缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响 被引量：16

1

作者 童旭辉 董淑英 +1 位作者 蒋国君 范高福 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期329-332,共4页

目的观察宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响。方法采用荧光示踪实验检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物(油酸酰胺,维甲酸)对其功能的影响;采用标准细胞集落形成分析法检测Hela细... 目的观察宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响。方法采用荧光示踪实验检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物(油酸酰胺,维甲酸)对其功能的影响;采用标准细胞集落形成分析法检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞生长抑制作用的影响;采用Hoechst33258荧光染色检测缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞诱导凋亡作用的影响。结果荧光示踪实验结果显示油酸酰胺可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强该功能;标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷的细胞生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色结果显示,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞的诱导凋亡作用,而维甲酸则增强依托泊苷的诱导凋亡作用。结论宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能降低,依托泊苷的抗肿瘤作用下降;而当通讯功能增强时,其抗肿瘤作用则增加。 展开更多

关键词 依托泊苷 cx26/cx32 缝隙连接

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人类连接蛋白基因Cx26的上游调控部位

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作者 彭白露 周鸣 +1 位作者 曾朝阳 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期871-875,共5页

人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ ｋｂ 片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行... 人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ ｋｂ 片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行了ＣＡＴ报告基因分析．结果表明，此１．６ ｋｂ 片段其启动子功能部位位于５′端２００ ｂｐ 范围内．其中含有－ＴＧＴ盒（位于１８２～１８７ ｂｐ），一个ＴＴＡＡＡＡ 盒位于１５８～１６３ ｂｐ，这是人类Ｃｘ２６基因的又一启动区，这些发现无疑地对了解和阐明Ｃｘ２６基因在乳腺发育过程中及其病理生理作用的复杂调控具有特别重要的意义． 展开更多

关键词 cx26基因 基因调控 CAT 报告基因分析 乳腺 发育

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连接蛋白26在肝细胞癌中的表达及意义 被引量：1

3

作者 魏德全 杨展 +4 位作者 蒋吉英 郑洁 于树娜 丁洁 李进 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期272-274,278,共4页

目的：研究Cx26在肝细胞癌及正常肝组织中的表达情况。方法：免疫组化和RT-PCR检测Cx26和PCNA的表达。结果：①Cx26mRNA在正常肝组织组和肝癌组的表达水平分别为0．82±0．37和0．38±0．10；Cx26mRNA在HCC高分化组中的表达高... 目的：研究Cx26在肝细胞癌及正常肝组织中的表达情况。方法：免疫组化和RT-PCR检测Cx26和PCNA的表达。结果：①Cx26mRNA在正常肝组织组和肝癌组的表达水平分别为0．82±0．37和0．38±0．10；Cx26mRNA在HCC高分化组中的表达高于其在低分化组中的表达水平，分别为0．48±0．12和0．21±0．05。②Cx26在所有正常肝组织中均高表达，其在肝癌组织中的阳性率为64．71％，Cx26的表达随着肝癌分化程度的增加而增强。③在肝癌组织中，PCNA-LI在Cx26蛋白阳性表达组和阴性表达组分别为32．72％±4.21％和56．67％±7．21％，Cx26蛋白阳性者的PCNA-LI明显低于阴性者，PCNA表达水平与Cx26蛋白表达呈负相关。结论：①在肝癌组织中，Cx26的表达随着组织分化程度的降低而降低。②Cx26可作为评价肝癌预后的指标之一。 展开更多

关键词 连接蛋白-26 增殖细胞核抗原 肝细胞癌

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Stathmin与间隙连接蛋白26相互作用并在小鼠耳蜗表达

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作者 杨中纯 肖自安 谢鼎华 《中华耳科学杂志》 CSCD 2010年第1期51-56,共6页

