应用环介导逆转录等温扩增技术快速检测新城疫病毒 被引量：10

1

作者 孔令辰 侯佳蕾 +4 位作者 蒋文泓 聂飞 敖艳华 廖明 任涛 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期75-78,共4页

参考新城疫病毒融合基因(fusion gene,F gene)序列,设计了2对能够特异性地识别F基因上的6个区域的引物,并以此建立了一种简单、快速、有效的环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)方法检测NDV.试验结果表明:该方法用时短(2 h内完成)、特异性好... 参考新城疫病毒融合基因(fusion gene,F gene)序列,设计了2对能够特异性地识别F基因上的6个区域的引物,并以此建立了一种简单、快速、有效的环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)方法检测NDV.试验结果表明:该方法用时短(2 h内完成)、特异性好而且灵敏度高,最小检测限可达100 pg;对人工发病样品进行鸡胚分离和RT-LAMP检测,二者的阳性符合率高达93.5%;同时采用镁离子沉淀对检测结果进行可视化处理,方便利用肉眼直接观察. 展开更多

关键词 环介导逆转录等温扩增技术 新城疫病毒 快速检测

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新城疫病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：1

2

作者 杜景娇 薛强 +3 位作者 邹明强 滕文锋 郭浩 但晓雅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期945-948,共4页

为建立一种新城疫病毒(NDV)的简便、快速、高灵敏度的检测方法,本研究根据NDV融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,在恒温水浴中进行核酸扩增反应,对反应温度、反应时间以及反应液中Mg2+浓度进行优化,获得最佳反应条件,结果经凝... 为建立一种新城疫病毒(NDV)的简便、快速、高灵敏度的检测方法,本研究根据NDV融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,在恒温水浴中进行核酸扩增反应,对反应温度、反应时间以及反应液中Mg2+浓度进行优化,获得最佳反应条件,结果经凝胶电泳分析并在可见光下直接观察。整个RT-LAMP检测用时0.5 h,检测敏感度比RT-PCR高100倍,对禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒无交叉反应。本研究建立的NDV RT-LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强,操作简单等特点,有望在核酸扩增检测方法中取代RT-PCR技术。 展开更多

关键词 新城疫病毒 环介导逆转录等温扩增技术 融合基因(F基因)

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核酸等温扩增方法在食品安全检测中的应用综述 被引量：2

3

作者 郭雨湄 贾振军 刘瑞 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第11期435-448,共14页

随着全球食品安全问题日益严重,开发快速且灵敏的检测技术显得尤为重要。核酸等温扩增技术因其高效、快速和操作简便的特点,在食品安全检测领域中的重要性日益凸显。该文系统阐释了环介导等温扩增技术、滚环扩增技术、重组酶聚合酶扩增... 随着全球食品安全问题日益严重,开发快速且灵敏的检测技术显得尤为重要。核酸等温扩增技术因其高效、快速和操作简便的特点,在食品安全检测领域中的重要性日益凸显。该文系统阐释了环介导等温扩增技术、滚环扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术、酶促重组等温扩增技术、等温链置换技术、核酸多臂引物和环优化技术等核酸等温扩增技术在食品安全检测领域的应用现状,涵盖主要类型、基本原理、具体应用、与其他技术结合的优势以及未来发展趋势。通过分析近年来的研究成果,旨在为食品安全检测领域提供新的思路和参考,进一步促进相关技术的发展与应用。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 滚环扩增技术 重组酶聚合酶扩增技术 酶促重组等温扩增技术 等温链置换技术 核酸多臂引物和环优化技术 食品安全检测

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反转录-环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测马铃薯病毒 被引量：3

4

作者 陈恩发 李其义 +2 位作者 邓宽平 卢扬 彭慧元 《贵州农业科学》 CAS 2015年第3期74-77,共4页

为寻求低成本快速准确灵敏度高的马铃薯病毒检测方法,根据马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)的外壳蛋白基因序列设计4条特异引物,建立LAMP检测技术。结... 为寻求低成本快速准确灵敏度高的马铃薯病毒检测方法,根据马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)的外壳蛋白基因序列设计4条特异引物,建立LAMP检测技术。结果表明:LAMP检测方法灵敏度下限是10个拷贝的病毒量,该方法检测PVX、PVY和PLRV特异性好,灵敏度高,1h可完成检测,且检测成本低。 展开更多

关键词 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 马铃薯卷叶病毒 反转录-环介导等温扩增技术 (RT-LAMP) 病毒检测

