血管外膜成纤维细胞及其还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶激活在血管损伤中的作用 被引量：5

1

作者 王洋 雷燕 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2015年第4期404-407,共4页

血管外膜是血管壁最复杂的组成部分,血管外膜成纤维细胞(AF)是血管外膜主要的细胞成分,在血管的病理生理过程中发挥着重要作用。AF的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶激活与活性氧生成是多种血管损伤的始发阶段和共同机制... 血管外膜是血管壁最复杂的组成部分,血管外膜成纤维细胞(AF)是血管外膜主要的细胞成分,在血管的病理生理过程中发挥着重要作用。AF的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶激活与活性氧生成是多种血管损伤的始发阶段和共同机制。本综述对AF及其NADPH氧化酶、活性氧在血管损伤中的作用进行了总结。 展开更多

关键词 血管外膜成纤维细胞 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 血管损伤

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抑制Wnt/β-catenin信号和NOX4表达阻碍二氧化硅诱导肺上皮细胞损伤的修复 被引量：4

2

作者 马佳 杨丹丹 +2 位作者 杨佳丽 刘晓明 蔡倩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期132-139,共8页

目的探究Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)相互作用对二氧化硅(SiO_(2))诱导的肺脏上皮细胞增殖的影响。方法采用二氧化硅气道滴灌C57BL/6小鼠制备小鼠矽肺模型,免疫组织化学染色法检测矽肺... 目的探究Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)相互作用对二氧化硅(SiO_(2))诱导的肺脏上皮细胞增殖的影响。方法采用二氧化硅气道滴灌C57BL/6小鼠制备小鼠矽肺模型,免疫组织化学染色法检测矽肺模型小鼠肺组织NOX4的表达;二氧化硅刺激BEAS-2B人肺上皮细胞制备上皮细胞氧化损伤细胞模型,Wnt信号活化的条件培养基(Wnt3a-CM)及Wnt信号抑制剂XAV939改变Wnt信号活性,表达NOX4短发夹RNA(NOX4 shRNA)的腺病毒感染人肺上皮细胞敲低细胞NOX4水平。Western blot法检测肺组织和人肺上皮细胞Wnt3a、活化β联蛋白(ABC)、转录因子4(TCF4)、NOX4和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达;CCK-8法检测不同剂量二氧化硅刺激人肺上皮细胞24 h和48 h对细胞存活率及敲低NOX4的表达对细胞增殖的影响;CellROX?荧光探针负载法检测二氧化硅作用下人肺上皮细胞活性氧(ROS)的水平。结果成功制备小鼠矽肺模型和氧化损伤细胞模型。二氧化硅刺激肺脏上皮细胞可显著激活Wnt/β-catenin信号和诱导NOX4表达,使ROS大量释放,而ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)与二氧化硅共同作用可抑制ROS的释放,进而抑制Wnt/β-catenin信号ABC蛋白表达;Wnt3a-CM诱导的Wnt信号激活可上调NOX4的表达;反之,Wnt信号抑制剂XAV939则抑制NOX4的表达;而敲低NOX4表达后,可显著抑制Wnt/β-catenin信号ABC蛋白和cyclin D1的表达,抑制细胞增殖。结论阻断Wnt/β-catenin信号、下调NOX4表达抑制肺上皮细胞增殖,抑制二氧化硅诱导的肺脏上皮细胞损伤修复。 展开更多

关键词 二氧化硅(SiO_(2)) WNT β联蛋白(β-catenin) 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nox4) 活性氧(ROS) 矽肺 细胞增殖

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NADPH氧化酶4抑制剂对缺氧诱导的人RPE细胞中VEGF表达的抑制作用 被引量：1