目的筛选和鉴定连接蛋白26(connexin26,CX26)的相互作用蛋白质,分析其在小鼠内耳的表达,探讨与听觉的关系。方法酵母双杂交技术筛选CX26的相互作用蛋白质。在体外真核细胞表达系统HEK293细胞内过表达人CX26和相互作用蛋白质,观察它们的... 目的筛选和鉴定连接蛋白26(connexin26,CX26)的相互作用蛋白质,分析其在小鼠内耳的表达,探讨与听觉的关系。方法酵母双杂交技术筛选CX26的相互作用蛋白质。在体外真核细胞表达系统HEK293细胞内过表达人CX26和相互作用蛋白质,观察它们的定位,并用免疫共沉淀实验观察在体外真核细胞中是否存在相互作用。进一步在小鼠脑组织中用免疫共沉淀方法验证CX26和相互作用蛋白质在真核生物体内的相互作用。逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析相互作用蛋白质在小鼠耳蜗的表达。结果酵母双杂交实验筛选和鉴定到stathmin与CX26相互作用,两者在体外过表达系统HEK293真核细胞中有共定位,免疫共沉淀实验证实在体外真核细胞和真核生物体内存在相互作用,而且stathmin在小鼠耳蜗表达。结论stathmin与CX26相互作用,并且在小鼠耳蜗表达。 展开更多

关键词 STATHMIN cx26 相互作用蛋白质 酵母双杂交 免疫共沉淀

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CX26不同结构域错义突变体的表达和定位 被引量：1

5

作者 杨中纯 肖自安 谢鼎华 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期249-253,共5页

目的探讨CX26蛋白质的9个结构域上的不同错义突变体在细胞内的表达及功能改变的异同,初步研究CX26不同错义突变体的致聋机理。方法在CX26的9个结构域中各选择1个致聋的错义突变(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R1... 目的探讨CX26蛋白质的9个结构域上的不同错义突变体在细胞内的表达及功能改变的异同,初步研究CX26不同错义突变体的致聋机理。方法在CX26的9个结构域中各选择1个致聋的错义突变(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R165W、p.S199F、p.L214P),应用重叠区扩增基因拼接法和长引物快速法,构建成与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的载体,野生型CX26-EGFP作对照,脂质体转染HeLa细胞,Westernblot分析蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察各突变体在细胞膜上有无间隙连接斑形成。结果 CX26的9个结构域上的各1个错义突变体在HeLa细胞中均有表达,其中p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.vR165W突变体能在细胞膜上表达并形成间隙连接斑,p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体在细胞浆中表达,在细胞膜无表达,无间隙连接斑形成。结论 CX26的p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.R165W突变体在细胞内能被转运到细胞膜并形成间隙连接,而p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体失去被转运到细胞膜的功能,不能形成间隙连接。CX26的不同错义突变的致聋机制可能不同,与突变点所在的结构域可能没有相关性。 展开更多

关键词 连接蛋白26(cx26) 突变体 表达 间隙连接

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CX26第86位氨基酸多态性与遗传性聋相关性分析 被引量：1

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作者 时晰 董燕粉 +2 位作者 邱士伟 庄伟 乔月华 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第4期725-728,共4页

目的本研究在细胞生物学水平,对第86位氨基酸分别为Thr,Ser,Arg的CX26蛋白的膜定位生物学功能进行鉴定,进而结合临床数据分析该位点不同多态性突变的潜在致聋可能性。方法本研究借助GFP融合型慢病毒表达系统,分别将第86位氨基酸为Thr,Se... 目的本研究在细胞生物学水平,对第86位氨基酸分别为Thr,Ser,Arg的CX26蛋白的膜定位生物学功能进行鉴定,进而结合临床数据分析该位点不同多态性突变的潜在致聋可能性。方法本研究借助GFP融合型慢病毒表达系统,分别将第86位氨基酸为Thr,Ser,Arg的CX26-GFP融合蛋白在小鼠螺旋神经节细胞中进行表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的细胞膜定位现象。结果第86位氨基酸发生Ser突变后,CX26蛋白仍能够正常定位于细胞膜表面,并形成间隙链接结构,这一表型与(第86位氨基酸为Thr的)野生型CX26蛋白并无明显差异;只有当第86位氨基酸突变为Arg时,导致CX26蛋白功能丧失。结论这些现象表明CX26 T86R可能为潜在致聋突变,而CX26 T86S为不影响蛋白功能的氨基酸多态性突变。该结论与临床筛查经验性结果一致。 展开更多