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基于nuc基因的环介导等温核酸扩增可视化技术检测食源性金黄色葡萄球菌 被引量：1

5

作者 邹作成 王西 +9 位作者 刘雪兰 胡仲皓 田祥强 何晓花 杜晓莉 王佳玲 李柯 刘浩洋 嵇辛勤 胡青海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期108-113,共6页

金黄色葡萄球菌食物中毒主要是由食用被金黄色葡萄球菌及其所产生的肠毒素污染的奶、肉、蛋、糕点、剩饭等蛋白或淀粉含量丰富的食品引起,快速精准的金黄色葡萄球菌检测技术对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究以nuc基因... 金黄色葡萄球菌食物中毒主要是由食用被金黄色葡萄球菌及其所产生的肠毒素污染的奶、肉、蛋、糕点、剩饭等蛋白或淀粉含量丰富的食品引起,快速精准的金黄色葡萄球菌检测技术对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究以nuc基因作为检测靶基因,建立了一种检测金黄色葡萄球菌的环介导等温核酸扩增(LAMP)技术。该方法检测金黄色葡萄球菌基因组DNA样品为阳性,而对单细胞增生李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌和产气荚膜梭菌等食源性致病菌和猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌等猪源细菌基因组DNA检测结果均为阴性,表明建立的LAMP方15法具有较好的特异性。灵敏度的检测结果表明,LAMP的检测限可达5.6×10^(1) CFU/mL,而常规PCR的检测限为5.6×10^(5) CFU/mL,即LAMP的检测灵敏度比常规PCR高出10000倍。临床样品的检测结果表明,50份猪肉样品中有4份检出金黄色葡萄球菌。本研究为食源性金黄色葡萄球菌提供了一种快速、可视化、特异性好、灵敏度高、成本低的LAMP检测方法。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 nuc基因 环介导等温核酸扩增技术 可视化

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利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术及环介导等温扩增技术在结核性脑膜炎的诊断价值 被引量：13

6

作者 冉燕 赵建军 +1 位作者 张建勇 宗兆婧 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第24期3416-3419,共4页

目的评价脑脊液利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)及脑脊液环介导等温扩增技术(LAMP)在结核性脑膜炎中的诊断价值。方法收集临床诊断为结核性脑膜炎住院患者110例,随机收集60例为结核性脑膜炎A组,50例为结核... 目的评价脑脊液利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)及脑脊液环介导等温扩增技术(LAMP)在结核性脑膜炎中的诊断价值。方法收集临床诊断为结核性脑膜炎住院患者110例,随机收集60例为结核性脑膜炎A组,50例为结核性脑膜炎B组,另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液20例为对照组(CG组)。其中结核性脑膜炎A组患者入院后抽取脑脊液送脑脊液常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养、GeneXpert MTB/RIF,结核性脑膜炎B组患者送脑脊液作常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养和LAMP,CG组患者送脑脊液作常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养、GeneXpert MTB/RIF和LAMP。结果结核性脑膜炎A组脑脊液GeneXpert MTB/RIF阳性32例,其中利福平耐药基因检测阳性3例,结核性脑膜炎A组脑脊液结核菌涂片、培养、GeneXpert MTB/RIF阳性率分别为8.3%(5/60)、16.7%(10/60)和53.0%(32/60)。结核性脑膜炎B组50例脑脊液结核菌涂片、结核菌培养、LAMP,阳性率分别为8.0%(4/50),18.0%(9/50)和58.0%(29/50),CG组脑脊液GeneXpert MTB/RIF和脑脊液LAMP均为阴性。结论脑脊液GeneXpert MTB/RIF及脑脊液LAMP均为早期诊断结核性脑膜炎的较好方法。 展开更多

关键词 结核 脑膜炎 脑脊液 利福平 耐药 利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术 环介导等温扩增技术

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环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌 被引量：11

7

作者 张涛涛 王兰 +1 位作者 龚频 陈福欣 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第2期238-241,共4页