3

作者 李静 杨静 康前雁 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期4-9,共6页

目的观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)抑制剂对缺氧诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将APRE-19细胞分为Avastin干预组和VAS2870干预组,并按照药物剂量不同将Avastin干预组亚分为... 目的观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)抑制剂对缺氧诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将APRE-19细胞分为Avastin干预组和VAS2870干预组,并按照药物剂量不同将Avastin干预组亚分为常氧对照组、缺氧对照组及0.25 mg/ml、0.50 mg/ml和0.75 mg/ml Avastin干预组,将VAS2870干预组亚分为1μmol/ml、3μmol/ml和5μmol/ml VAS2870干预组,缺氧对照组采用终浓度为300μmol/L CoCl2处理ARPE-19细胞以建立细胞化学缺氧模型。采用细胞免疫荧光染色技术对不同干预组细胞中NOX4和VEGF表达进行测定和定位,采用Western blot法对不同干预组细胞中NOX4和VEGF蛋白相对表达量进行测定和比较。结果Western blot法检测显示,常氧对照组、缺氧对照组及0.25 mg/ml、0.50 mg/ml和0.75 mg/ml Avastin干预组NOX4蛋白相对表达量分别为0.657±0.153、1.000±0.200、1.206±0.300、1.260±0.200和1.413±0.273,VEGF-A蛋白相对表达量分别为0.821±0.110、1.210±0.100、0.672±0.100、0.340±0.120和0.300±0.130,组间总体比较差异均有统计学意义(F=17.631,P<0.001;F=4.777,P=0.020),其中0.75 mg/ml Avastin干预组细胞中NOX4蛋白表达量明显高于常氧对照组,差异有统计学意义(P<0.001),0.25、0.50和0.75 mg/ml Avastin干预组VEGF-A表达量均明显低于缺氧对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。常氧对照组、缺氧对照组及1μmol/ml、3μmol/ml和5μmol/ml VAS2870干预组细胞中NOX4的蛋白相对表达量分别为0.970+0.120、1.060+0.130、0.880+0.130、0.567+0.135和0.450+0.120,VEGF-A蛋白相对表达量分别为0.387+0.135、0.627+0.125、0.370+0.140、0.363+0.140和0.160+0.100,组间总体比较差异均有统计学意义(F=12.933,P<0.001;F=4.948,P<0.05),其中3μmol/ml和5μmol/ml VAS2870干预组细胞中NOX4蛋白相对表达量明显低于缺氧对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001);1μmol/ml、3μmol/ml和5μmol/ml VAS2870干预组细胞中VEGF-A蛋白相对表达量明显低于缺氧对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NOX4抑制剂可抑制人RPE细胞中VEGF-A表达。 展开更多

关键词 缺氧 视网膜色素上皮细胞 人 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4 血管内皮生长因子 抑制剂

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益气活血通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织RAGE/NOX4/ROS信号通路及氧化应激的影响 被引量：21

4

作者 强家维 靳贺超 +3 位作者 梁胜然 张冠文 吕哲 郭登洲 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期244-255,共12页

目的:观察益气活血通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠模型晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/活性氧(ROS)信号通路以及氧化应激的影响,探讨其治疗DKD的可能作用机制。方法:雄性SD大鼠40只随机分为正常对照... 目的:观察益气活血通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠模型晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/活性氧(ROS)信号通路以及氧化应激的影响,探讨其治疗DKD的可能作用机制。方法:雄性SD大鼠40只随机分为正常对照组(CON)和造模组。造模组大鼠通过为期6周的高糖高脂饲料饲养,联合链脲佐菌素(每kg大鼠体质量注射35 mg链脲佐菌素)建立DKD大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组(MOD)、益气活血通络方低剂量组(DL)、益气活血通络方高剂量组(DH)、厄贝沙坦组(IRB)进行灌胃,给药组分别灌胃给药20周,期间CON组及MOD组予等量生理盐水。给药结束后全自动分析仪检测各组大鼠尿微量白蛋白与尿肌酐比值(UACR),羟胺法检测血清锰超氧化物歧化酶(SOD2)活性,TBA法检测血清丙二醛(MDA)浓度;HE染色法、Masson染色法、PAS染色法观察各组大鼠肾组织病理形态学变化;二氢乙锭(DHE)荧光探针检测大鼠肾组织ROS表达;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织RAGE、NOX4蛋白表达;Western blot法检测SOD2、RAGE、NOX4蛋白表达;Real-time PCR检测大鼠肾组织NOX4 mRNA表达;结果:与CON组比较,MOD组大鼠UACR值显著升高,SOD2活性显著降低,MDA浓度明显升高(P<0.01),有明显肾脏病理损伤表现,肾小球肥大,基底膜明显增厚,系膜基质增生,部分出现K-W结节,肾小管上皮细胞泡沫样变,提示模型制备成功;另外,ROS表达增多(P<0.05),NOX4、RAGE蛋白在肾小球系膜细胞表达显著升高(P<0.01),NOX4的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),SOD2蛋白表达水平显著降低,NOX4、RAGE蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与MOD组比较,DH组及IRB组UACR、MDA含量水平明显降低,SOD2活性升高(P<0.05,P<0.01),DL组差异无统计学意义;肾组织病理学明显改善;DL组、DH组、IRB组RAGE、NOX4的蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01);DH组ROS表达减少(P<0.05);DH组、IRB组SOD2蛋白表达升高,NOX4 mRNA,RAGE、NOX4蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血通络方可能通过RAGE/NOX4/ROS通路减少了DKD大鼠ROS的生成,缓解氧化应激,减少蛋白尿,从而起到明显的减轻肾脏损害及延缓病程进展作用。 展开更多

