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Ⅰ型鸭病毒性肝炎的逆转录套式PCR检测
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作者 黄成斌 潘玲 +1 位作者 毛火云 黄显明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第4期143-145,共3页
关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 套式PCR检测 病毒性肝炎 逆转录 cdna文库 诊断方法 VIRUS HRP标记
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酵母双杂交系统筛选与水稻条纹病毒Pc2互作的寄主蛋白基因片段
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作者 梁昌镛 赵淑玲 +1 位作者 侯艳玲 戴雪娟 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期540-544,共5页
水稻条纹病毒编码的Pc2蛋白在病毒侵染及宿主症状发生中起作用。研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染与致病的分子机制。分别将编码Pc2N端(Pc2-N)与Pc2C端(Pc2-C)的基因片段克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上.并构建水稻叶... 水稻条纹病毒编码的Pc2蛋白在病毒侵染及宿主症状发生中起作用。研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染与致病的分子机制。分别将编码Pc2N端(Pc2-N)与Pc2C端(Pc2-C)的基因片段克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上.并构建水稻叶片cDNA文库.然后分别用Pc2-N和Pc2-C为诱饵筛选文库寻找与其互作的寄主因子。结果表明.诱饵载体中插入的Pc2-N和Pc2-C编码框和氨基酸序列均正确。Pc2-N对酵母菌株AHl09无毒性和自主激活能力,但Pc2-C对酵母具有细胞毒性。文库滴度为4x107CFU/mL.且大多数插入片段在500~2000bp之间。利用Pc2-N为诱饵筛选水稻cDNA文库.获得有8个候选阳性克隆。经序列测定和BLAST分析结果表明.这些克隆共编码5种蛋白.主要为胁迫相关蛋白与光系统相关蛋白。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 Pc2 cdna文库 酵母双杂交筛选 诱饵质粒
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酵母双杂交筛选与星状病毒衣壳蛋白ORF2互作的宿主蛋白 被引量:3
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作者 李香雨 于漫 +4 位作者 聂梓陶 陈彦如 王嘉会 韩喜彬 赵微 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期491-495,共5页
目的筛选人星状病毒(HAstV)衣壳蛋白ORF2与宿主细胞互作的蛋白质。方法构建HAstV ORF2蛋白的重组载体pGBKT77-ORF2,以其作为诱饵质粒,采用酵母双杂交方法,从人结肠癌细胞Caco-2 cDNA文库中筛选与ORF2蛋白互作的蛋白。以HAstV-1病毒株的... 目的筛选人星状病毒(HAstV)衣壳蛋白ORF2与宿主细胞互作的蛋白质。方法构建HAstV ORF2蛋白的重组载体pGBKT77-ORF2,以其作为诱饵质粒,采用酵母双杂交方法,从人结肠癌细胞Caco-2 cDNA文库中筛选与ORF2蛋白互作的蛋白。以HAstV-1病毒株的衣壳蛋白为模板,通过PCR扩增定向克隆构建诱饵载体pGBKT7-ORF2。通过菌落PCR和测序验证质粒在酵母细胞Y2H中正确表达。明确ORF2蛋白对酵母细胞无毒性,无自激活活性。将含有pGBKT7-ORF2的酵母菌株与靶标Caco-2 cDNA文库进行杂交、筛选、验证及测序。结果获得15个与ORF2互作的宿主蛋白,分别为FN1、COMMD1、RASAL2、BMP4、RPL11、RBM8A、SUMO1、WWC2、NGDN、HINFP、RPS7、IMMT、UBE2I、EEF1A1和FTL。结论成功筛选出15个与HAstV ORF2互作的蛋白,为研究星状病毒与宿主相互作用、ORF2蛋白功能及病毒的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 星状病毒 酵母双杂交 ORF2蛋白 蛋白互作 cdna文库筛选
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食管癌细胞抗失巢凋亡基因UBCH7的发现与鉴定 被引量:4
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作者 杨扬 王博石 +3 位作者 汪晓敏 张钰 王明荣 贾雪梅 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期190-197,共8页
失巢凋亡(Anoikis)是细胞失去与细胞外基质(Extra-cellular matrix,ECM)粘附时发生的特殊形式的凋亡,是机体维持组织稳态的关键机制之一。抗失巢凋亡能力的获得是肿瘤细胞发生远处转移的前提条件之一。为了鉴定与食管癌细胞抗失巢凋亡... 失巢凋亡(Anoikis)是细胞失去与细胞外基质(Extra-cellular matrix,ECM)粘附时发生的特殊形式的凋亡,是机体维持组织稳态的关键机制之一。抗失巢凋亡能力的获得是肿瘤细胞发生远处转移的前提条件之一。为了鉴定与食管癌细胞抗失巢凋亡相关的基因,文章首先构建食管癌细胞系的逆转录病毒文库,感染对失巢凋亡敏感的NIH3T3细胞,利用感染病毒cDNA文库的混合细胞系进行软琼脂集落形成实验,挑取在悬浮条件下仍可生长成为较大集落的细胞单克隆(潜在具有抗失巢凋亡能力的细胞),通过逆转录病毒载体特异的引物PCR扩增失巢凋亡抗性克隆基因组中的插入cDNA片段,以此获得食管癌细胞系cDNA文库中潜在的具有失巢凋亡抗性的基因。经测序发现其中一个失巢凋亡克隆中整合的cDNA片段包括人UBCH7/UBE2L3基因全长的编码序列(开放阅读框)。利用携带pMSCV-UBCH7的逆转录病毒感染NIH3T3细胞进行验证,结果显示细胞失巢凋亡抗性增强,并且在具有高转移潜能的食管癌细胞系MLuC1中降调UBCH7表达可减弱其失巢凋亡抗性。这些结果表明,UBCH7/UBE2L3是一个与食管癌失巢凋亡抗性相关的基因。 展开更多
关键词 失巢凋亡 食管癌(ESCC) 逆转录病毒cdna文库筛选 UBCH7
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