研究了用环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测金黄色葡萄球菌的方法。首先根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因nuc中的保守序列设计特异性引物,建立并优化反应条件,然后通过对金黄色葡萄球菌及其他菌种的对比试验,验证引物的特异性并确定... 研究了用环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测金黄色葡萄球菌的方法。首先根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因nuc中的保守序列设计特异性引物,建立并优化反应条件,然后通过对金黄色葡萄球菌及其他菌种的对比试验,验证引物的特异性并确定方法的检测限。结果表明:在用加环引物的条件下,LAMP反应体系于60℃反应35 min即可扩增成功,而用未加环的引物则需45 min才能看到白色絮状沉淀。对2株金黄色葡萄球菌、3株大肠杆菌、1株醋酸杆菌、1株沙门氏菌进行同步检测,结果发现2株金黄色葡萄球菌均显示阳性,而其他菌株均显示阴性。研究确定了LAMP检测纯培养的金黄色葡萄球菌的最低检测限为100 fg,比PCR的最低检测限低2个数量级。由研究结果可以看出,LAMP法检测金黄色葡萄球菌操作简便,有较高的特异性、灵敏度,为快速检测食品中的致病菌提供了较好的技术平台。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 金黄色葡萄球菌 耐热核酸酶基因nuc 快速检测

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环介导等温扩增技术在现场工作中的应用进展 被引量：1

8

作者 钟田雨 胡蓉 江丽霞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第13期2225-2227,共3页

核酸扩增技术是病原微生物检测和遗传性疾病诊断的重要武器，其中常规PCR和实时荧光定量PCR已在临床检验中得到广泛的应用，但这些技术操作复杂，对实验室人员、仪器和环境的要求较高。无法在基层和现场工作中灵活使用。环介导等温扩增... 核酸扩增技术是病原微生物检测和遗传性疾病诊断的重要武器，其中常规PCR和实时荧光定量PCR已在临床检验中得到广泛的应用，但这些技术操作复杂，对实验室人员、仪器和环境的要求较高。无法在基层和现场工作中灵活使用。环介导等温扩增（100p—mediatedisothermalamplification．LAMP）是日本学者Notomi等于2000年发明的核酸扩增技术。与PCR技术相比，具有操作简单快速、对仪器和样本质量要求低等特点．尤其适用于现场工作使用。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 现场工作 实时荧光定量PCR 核酸扩增技术 技术操作 微生物检测 实验室人员 PCR技术

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环介导等温扩增技术在食品安全检测领域的应用研究进展 被引量：13

9

作者 范安妮 佘之蕴 +2 位作者 张娟 周臣清 梁宇斌 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期330-334,共5页

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年发展起来的一种新型核酸检测技术。其采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行核酸扩增,与传统核酸检测技术(PC... 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年发展起来的一种新型核酸检测技术。其采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行核酸扩增,与传统核酸检测技术(PCR法、实时荧光定量PCR法)相比,具有操作简单、特异性强、灵敏度高、可肉眼判读结果等优点。核酸检测是食品安全检测技术的一个重要手段,本文综述了LAMP技术在食品微生物检测、转基因成分检测、过敏原成分检测和动物源性成分检测领域的应用研究进展,探讨了LAMP技术在食品检测领域的发展前景,以期为食品快速、高通量检测技术建立提供参考。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术(LAMP) 食品安全 检测 核酸扩增

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环介导等温扩增技术用于结核病诊断的价值评估 被引量：8

10

作者 林晶晶 夏露 +5 位作者 刘旭晖 魏剑浩 席秀红 黄威 李涛 卢水华 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期104-110,共7页

目的评估环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在诊断结核病中的应用价值。方法以疑似活动性结核患者为研究对象。前瞻性收集患者临床标本,分装后进行荧光涂片显微镜镜检、BACTEC MGIT 960液体培养、MTB Ge... 目的评估环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在诊断结核病中的应用价值。方法以疑似活动性结核患者为研究对象。前瞻性收集患者临床标本,分装后进行荧光涂片显微镜镜检、BACTEC MGIT 960液体培养、MTB GeneXpert(Xpert)和LAMP检测,分析比较这4种检测方法的灵敏度和特异度,同时进行一致性检验。结果研究共入组315例患者,分为痰标本组和非痰标本组,两组分别有175例和80例纳入分析。对于痰标本的检测,以液体培养为诊断标准时,LAMP的灵敏度为78.9%,特异度为82.7%;在有抗结核活性药物暴露史亚组中,LAMP的灵敏度为92.3%,Xpert的灵敏度为88.5%;以临床诊断为诊断标准时,LAMP的灵敏度优于涂片(58.9%vs.46.0%,P<0.05),特异度为98.0%;亚组分析提示在有抗结核活性药物暴露史的患者标本中,LAMP的灵敏度高于其他检测方法。对于非痰标本的检测,同样显示出优于涂片的灵敏度。结论LAMP在结核病的诊断中具有较好的灵敏度和特异度,与Xpert检测结果一致性较高,与培养一致性中等,优于结核菌涂片法。在有抗结核活性药物暴露史的患者中,LAMP有可靠的检出率。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术(LAMP) 结核病(TB) 诊断 核酸扩增