关键词 益气活血通络方 糖尿病肾病(DKD) 晚期糖基化终末产物受体(RAGE) 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nox4) 活性氧(ROS) 氧化应激

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NADPH氧化酶4抑制剂对贝伐单抗诱导人RPE细胞上皮-间质转化的抑制作用 被引量：2

5

作者 谢超慧 郝相慧 +1 位作者 杨玲玲 徐海峰 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期507-513,共7页

目的观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)抑制剂对贝伐单抗诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞发生上皮-间质转化(EMT)的影响。方法将人RPE细胞系ARPE-19细胞分为空白对照组、贝伐单抗组、贝伐单抗+VAS2870组和贝伐单抗+GKT137831... 目的观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)抑制剂对贝伐单抗诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞发生上皮-间质转化(EMT)的影响。方法将人RPE细胞系ARPE-19细胞分为空白对照组、贝伐单抗组、贝伐单抗+VAS2870组和贝伐单抗+GKT137831组,其中空白对照组不做任何处理,贝伐单抗组、贝伐单抗+VAS2870组和贝伐单抗+GKT137831组培养基中分别加入0.25 g/L贝伐单抗、0.25 g/L贝伐单抗+3μmol/L VAS2870、0.25 g/L贝伐单抗+20μmol/L GKT137831培养72 h,VAS2870和GKT137831均为NOX4抑制剂。采用实时荧光定量PCR和Western blot法测定NOX4和EMT标志物纤维连接蛋白(FN)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白-1(ZO-1)mRNA和蛋白表达水平;采用细胞免疫荧光染色法验证NOX4和EMT标志物蛋白在各组细胞中的表达情况。结果实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示,空白对照组、贝伐单抗组、贝伐单抗+VAS2870组和贝伐单抗+GKT137831组细胞中FN、Vimentin、α-SMA、ZO-1和NOX4 mRNA和蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(mRNA:F=97.07、195.40、722.40、38.56、70.81,均P<0.001;蛋白:F=23.09、64.58、58.19、26.97、63.19,均P<0.001),其中贝伐单抗组FN、Vimentin、α-SMA和NOX4 mRNA和蛋白相对表达量明显高于空白对照组,ZO-1 mRNA和蛋白相对表达量明显低于空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。贝伐单抗+VAS2870组和贝伐单抗+GKT137831组FN、Vimentin、α-SMA和NOX4 mRNA和蛋白相对表达量明显低于贝伐单抗组,ZO-1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于贝伐单抗组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,贝伐单抗组FN、Vimentin、α-SMA荧光强度强于空白对照组,ZO-1荧光强度弱于空白对照组;贝伐单抗+VAS2870组和贝伐单抗+GKT137831组FN、Vimentin、α-SMA荧光强度弱于贝伐单抗组,ZO-1荧光强度强于贝伐单抗组。结论NOX4参与了贝伐单抗诱导RPE细胞EMT的发生,NOX4抑制剂可减轻贝伐单抗诱导人RPE细胞的EMT程度。 展开更多

关键词 贝伐单抗 视网膜色素上皮细胞 上皮-间质转化 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶-4 抑制剂

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TGF-β1通过激活NOX4/ROS通路促进宫颈癌细胞的侵袭和迁移 被引量：6

6

作者 汪洪涛 王井 +1 位作者 刘红丽 王效静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期121-127,共7页

