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2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较
被引量：
6
1
作者
姜国忠
谢华
+2 位作者
郭玉忠
范天黎
薛乐勋
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2004年第1期41-44,共4页
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白...
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列 ;另一种是反向PCR(IPCR) ,酶切后的DNA自身环化做模板 ,用 2对基因特异引物反向扩增。结果 :2轮PCR后 ,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物 ,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起。而反向PCR在得到pvuⅡ和StuⅠ消化的自连文库中扩增得到 2 .5kb特异产物 ,经测序发现 ,片段两侧为基因特异引物 ,部分序列与已知序列相一致。Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA。结论 :IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法。
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关键词
反向
pcr
连接介导法pcr
盐藻
肌动蛋白
旁侧序列cDNA
简并引物
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职称材料
题名
2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较
被引量：
6
1
作者
姜国忠
谢华
郭玉忠
范天黎
薛乐勋
机构
郑州大学细胞生物学研究室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2004年第1期41-44,共4页
基金
河南省重大科技攻关基金资助项目 0 12 2 0 3 2 5 0 0
河南省杰出人才创新基金资助项目 0 2 2 10 0 190 0
文摘
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列 ;另一种是反向PCR(IPCR) ,酶切后的DNA自身环化做模板 ,用 2对基因特异引物反向扩增。结果 :2轮PCR后 ,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物 ,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起。而反向PCR在得到pvuⅡ和StuⅠ消化的自连文库中扩增得到 2 .5kb特异产物 ,经测序发现 ,片段两侧为基因特异引物 ,部分序列与已知序列相一致。Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA。结论 :IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法。
关键词
反向
pcr
连接介导法pcr
盐藻
肌动蛋白
旁侧序列cDNA
简并引物
Keywords
inverse
pcr
(I
pcr
)
ligation-mediated
pcr
(LM
pcr
)
Dunaliella salina
Genome walking
Actin Flanking sequences
分类号
Q754 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较
姜国忠
谢华
郭玉忠
范天黎
薛乐勋
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2004
6
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