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柑桔黄龙病环介导等温扩增检测方法建立及应用 被引量：9

11

作者 彭军 廖孝文 +4 位作者 杨海中 曾凡云 龙海波 裴月令 郭建荣 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第10期1998-2003,共6页

以柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)病原菌16s rDNA保守区域为靶标设计LAMP引物,建立柑桔黄龙病的环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification assay,LAMP)检测技术。LAMP检测方法具有极高的检测特异性和灵敏性,... 以柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)病原菌16s rDNA保守区域为靶标设计LAMP引物,建立柑桔黄龙病的环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification assay,LAMP)检测技术。LAMP检测方法具有极高的检测特异性和灵敏性,其检测下限约为1 pg/μL质粒DNA,是PCR检测灵敏度的100倍,能快速、准确地对田间疑似样品进行检测。建立的柑桔黄龙病LAMP检测方法是对黄龙病检测方法的拓展和延伸,可以很好地应用于田间检测,可满足基层以及科研单位对该病害检测的需要。 展开更多

关键词 柑桔黄龙病 环介导等温核酸扩增技术 检测

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鹅副黏病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及应用 被引量：5

12

作者 鲜思美 韦洪才 +2 位作者 尹强军 孔维祥 苏刚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期150-154,共5页

参照GenBank中登录的鹅副黏病毒(gallinacean paramyxovirus,GPMV)序列(AY325797),针对GPMV的F基因保守区域设计了4条引物,通过优化反应条件,建立了检测GPMV的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),并进行了特异性试验、敏感性试验及临床... 参照GenBank中登录的鹅副黏病毒(gallinacean paramyxovirus,GPMV)序列(AY325797),针对GPMV的F基因保守区域设计了4条引物,通过优化反应条件,建立了检测GPMV的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),并进行了特异性试验、敏感性试验及临床样本检测。结果显示,建立的RT-LAMP方法对GPMV阳性样品扩增产物的电泳呈特征性梯状条带,而鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)、鸭源沙门氏菌(Salmonella anatamu)、鸡马立克病毒(MDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的扩增产物电泳后均无扩增条带。建立的RT-LAMP方法对GPMV的最低检出量为9.5 fg的cDNA模板,敏感性比常规RT-PCR方法高1 000倍。表明建立的RT-LAMP方法特异性强、敏感性高。对6份临床样本的检出率为100%(6/6),与常规RT-PCR的符合率为100%。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 逆转录环介导等温扩增技术 检测

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环介导等温扩增技术LAMP在植物病毒检测中的研究进展 被引量：4

13

作者 孟若雪 《农技服务》 2022年第7期72-77,共6页

环介导等温扩增技术(LAMP)具备特异性好、灵敏度高、方便快捷的特点,目前已经广泛用于医学诊断、食品安全检测、植物病虫害检测等基因芯片领域。为植物病毒病的早期预防提供技术支撑,介绍了LAMP技术的原理、特性、在植物病毒检测中的应... 环介导等温扩增技术(LAMP)具备特异性好、灵敏度高、方便快捷的特点,目前已经广泛用于医学诊断、食品安全检测、植物病虫害检测等基因芯片领域。为植物病毒病的早期预防提供技术支撑,介绍了LAMP技术的原理、特性、在植物病毒检测中的应用以及该技术在植物病害检测中的发展前景。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 LAMP 植物病毒 核酸扩增

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肠道病毒71型环介导等温扩增检测方法的建立

14

作者 戴颖 刘峰涛 +1 位作者 何书 汪奇伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期240-243,共4页