目的探讨转化生长因子β1/尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶/活性氧(TGF-β1/NOX4/ROS)信号通路在宫颈癌细胞侵袭和迁移中的作用。方法采用5 ng/mL TGF-β1处理培养的SiHa、 CaSki、 HeLa、 C4-I和C33A宫颈癌细胞4 h或8 h, 2′, 7′-... 目的探讨转化生长因子β1/尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶/活性氧(TGF-β1/NOX4/ROS)信号通路在宫颈癌细胞侵袭和迁移中的作用。方法采用5 ng/mL TGF-β1处理培养的SiHa、 CaSki、 HeLa、 C4-I和C33A宫颈癌细胞4 h或8 h, 2′, 7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色结合流式细胞术检测处理前后SiHa、 CaSki、 HeLa、 C4-I和C33A宫颈癌细胞ROS水平;转染NOX4小干扰RNA(NOX4-siRNA)或加入NOX4信号通路抑制剂二亚苯基碘氯化物(DPI), Western blot法检测宫颈癌HeLa细胞NOX4蛋白水平, Transwell^(TM)侵袭和迁移实验检测TGF-β1对宫颈癌细胞侵袭和迁移能力的影响。结果 TGF-β1显著上调HPV阳性SiHa、 CaSki、 HeLa和C4-I宫颈癌细胞NOX4蛋白表达,促进ROS产生,并增强宫颈癌细胞的侵袭和迁移性;敲低NOX4基因或使用NOX4通路抑制剂DPI可逆转这种作用。结论 TGF-β1激活NOX4/ROS信号通路增强宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。 展开更多

关键词 转化生长因子β1(TGF-β1) 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nox4) 活性氧(ROS) 宫颈癌 侵袭性

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北五味子提取物对糖尿病大鼠心肌组织中NOX2和p47phox表达的影响 被引量：5

7

作者 曲萌 于春艳 +7 位作者 翁诗雅 高润泽 王珍霞 宋宇 李旭甡 郑鸿 尹含钰 董志恒 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1029-1035,I0006,共8页

目的:探讨北五味子提取物(SCE)对糖尿病大鼠心肌组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚单位NOX2和p47phox表达的影响,并阐明其对大鼠心肌的保护作用。方法:选取49只清洁级健康雄性Wistar大鼠采用腹腔单次注射链脲佐菌素(... 目的:探讨北五味子提取物(SCE)对糖尿病大鼠心肌组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚单位NOX2和p47phox表达的影响,并阐明其对大鼠心肌的保护作用。方法:选取49只清洁级健康雄性Wistar大鼠采用腹腔单次注射链脲佐菌素(STZ)方法建立糖尿病大鼠模型。45只成模大鼠随机分为模型组(n=12)、低剂量(100 mg·kg^-1)SCE组(n=11)、中剂量(200 mg·kg^-1)SCE组(n=11)和高剂量(400 mg·kg^-1)SCE组(n=11),另取10只Wistar大鼠作为正常对照组。干预12周后麻醉下腹主动脉取血,分离血清,取心脏,称取左心室质量,计算左心室质量指数(LVMI),全自动分析仪检测血清中空腹血糖(FBG)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,HE染色观察各组大鼠心肌病理形态表现,比色法测定各组大鼠心肌组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽激酶(GSH)活性,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心肌组织中NOX2和p47phox mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中NOX2和p47phox蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠LVMI增加(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,血清中FBG、CK和LDH水平及心肌组织中MDA水平升高(P<0.05或P<0.01),心肌组织中SOD和GSH活性明显降低(P<0.05),而NOX2和p47phox mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,不同剂量SCE组大鼠LVMI降低(P<0.05或P<0.01),心肌损伤减轻,血清中FBG、CK和LDH水平及心肌组织中MDA水平降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织中SOD和GSH活性升高(P<0.05或P<0.01),NOX2和p47phox mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),且呈一定的剂量依赖性。结论:SCE可降低糖尿病大鼠FBG水平,抑制心肌NADPH氧化酶表达,降低心肌组织氧化应激水平,该作用可能与其心肌保护作用有关。 展开更多

关键词 五味子提取物 糖尿病 心肌病 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 nox2 p47phox

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芦荟苷对糖尿病肾病大鼠NOX4/ROS/p38 MAPK信号通路及足细胞功能的影响 被引量：19

8

作者 马冰沁 钱唯韵 +1 位作者 罗振国 汪良芝 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期1-7,共7页