关键词 遗传性耳聋 cx26蛋白 螺旋神经节

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非综合征性耳聋(NSHL)患者Cx26基因突变分析及两种突变体的亚细胞定位 被引量：5

7

作者 李景之 胡艺俏 +5 位作者 王树辉 陈红胜 潘乾 夏昆 胡正茂 冯永 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期705-712,共8页

为分析中国人群非综合征性耳聋(Nonsyndromic hearing loss,NSHL)患者Cx26基因的突变情况和特性,研究其中两种突变的亚细胞定位情况,文章运用PCR直接测序的方法对139例无亲缘关系的NSHL患者进行突变筛查,将两种突变p.F115C和p.V37I构建... 为分析中国人群非综合征性耳聋(Nonsyndromic hearing loss,NSHL)患者Cx26基因的突变情况和特性,研究其中两种突变的亚细胞定位情况,文章运用PCR直接测序的方法对139例无亲缘关系的NSHL患者进行突变筛查,将两种突变p.F115C和p.V37I构建到pEGFP表达载体,并转染Hela细胞,研究其细胞表达和定位情况。在139例无亲缘关系的NSHL患者中,31例患者检测到Cx26基因突变,检出率为22.3%。一共检测到10种不同类型的碱基变异,包括6种突变和4种多态,其中包括1种未见报道的新变异p.F115C。p.F115C和p.V37I两种突变体转染Hela细胞后,亚细胞定位情况与野生型无差异,初步研究表明这两种突变不影响该蛋白形成细胞间隙连接通道。 展开更多

关键词 cx26基因 听力损伤 间隙连接

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脊髓Cx43通过JNK通路介导大鼠慢性吗啡镇痛耐受 被引量：5

8

作者 沈宁 郭瑞鲜 +3 位作者 胡芬 崔宇 陈培熹 冯鉴强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期372-376,共5页

目的探讨脊髓缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在慢性吗啡镇痛耐受中的作用及其是否通过JNK通路介导慢性吗啡镇痛耐受。方法 Sprague-Dawley(SD)成年♂大鼠连续7 d鞘内注射吗啡10μl(1.5 g.L-1)建立慢性吗啡镇痛耐受模型。采用热辐射... 目的探讨脊髓缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在慢性吗啡镇痛耐受中的作用及其是否通过JNK通路介导慢性吗啡镇痛耐受。方法 Sprague-Dawley(SD)成年♂大鼠连续7 d鞘内注射吗啡10μl(1.5 g.L-1)建立慢性吗啡镇痛耐受模型。采用热辐射甩尾法测定甩尾潜伏期以观察吗啡的镇痛效果。应用Western blot法检测Cx43、磷酸化JNK(p-JNK)、总JNK(t-JNK)、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和总c-Jun(t-c-Jun)的表达;免疫组织荧光染色法检测脊髓Cx43的免疫反应性(immnunoreactivity,IR)。结果吗啡耐受引起大鼠脊髓Cx43的表达明显增多;Gap26(特异性Cx43阻断剂,1.5 g.L-1,10μl)可以拮抗吗啡镇痛耐受,并且明显地抑制慢性吗啡镇痛耐受所致的脊髓JNK及c-Jun的激活。结论脊髓Cx43通过JNK通路介导大鼠慢性吗啡镇痛耐受。 展开更多

关键词 吗啡镇痛耐受 Gap26 cx43 JNK C-JUN 脊髓

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Connexin蛋白在老年性耳聋中作用的研究进展 被引量：3