目的:采用一步逆转录-环介导等温扩增(Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification,RTLAMP)肠道病毒71型(EV71)特异性基因,以建立一种快速、敏感、经济的EV71检测方法。方法:针对EV71病毒VP1基因特异性序列的8个区... 目的:采用一步逆转录-环介导等温扩增(Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification,RTLAMP)肠道病毒71型(EV71)特异性基因,以建立一种快速、敏感、经济的EV71检测方法。方法:针对EV71病毒VP1基因特异性序列的8个区域设计6条环介导等温扩增引物,Bst(Bacillus stearothermophilus)DNA聚合酶63℃扩增目的基因1 h,GoldView染色,日光下观察结果,并评价其特异性和灵敏度。结果:该方法与柯萨奇病毒A16型、轮状病毒、诺如病毒无交叉反应发生。建立的RT-LAMP检测方法灵敏,最低检测限为50拷贝/管,比定量PCR灵敏10倍。93份咽拭子标本中,RTLAMP检测示46份阳性,实时荧光定量PCR检测示44份阳性,经卡方检验分析,两者间无显著统计学差异。结论:RT-LAMP是一种快速、敏感、特异、经济的方法,适用于基层医疗机构临床检测普及。 展开更多

关键词 逆转录-环介导等温扩增技术 肠道病毒71型 手口足病

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环介导等温扩增在动物病原微生物检测中的应用研究进展 被引量：7

15

作者 唐雨萌 申秋平 +1 位作者 宋春雷 庄林林 《现代畜牧兽医》 2023年第4期72-76,共5页

病原微生物是威胁畜禽健康的重要因素,严重影响畜牧业的发展,快速、精准的病原微生物检测方法对于保障畜禽健康具有重要意义。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种核酸等温扩增技术,具有灵敏度高、反应... 病原微生物是威胁畜禽健康的重要因素,严重影响畜牧业的发展,快速、精准的病原微生物检测方法对于保障畜禽健康具有重要意义。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种核酸等温扩增技术,具有灵敏度高、反应速度快、操作便捷等特点,原理是针对靶基因的6个区域设计2~3对引物,使用链置换DNA聚合酶即可实现高效扩增。文章对LAMP的反应机制、研究现状以及在动物病原微生物检测中的应用进展进行综述,并对其未来发展进行展望。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 动物病原微生物 核酸检测

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基于叠氮溴化丙锭与恒温核酸扩增技术快速检测亚致死状态食源金黄色葡萄球菌 被引量：8

16

作者 曹潇 赵力超 +6 位作者 杨翠琪 谷立慧 欧阳广宇 陈金 陈思锴 谭绮雯 王丽 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第24期149-155,共7页

建立一种将荧光染料叠氮溴化丙锭（propidium monoazide,PMA）与环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术相结合的方法,用于快速高效检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。同时,采用人工污染金黄... 建立一种将荧光染料叠氮溴化丙锭（propidium monoazide,PMA）与环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术相结合的方法,用于快速高效检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。同时,采用人工污染金黄色葡萄球菌的速冻水饺和奶粉作为食品样品,研究PMA-LAMP方法的检测灵敏度。结果表明,PMA溶液质量浓度3μg/mL,650 W卤素灯下曝光5 min,PMA能够完全抑制1.2×10^7 copies/mL金黄色葡萄球菌死菌核酸扩增。PMA-LAMP方法能够在恒温65℃、60 min内完成对亚致死型金黄色葡萄球菌特异性nuc基因的特异性检测,其对亚致死状态金黄色葡萄球菌的检出限为34 CFU/mL,对食物样品速冻水饺和奶粉的检出限分别为17 CFU/m L和1.70×10^2 CFU/mL。建立的PMA-LAMP方法可以有效检测亚致死态金黄色葡萄球菌,提供了一种新的检测技术和解决方案。 展开更多

关键词 食品安全 金黄色葡萄球菌 亚致死状态 叠氮溴化丙锭-环介导等温扩增技术 快速检测

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环媒恒温基因扩增技术在动物医学上的应用概况 被引量：1

17

作者 黄微 罗超 +2 位作者 肖紫兰 冯帅媚 廖艳 《中国畜禽种业》 2008年第22期54-57,共4页

环媒恒温基因扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification简称LAMP)是于2000年由日本科学家Notomi[1]等发明的一种新的核酸扩增技术。大量研究证明,LAMP法不仅实现了恒温条件下基因快速扩增,而且具有操作简单、快速高效、特异性... 环媒恒温基因扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification简称LAMP)是于2000年由日本科学家Notomi[1]等发明的一种新的核酸扩增技术。大量研究证明,LAMP法不仅实现了恒温条件下基因快速扩增,而且具有操作简单、快速高效、特异性强、灵敏度高、鉴定简便等特点。通过众多科研工作者的努力,目前该方法已经逐步应用于动物医学领域,如奶牛胚胎性别检测以及上多种动物病源微生物的检测,发展前景可观。 展开更多