目的探讨芦荟苷对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞功能及尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/活性氧(ROS)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法高糖高脂饲料饲养大鼠4周,腹腔注射40 mg/kg STZ建立DN大鼠模型,随机分为... 目的探讨芦荟苷对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞功能及尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/活性氧(ROS)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法高糖高脂饲料饲养大鼠4周,腹腔注射40 mg/kg STZ建立DN大鼠模型,随机分为模型组、阳性对照组、(低、中、高)剂量实验组;正常组大鼠不进行处理。阳性对照组灌胃9.45 mg/(kg·d)糖适平;(低、中、高)剂量实验组分别灌胃10、20、40 mg/(kg·d)芦荟苷,正常组、模型组灌胃等体积蒸馏水,连续6周。血糖仪检测空腹血糖水平;酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色观察大鼠肾组织形态;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)试剂盒检测肾组织中SOD、MDA、ROS水平;蛋白免疫印迹检测肾组织中NOX4、p38 MAPK、phospho-p38 MAPK、肾小球足细胞裂隙跨膜蛋白Nephrin、Podocin水平。结果给药前,与正常组相比,模型组、阳性对照组、(低、中、高)剂量实验组空腹血糖水平升高(P<0.05)。给药后,模型组肾组织肾小球肥大,系膜增厚和肾小球基底膜增厚,间质炎症浸润;(低、中)剂量实验组肾小球肥大现象逐渐缓解,肾小球系膜轻-中度增生,肾小管扩张减缓;高剂量实验组肾组织形态正常,结构清晰,肾小球、肾小管形态规则。与正常组相比,模型组空腹血糖,血清中IL-1β、TNF-α,肾组织中MDA、ROS,NOX4、phospho-p38 MAPK蛋白水平升高(P<0.05),肾组织中SOD水平、SOD/MDA,Nephrin、Podocin蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组、高剂量实验组空腹血糖,血清中IL-1β、TNF-α,肾组织中MDA、ROS,NOX4、phospho-p38 MAPK蛋白水平降低(P<0.05),肾组织中SOD水平、SOD/MDA,Nephrin、Podocin蛋白水平升高(P<0.05);中剂量实验组空腹血糖,血清中IL-1β、TNF-α,肾组织中MDA、ROS,NOX4蛋白水平降低(P<0.05),肾组织中SOD水平、SOD/MDA,Nephrin、Podocin蛋白水平升高(P<0.05);低剂量实验组空腹血糖,血清中IL-1β、TNF-α,肾组织中MDA,NOX4蛋白水平降低(P<0.05);肾组织中SOD水平水平升高(P<0.05)。与给药前相比,给药后阳性对照组、(低、中、高)剂量实验组空腹血糖水平降低(P<0.05)。结论芦荟苷可能通过下调NOX4/ROS/p38信号通路,实现抗炎和对足细胞的恢复。 展开更多

关键词 芦荟苷 糖尿病肾病 足细胞 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4/活性氧/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路

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miR-322-5p通过NOX4调控细胞凋亡抑制大鼠神经管畸形发生 被引量：2

9

作者 黄琬淇 刘玉思 +1 位作者 顾卉 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期582-587,共6页

目的探讨miR-322-5p调控烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的表达及改善细胞凋亡对大鼠神经管闭合的作用。方法采用全反式维甲酸(ATRA)诱导大鼠神经管畸形(NTDs)模型。通过实时定量PCR检测miR-322-5p在ARTA诱导的大鼠胚胎脊髓中的... 目的探讨miR-322-5p调控烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的表达及改善细胞凋亡对大鼠神经管闭合的作用。方法采用全反式维甲酸(ATRA)诱导大鼠神经管畸形(NTDs)模型。通过实时定量PCR检测miR-322-5p在ARTA诱导的大鼠胚胎脊髓中的表达情况;通过Western blotting检测NOX4及凋亡蛋白的表达情况;采用免疫组织化学技术和组织免疫荧光技术观察NOX4在胚胎神经管中的定位和表达情况;通过对C17.2神经干细胞转染miRNA-空白对照(miR-NC)、mimic-322-5p及NOX4高表达质粒,明确NOX4和miR-322-5p之间的调控作用,采用实时定量PCR检测转染后miR-322-5p的表达,并通过Western blotting检测转染后细胞NOX4以及凋亡蛋白的表达情况。结果在ATRA诱导的大鼠NTDs模型中,NOX4表达上调,miR-322-5p表达下调。在C17.2神经干细胞中,转染miR-322-5p抑制了NOX4的表达,也抑制了凋亡蛋白的表达。结论miR-322-5p可抑制NOX4的表达,并抑制大鼠NTDs的发生。 展开更多

关键词 神经管缺陷 miR-322-5p 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 细胞凋亡

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NOX4相关信号通路在肝纤维化发病机制中的作用 被引量：4

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作者 罗方云 黄晨恺 朱萱 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第3期298-302,共5页