9

作者 杨泽垠 曲雁 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第2期339-343,共5页

随着社会老龄化的不断加快,老年性耳聋(年龄相关性听力损失)的发病率越来越高。它严重影响老年人的生活质量,还可能导致社会孤立、抑郁,甚至痴呆。老年性耳聋是一种极其复杂的多基因和多因素疾病。Connexin蛋白在内耳发育和维持正常听... 随着社会老龄化的不断加快,老年性耳聋(年龄相关性听力损失)的发病率越来越高。它严重影响老年人的生活质量,还可能导致社会孤立、抑郁,甚至痴呆。老年性耳聋是一种极其复杂的多基因和多因素疾病。Connexin蛋白在内耳发育和维持正常听力过程中起着重要作用,它与老年性耳聋是密切相关的。本文就Connexin蛋白的表达在老年性耳聋中的作用作一综述。对Connexin蛋白与老年性耳聋关系的研究将有利于揭示各种因素导致老年性耳聋的机制,并为临床上防治老年性耳聋提供新的、有效的途径和方法。 展开更多

关键词 老年性耳聋 连接蛋白 连接蛋白26

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GJB2基因突变引起耳蜗功能改变的机制 被引量：4

10

作者 于一丁 赵雪雷 +3 位作者 文铖 李悦 于宁 黄丽辉 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期701-704,共4页

GJB2基因是最常见耳聋基因,主要编码的缝隙连接蛋白26(connexin26,Cx26)是耳蜗中最重要的一种缝隙连接蛋白;缝隙连接系统在维持耳蜗内的正常钾循环及微环境中起重要作用。GJB2基因是耳蜗中表达最强的一种连接蛋白,参与构成耳蜗中的缝隙... GJB2基因是最常见耳聋基因,主要编码的缝隙连接蛋白26(connexin26,Cx26)是耳蜗中最重要的一种缝隙连接蛋白;缝隙连接系统在维持耳蜗内的正常钾循环及微环境中起重要作用。GJB2基因是耳蜗中表达最强的一种连接蛋白,参与构成耳蜗中的缝隙连接(gap junction,GJ)系统,对于维持内耳微环境及细胞间的协调稳定具有重要作用。 展开更多

关键词 GJB2基因 耳聋基因 耳蜗功能 缝隙连接 连接蛋白 cx26

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DNA甲基转移酶1和GJB2基因多态性与突发性聋易感性研究 被引量：1

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作者 张岩岩 刘华 +1 位作者 宋扬 郭海艳 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期160-164,共5页

目的研究DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因rs2228612位点和连接蛋白26基因(GJB2)rs55704559位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与突发性聋(sudden sensorineural hearing loss,SSHL)易感性的关... 目的研究DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因rs2228612位点和连接蛋白26基因(GJB2)rs55704559位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与突发性聋(sudden sensorineural hearing loss,SSHL)易感性的关系。方法选择2014年5月至2018年10月期间收治的185例SSHL患者作为研究组,其中男92例,女93例,有吸烟史者45例,有饮酒史者54例。选择185例听力正常人作为对照组,其中男96例,女89例,有吸烟史者51例,有饮酒史者58例。采集所有受试者外周血后采用测序法检测DNMT1基因rs2228612位点和GJB2基因rs55704559位点基因型,并分析其与突聋易感性的关系。结果DNMT1基因rs2228612位点C等位基因是SSHL的保护因素(P<0.05),GJB2基因rs55704559位点G等位基因是SSHL发生的危险因素(P<0.01);在男性和吸烟人群中观察到DNMT1基因rs2228612位点突基因型是SSHL风险的保护因素(P<0.05),在女性、吸烟、饮酒人群中观察到GJB2基因rs55704559位点突变基因型是SSHL易感的危险因素(P<0.05)。结论DNMT1基因rs2228612位点和GJB2基因rs55704559位点SNP与SSHL易感性相关,这种相关性可能与性别、吸烟、饮酒状态有关。 展开更多

关键词 DNA甲基转移酶1 连接蛋白26 突发性聋 单核苷酸多态性

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