关键词 环介导等温基因扩增技术 核酸扩增技术 动物医学

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禽流感病毒RT-LAMP检测技术的建立 被引量：10

18

作者 彭宜 谢芝勋 +6 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 范晴 罗思思 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第12期43-46,共4页

根据GenBank中禽流感病毒(AIV)M基因序列,设计针对所有亚型AIV的通用检测引物,并对反应条件进行优化,建立了检测AIV的逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化检测方法。结果表明,建立的检测方法对禽流感病毒总RNA最小检出限为10fg,灵敏度... 根据GenBank中禽流感病毒(AIV)M基因序列,设计针对所有亚型AIV的通用检测引物,并对反应条件进行优化,建立了检测AIV的逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化检测方法。结果表明,建立的检测方法对禽流感病毒总RNA最小检出限为10fg,灵敏度为RT-PCR的1 000倍,能特异地检测出所有不同的HA亚型禽流感病毒,对其他禽呼吸道病原体无扩增反应;本方法快速,在常规水浴锅或金属恒温槽中50min就可完成,反应结束后不需开盖即可直接用肉眼根据反应液的颜色变化对结果进行判定。本研究建立的禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法具有操作简便、仪器设备要求简单、灵敏、快速、特异等优点,适合在基层进行AIV的快速早期筛检。 展开更多

关键词 逆转录-环介导等温扩增 禽流感病毒 检测

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利用RT-LAMP技术鉴别伤寒沙门菌 被引量：6

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作者 樊粉霞 阚飙 闫梅英 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期682-689,共8页

分子生物学诊断技术是用于检测伤寒沙门菌的重要辅助手段,但由于需要较好的实验设备和条件使其应用与发展受到限制,所以建立简捷的检测平台显得尤为重要.逆转录-环介导等温核酸扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amp... 分子生物学诊断技术是用于检测伤寒沙门菌的重要辅助手段,但由于需要较好的实验设备和条件使其应用与发展受到限制,所以建立简捷的检测平台显得尤为重要.逆转录-环介导等温核酸扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法目前用于病原微生物的检测发展迅速,此方法相对简单、快速.本研究针对伤寒沙门菌STY3671基因设计6条特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测该靶基因的RT-LAMP方法.利用伤寒标准菌株CT-18及其血模拟标本,研究了该方法的特异性及灵敏性,并与rRT-PCR(real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)方法的敏感性进行比较.结果显示:等温65℃条件下,30～60 min内可完成RT-LAMP检测反应,利用该方法检测134株伤寒沙门菌均为阳性,其余47种检测菌株均扩增阴性.在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达7 cfu/mL,比rRT-PCR检测低限高10倍.本研究结果表明:我们建立的敏感性高、特异性好的RT-LAMP检测血液中伤寒沙门菌的方法,为伤寒沙门菌感染的快速诊断提供了简便的手段,可用于对伤寒的早期诊断、预防控制及临床治疗. 展开更多

关键词 伤寒沙门菌 逆转录-环介导等温核酸扩增 检测

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检测肠道病毒71型RT-LAMP技术的建立及其应用 被引量：3

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作者 耿英芝 姚文清 +4 位作者 郭军巧 于伟 毛玲玲 陈静乙 安春丽 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期176-179,共4页

目的为肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染的快速诊断建立一种简捷、敏感、特异的基因检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)。方法针对EV71VP1基因的8个区域设计6条特异性引物,建立检测该靶序列的RT-LAMP方法,对其特... 目的为肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染的快速诊断建立一种简捷、敏感、特异的基因检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)。方法针对EV71VP1基因的8个区域设计6条特异性引物,建立检测该靶序列的RT-LAMP方法,对其特异性及敏感性进行了验证;并对手足口病患者标本进行检测,并与RT-PCR及Real-time PCR方法进行了比较。结果利用RT-LAMP方法能成功检测到EV71VP1基因区,等温条件下60min内即可完成检测,该方法简便快捷、敏感性高、特异性好;其阳性率高于RT-PCR方法(P<0.05),与Real-time PCR结果呈现很好的一致性(P>0.05)。结论 RT-LAMP方法具有灵敏度高,特异性强,操作过程简捷快速,无需特复杂仪器等优点。适用于EV71感染的快速检测及分子流行病学的监测,具有很好的开发应用前景。 展开更多

关键词 肠道病毒71型 手足口病 逆转录环介导等温核酸扩增技术

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