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)是一种多蛋白质亚基组成的复合体,是活性氧簇(ROS)生成的主要酶类。现已证实NOXs介导的氧化应激与肝纤维化的发生发展密切相关,而其亚基NOX4则起了关键作用,其生成的ROS不仅能直接对引起肝纤... 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)是一种多蛋白质亚基组成的复合体,是活性氧簇(ROS)生成的主要酶类。现已证实NOXs介导的氧化应激与肝纤维化的发生发展密切相关,而其亚基NOX4则起了关键作用,其生成的ROS不仅能直接对引起肝纤维化的主要细胞?肝星状细胞(HSCs)具有显著的活化效应,还可通过介导包括HSCs在内的多种细胞内的信号传导通路参与HSCs的持续激活、细胞外基质的异常增殖、肝细胞的凋亡及肌成纤维细胞的迁移等过程,最终诱导肝纤维化的发生与发展。文章就NOX4相关信号通路在肝纤维化发病机制中的作用进行综述。 展开更多

关键词 肝纤维化 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 活性氧簇 信号通路

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成纤维细胞生长因子13通过ROS/Caspase-3通路调控非小细胞肺癌A549细胞的凋亡 被引量：3

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作者 刘天宇 唐铖铖 +4 位作者 冯光 雷静静 孙晨皓 王令 路宏朝 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期451-459,共9页

目的:探讨成纤维细胞生长因子13(fibroblast growth factor 13,FGF13)对非小细胞肺癌A549细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成和凋亡的影响及其调控机制。方法:WB法检测FGF13在人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549、H460细胞... 目的:探讨成纤维细胞生长因子13(fibroblast growth factor 13,FGF13)对非小细胞肺癌A549细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成和凋亡的影响及其调控机制。方法:WB法检测FGF13在人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549、H460细胞中的本底表达量。采用FGF13过表达载体转染BEAS-2B和A549细胞;设计两组靶向FGF13的shRNA序列,构建慢病毒干扰载体,包装病毒后侵染A549细胞,采用qPCR和WB法检测干扰效果,DCFH-DA探针结合荧光酶标仪分析敲减FGF13对A549细胞内ROS水平的影响,MitoSOX与WB法检测对线粒体ROS水平及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)蛋白表达量的影响,Annexin V-FITC-PI双染法检测对细胞凋亡和Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白表达的影响。结果:与BEAS-2B细胞相比,FGF13蛋白在两种肺癌细胞中均高表达(均P<0.05)。成功构建FGF13过表达、低表达的A549细胞系。过表达FGF13后,BEAS-2B和A549细胞内ROS水平显著降低(P<0.05);敲减FGF13表达后,A549细胞内ROS水平显著升高(P<0.05);然而过表达及干扰FGF13对A549细胞内线粒体ROS水平无显著影响,但NOX4蛋白表达量显著下调(P<0.05)及显著上调(P<0.05)。FGF13干扰后A549细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著上调(P<0.05)。结论:FGF13可能通过NOX家族途径调控ROS的生成,并通过ROS/Caspase-3通路调控A549细胞凋亡。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子13 A549细胞 活性氧 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 CASPASE-3 凋亡

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单增李斯特菌nox基因的克隆、表达以及功能 被引量：2

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作者 吴嫚 李森 +5 位作者 陈国薇 罗勤 刘武康 丁承超 董庆利 刘箐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期46-51,共6页

以Gen Bank中报道的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)野生型菌株EGDe的nox基因(Gen Bank ID:986631)为研究对象,探讨在高等动植物中普遍存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在Lm中是否也可以介导产生活性氧(reactive oxygen s... 以Gen Bank中报道的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)野生型菌株EGDe的nox基因(Gen Bank ID:986631)为研究对象,探讨在高等动植物中普遍存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在Lm中是否也可以介导产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)。首先通过诱导nox基因在BL21中表达产生Nox蛋白,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定该蛋白质分子质量;然后构建过表达菌株EGDe-nox,测定ROS产生情况,并使用实时荧光定量-聚合酶链式反应检测nox基因的过表达对Lm毒力基因表达的影响。结果表明,经鉴定Nox蛋白分子质量约为33 k D,过表达菌株EGDe-nox与对照组EGDe的ROS产生量相比并无多大变化,nox基因的过表达会导致与侵袭相关的基因act A、inlA和inlB以及毒力基因prfA的表达上调。由此推测,该Nox蛋白不能独立主导ROS的产量,但其过表达却可以增强毒力基因表达上调。本研究为继续探讨细菌中Nox的作用提供一定的参考依据。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 nox基因 活性氧

