根据对虾桃拉综合征病毒(TSV)结构蛋白基因保守序列,利用Primer Explorer 4.0软件设计了4条引物,建立桃拉综合征病毒环介导逆转录等温扩增快速(RT-LAMP)检测方法,对反应温度和反应时间等参数进行了优化;同时将建立的RT-LAMP检测方法与RT...根据对虾桃拉综合征病毒(TSV)结构蛋白基因保守序列,利用Primer Explorer 4.0软件设计了4条引物,建立桃拉综合征病毒环介导逆转录等温扩增快速(RT-LAMP)检测方法,对反应温度和反应时间等参数进行了优化;同时将建立的RT-LAMP检测方法与RT-PCR进行比较分析,RT-LAMP的检测灵敏度比RT-PCR高10倍。结果表明,RT-LAMP最适反应在60℃恒温条件60 min内完成,凝胶电泳呈现梯型条带;反应体系中添加SYBR Green I荧光染料后,绿色的阳性结果明显区别于橙色阴性结果;RT-LAMP对感染TSV的对虾检测呈阳性,而对对虾其他常见病原检测均为阴性,具有高的特异性。展开更多
文摘根据对虾桃拉综合征病毒(TSV)结构蛋白基因保守序列,利用Primer Explorer 4.0软件设计了4条引物,建立桃拉综合征病毒环介导逆转录等温扩增快速(RT-LAMP)检测方法,对反应温度和反应时间等参数进行了优化;同时将建立的RT-LAMP检测方法与RT-PCR进行比较分析,RT-LAMP的检测灵敏度比RT-PCR高10倍。结果表明,RT-LAMP最适反应在60℃恒温条件60 min内完成,凝胶电泳呈现梯型条带;反应体系中添加SYBR Green I荧光染料后,绿色的阳性结果明显区别于橙色阴性结果;RT-LAMP对感染TSV的对虾检测呈阳性,而对对虾其他常见病原检测均为阴性,具有高的特异性。
