2015年第3期214-218,共5页
基金
国家自然科学基金(81271928)
文摘
目的建立检测烟曲霉的重组酶介导等温核酸扩增技术(RPA)方法。方法筛选针对烟曲霉ITS1-2靶DNA序列的特异性引物。建立RPA快速检测烟曲霉方法并进行条件优化。分析RPA特异性和敏感性并与Taq PCR结果进行比较。结果RPA检测烟曲霉的优化条件为:引物长度:18-30 bp;产物长度:200-700 bp;扩增温度:37-42℃,最低在27℃也可实现扩增;扩增时间:15-40 min,15 min即可达到凝胶电泳可检测的产物量;只需简单的恒温加热设备。RPA和Taq PCR可检测到的最低DNA浓度均为100 ng/m L。RPA仅对烟曲霉有特异性扩增,对黄曲霉、土曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、中国红酵母均无交叉扩增反应。结论建立的针对烟曲霉ITS1-ITS2靶DNA序列的RPA检测方法,可以快速、特异、灵敏地鉴定和检测烟曲霉。
关键词
重组
酶
介导
等温
核酸
扩
增
技术
转录
间隔区1
-
2
烟曲霉
Keywords
recombinase polymerase amplification assay
internal transcribed spacer regions 1
-
2
Aspergillus fumigatus
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
重组酶扩增技术概述及应用研究进展
被引量:
1
3
作者
陈兴浩
李鑫
沈海潇
张校培
徐丽娜
张鹤平
葛菲菲
杨显超
刘健
白艺兰
王建
杨德全
赵洪进
机构
河北工程大学生命科学与食品工程学院
上海市动物疫病预防控制中心
安徽农业大学动物科技学院
出处
《中国动物检疫》
CAS
2023年第11期76-81,共6页
基金
上海市科技兴农项目(沪农科推字[2022]第2-1号)。
文摘
重组酶扩增技术是近几年快速发展起来的一类等温扩增技术,相对于传统的核酸检测方法,具有设备要求低、操作简单等优势,在现场快速检测方面有着广阔的应用前景。本文简要介绍了重组酶扩增技术的技术原理、优点和难点,重点阐述了其在病毒、细菌、寄生虫及其他微生物检测领域的应用研究进展,旨在为重组酶扩增技术的进一步发展与应用提供参考。
关键词
重组
酶
聚合
酶
扩
增
技术
酶
促
重组
等温
扩
增
技术
重组
酶
介导
等温
扩
增
技术
多
酶
恒温核酸快速
扩
增
技术
Keywords
recombinase polymerase amplification(RPA)
enzymatic recombinase amplification(ERA):recombinase aided amplification(RAA)
multienzyme isothermal rapid amplification(MIRA)
分类号
S854.4 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
双重荧光RT-ERA技术快速检测贝类食品中诺如病毒
被引量:
5
4
作者
吴占文
王帅
康婕
李涛
李红娜
蔡杰
张昊
杨艳歌
袁飞
机构
中国检验检疫科学研究院
黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院
陕西省产品质量监督检验研究院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023年第18期355-363,共9页
基金
中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项(2022JK36)
“十三五”国家重点研发计划重点专项(2018YFC1603606)。
文摘
目的:基于逆转录-酶促重组等温扩增(reverse transcription-enzymatic recombinase amplification,RTERA)技术,以MS2作为模式过程控制病毒,建立一种贝类食品中GI与GII型诺如病毒(norovirus,NoV)双重荧光RT-ERA快速检测方法。方法:分别将GI、GII NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中,通过体外转录的方式获得高纯度NoV RNA参考样品。以设计的MS2噬菌体引物探针,与实验室前期筛选的GI、GII NoV引物探针进行双重荧光RT-ERA实验,并对反应体系和反应程序进行优化,分析方法的灵敏度。最后,采用建立的方法开展真实样本检测,以GB 4789.42-2016《食品微生物学检验诺如病毒检验》为参比方法进行检测结果对比,确定方法的准确性和可行性。结果:建立MS2与GI、MS2与GII两组双重荧光RT-ERA检测方法,最佳引物及探针体积分别为4.1μL与1.8μL,检测时间可缩短至10 min左右,且最低可检出102拷贝/μL的NoV核酸样品。应用所建立的方法对29份真实样品进行检测,检测结果与GB 4789.42-2016一致。结论:本研究建立的双重荧光RT-ERA检测方法可实现对MS2、GI和GII NoV的同时检测,且灵敏度高、准确性强,为今后NoV现场快速检测提供一定基础。
关键词
诺如病毒
逆转录-酶促重组等温扩增技术
双重荧光
快速检测
贝类
Keywords
norovirus
reverse transcription
-
enzymatic recombinase amplification
dual fluorescence
rapid detection
shellfish
分类号
TS201.6 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
核酸等温扩增方法在食品安全检测中的应用综述
5
作者
郭雨湄
贾振军
刘瑞
机构
中国人民公安大学侦查学院
出处
《食品与发酵工业》
2025年第11期435-448,共14页
基金
中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(2022JKF435)。
文摘
随着全球食品安全问题日益严重,开发快速且灵敏的检测技术显得尤为重要。核酸等温扩增技术因其高效、快速和操作简便的特点,在食品安全检测领域中的重要性日益凸显。该文系统阐释了环介导等温扩增技术、滚环扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术、酶促重组等温扩增技术、等温链置换技术、核酸多臂引物和环优化技术等核酸等温扩增技术在食品安全检测领域的应用现状,涵盖主要类型、基本原理、具体应用、与其他技术结合的优势以及未来发展趋势。通过分析近年来的研究成果,旨在为食品安全检测领域提供新的思路和参考,进一步促进相关技术的发展与应用。
关键词
环介导
等温
扩
增
技术
滚环
扩
增
技术
重组
酶
聚合
酶
扩
增
技术
酶
促
重组
等温
扩
增
技术
等温
链置换
技术
核酸多臂引物和环优化
技术
食品安全检测
Keywords
loop
-
mediated isothermal amplification
rolling circle amplification
recombinase polymerase amplification
enzymatic recombinase amplification
isothermal strand displacement polymerization reaction
amplifying DNA with multiarm priming and looping optimization of nucleic acid
food safety detection
分类号
TS207.3 [轻工技术与工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
双重荧光逆转录-聚合酶链式反应与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒
邓迎春
郭旭光
牛会敏
任宝红
韩小改
郭瑞
《食品安全质量检测学报》
CAS
2024
0
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职称材料
2
用重组酶介导等温核酸扩增技术检测烟曲霉
廖新辉
易浔飞
崔智慧
兰小鹏
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2015
5
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职称材料
3
重组酶扩增技术概述及应用研究进展
陈兴浩
李鑫
沈海潇
张校培
徐丽娜
张鹤平
葛菲菲
杨显超
刘健
白艺兰
王建
杨德全
赵洪进
《中国动物检疫》
CAS
2023
1
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职称材料
4
双重荧光RT-ERA技术快速检测贝类食品中诺如病毒
吴占文
王帅
康婕
李涛
李红娜
蔡杰
张昊
杨艳歌
袁飞
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023
5
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职称材料
5
核酸等温扩增方法在食品安全检测中的应用综述
郭雨湄
贾振军
刘瑞
《食品与发酵工业》
2025
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职称材料
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