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木薯NOX基因家族成员的生物信息学及其表达分析 被引量：3

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作者 胡广 梁大成 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2178-2187,共10页

【目的】搜索鉴定木薯还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)基因家族成员,分析其生物学信息及在不同组织和非生物胁迫下的表达模式,为深入研究该家族基因对木薯块根发育的调控机理及提高木薯抗逆性提供理论参考。【方法】从JGI数... 【目的】搜索鉴定木薯还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)基因家族成员,分析其生物学信息及在不同组织和非生物胁迫下的表达模式,为深入研究该家族基因对木薯块根发育的调控机理及提高木薯抗逆性提供理论参考。【方法】从JGI数据库下载木薯的基因组序列,由pfam数据库下载4个NOX蛋白结构域相关的HMM文件,通过HMMER程序筛选NOX基因家族成员,利用生物信息学分析软件对该家族蛋白的理化性质、氨基酸序列和结构特征进行分析。基于GEO数据库的转录组测序(RNA-Seq)数据,对木薯NOX基因家族成员在不同组织和干旱胁迫下的表达模式进行分析。【结果】从木薯基因组中共鉴定到15个NOX基因家族成员,包括9个NOX基因和6个FRO基因(NOX祖先基因)。FRO基因的外显子数(6~9个)明显少于NOX基因的外显子数(11~14个),且FRO基因的内含子序列较NOX基因短,NOX基因的第一个外显子相对保守。15个NOX基因家族成员分布在木薯的9条染色体和1个结构支架上,且均被定位在染色体末端,除6号染色体有4个基因、8号和14号染色体有2个基因外,其他染色体均只有1个基因。木薯NOX蛋白的分子量和氨基酸数明显高于FRO蛋白,而理论等电点(pI)差异不明显。FRO蛋白含6~9个保守跨膜结构域,而NOX蛋白均只含4个跨膜螺旋区,且均位于第350~750位氨基酸残基。木薯NOX家族蛋白有10个保守结构域,其中Motif1和Motif8存在于所有的NOX和FRO蛋白中,Motif6为NOX蛋白所特有,Motif3只独立存在于FRO蛋白中。NOX蛋白均具有典型的保守结构域和相似的蛋白质结构,其脱氢酶结构域明显折叠成催化域裂缝结构,且C末端氨基酸极度保守。由RNA-Seq数据的基因表达谱可知,NOX基因家族成员在不同木薯叶片、中静脉、叶柄、茎、侧芽、茎尖分生组织、根尖分生组织、易碎胚性愈伤组织、胚性愈伤组织(OES)和贮藏根中均有表达,但呈不同的表达模式,其中,Manes.14G042600和Manes.S089900在储藏根中高表达,Manes.06G128700和Manes.09G172500在须根和根尖分生组织中高表达。在木薯品种KU50和新选048的叶片中,Manes.14G042600基因在干旱胁迫下呈上调表达,推测NOX基因在特定组织及响应非生物胁迫过程中扮演重要角色。【结论】木薯NOX基因家族成员具有保守基因结构,其编码蛋白具有保守的功能域,尤其是C端氨基酸序列;NOX基因表达具有组织特异性,部分成员的表达受非生物胁迫的影响。FRO蛋白和NOX蛋白具有较明显的共进化关系。 展开更多

关键词 木薯 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nox) 基因家族成员 生物信息学 干旱胁迫

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丙泊酚后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用及其机制 被引量：3

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作者 祝君 周楠 李德明 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期46-54,共9页

目的:探讨丙泊酚后处理对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善作用及其对脑线粒体损伤的保护作用,阐明其作用机制。方法:24只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丙泊酚后处理组,每组8只。模型组和丙泊酚后处理组大鼠采用结扎颈动脉法建... 目的:探讨丙泊酚后处理对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善作用及其对脑线粒体损伤的保护作用,阐明其作用机制。方法:24只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丙泊酚后处理组,每组8只。模型组和丙泊酚后处理组大鼠采用结扎颈动脉法建立大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注模型,丙泊酚后处理组大鼠于再灌注即刻股静脉输注20 mg·kg-1·h-1丙泊酚2 h,假手术组和模型组大鼠给予等量生理盐水。各组大鼠于再灌注24 h后进行神经功能缺损评分,采用HE染色法观察各组大鼠海马组织病理形态表现,采用相关试剂盒检测各组大鼠海马组织中氧化应激相关因子活性和水平,采用活性氧(ROS)荧光探针检测各组大鼠脑海马组织中ROS水平,采用TUNEL法检测各组大鼠海马组织中TUNEL阳性细胞率,采用Western blotting法检测各组大鼠海马组织中线粒体裂变、融合和生物发生相关蛋白及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯氧化酶4(Nox4)和核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平,免疫荧光法检测各组大鼠海马组织中Nrf2蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),大鼠海马组织病理损伤明显,海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化力(T-AOC)水平明显降低(P<0.01),丙二醛(MDA)和ROS水平及TUNEL阳性细胞率明显升高(P<0.05),动力相关蛋白1(DRP1)、裂变蛋白1(Fis1)、Nox4和Nrf2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),视神经萎缩症蛋白1(OPA1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)和线粒体转录因子A(TFAM)蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,丙泊酚后处理组大鼠神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),大鼠海马组织病理损伤明显改善,大鼠海马组织中SOD及GSH-Px活性和T-AOC水平明显升高(P<0.05),MDA水平、ROS水平和TUNEL阳性细胞率明显降低(P<0.05),DRP1、Fis1和Nox4蛋白表达水平明显降低(P<0.05),OPA1、Mfn2、PGC-1α、TFAM和Nrf2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:丙泊酚后处理可抑制脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织细胞凋亡和氧化应激,促进线粒体融合和生物发生并抑制线粒体裂变,改善大鼠神经功能损伤,其机制可能与调控Nox4/Nrf2信号通路有关。 展开更多

关键词 丙泊酚后处理 脑缺血再灌注损伤 氧化应激 线粒体损伤 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯氧化酶4 核因子E2相关因子2

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福建省蛇源裂头蚴的分子鉴定及遗传分析 被引量：1

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作者 宋肇程 陈育琪 +4 位作者 黄潇航 魏坤亚 张龙 殷光文 黄志坚 《动物医学进展》 北大核心 2021年第1期37-45,共9页

裂头蚴病是由于裂头蚴感染引起的一种人兽共患病,为了对福建省养殖蛇类的裂头蚴感染情况进行调查并鉴定虫种,对采自福建省三明市、漳州市和南平市等地蛇场的蛇类进行剖检,分离得到了裂头蚴,记录寄生部位和数量。提取裂头蚴虫体基因组,采... 裂头蚴病是由于裂头蚴感染引起的一种人兽共患病,为了对福建省养殖蛇类的裂头蚴感染情况进行调查并鉴定虫种,对采自福建省三明市、漳州市和南平市等地蛇场的蛇类进行剖检,分离得到了裂头蚴,记录寄生部位和数量。提取裂头蚴虫体基因组,采用PCR对虫体ITS、NAD4和COX3基因进行了扩增。同时,将扩增得到的目的基因连接到pEASY-Blunt Simple载体上,转化Trans I-T1感受态细胞,培养得到单菌落,对菌落进行扩增测序。将测序结果与NCBI公布的裂头蚴ITS、NAD4和COX3基因序列进行比对分析,测定突变率和位点,并且进行样本之间的同源性分析和测定遗传距离。结果发现,三明市、漳州市和南平市某蛇场裂头蚴的感染率分别为75%、20%和0。分离到的裂头蚴ITS基因序列长为1360 bp~1380 bp,与NCBI中Spirometra erinaceieuropaei(FJ886747.1)的ITS基因同源性为95.70%~98.68%,样本之间平均遗传距离为0.0016;分离到的裂头蚴NAD4基因序列长为356 bp~650 bp,与NCBI中Spirometra erinaceieuropaei(HM475076.1)的NAD4基因同源性为96.73%~100%,样本之间平均遗传距离为0.0041;分离到的裂头蚴COX3基因序列总长为379 bp~408 bp,与NCBI中Spirometra erinaceieuropaei(HM475033.1)的COX3基因同源性为98.94%~100%,样本之间平均遗传距离为0.0038。结果表明,此次分离得到的裂头蚴虫体的ITS基因、NAD4基因和COX3基因与欧猥迭宫绦虫裂头蚴同源性较近,证明此次分离的蛇源裂头蚴属于欧猥迭宫绦虫裂头蚴。同时,经过对各虫体间NAD4和COX3基因分析发现,不同地区的裂头蚴虫体在进化树上存在分支。 展开更多

关键词 蛇源裂头蚴 内部转录间隔区 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位4 线粒体细胞色素C氧化酶第Ⅲ亚基

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