葡萄糖、胰岛素和尿酸对猪近端肾小管上皮细胞株血红素氧合酶-1的影响

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作者 孙珲 李晓苗 +3 位作者 宋白利 刘新平 药立波 姬秋和 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期566-568,589,共4页

目的观察不同浓度葡萄糖、胰岛素和尿酸的培养条件下猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)血红素氧合酶(HO-1)活性的改变,以探讨代谢相关因素在细胞水平对肾小管上皮细胞的影响。方法以LLC-PK1为研究对象,观察葡萄糖浓度为5、10、22、33 mmo... 目的观察不同浓度葡萄糖、胰岛素和尿酸的培养条件下猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)血红素氧合酶(HO-1)活性的改变,以探讨代谢相关因素在细胞水平对肾小管上皮细胞的影响。方法以LLC-PK1为研究对象,观察葡萄糖浓度为5、10、22、33 mmol/L,胰岛素浓度为0、10-9、10-8、10-7mol/L,尿酸浓度为0、0.1、0.2、0.4 mmol/L培养48 h条件下,LLC-PK1细胞HO-1活性的改变。结果0.1 mmol/L0、.2 mmol/L和0.4 mmol/L尿酸刺激48 h后,LLC-PK1的HO-1活性增加,并呈剂量依赖关系,而上述浓度的葡萄糖和胰岛素刺激48 h对LLC-PK1的HO-1活性无影响。结论一定浓度的尿酸可使LLC-PK1的HO-1活性升高,提示尿酸在细胞水平对肾小管上皮细胞的氧化应激过程产生影响。 展开更多

关键词 尿酸 葡萄糖 胰岛素 血红素氧合酶 猪近端肾小管上皮细胞株

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庆大霉素致大鼠肾近端小管上皮细胞凋亡的超微结构研究 被引量：7

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作者 刘冬娟 赖亚新 +1 位作者 徐彦平 李艳杰 《中国药物警戒》 2009年第12期709-712,共4页

目的探讨庆大霉素对实验性大鼠肾近端小管上皮细胞凋亡的影响。方法通过给大鼠腹腔注射庆大霉素100mg/Kg/d,分别在连续用药第5天、8天、10天等不同天数处死大鼠,取肾脏制备超薄切片,在透射电镜下观察肾近端小管上皮细胞凋亡的情况。结... 目的探讨庆大霉素对实验性大鼠肾近端小管上皮细胞凋亡的影响。方法通过给大鼠腹腔注射庆大霉素100mg/Kg/d,分别在连续用药第5天、8天、10天等不同天数处死大鼠,取肾脏制备超薄切片,在透射电镜下观察肾近端小管上皮细胞凋亡的情况。结果大鼠连续注射庆大霉素5天、8天、10天后肾近端小管上皮细胞均有凋亡的发生,注射庆大霉素10天的大鼠肾小管上皮细胞出现较多坏死。结论庆大霉素肾毒性作用部分是通过肾近端小管上皮细胞凋亡而实现的,细胞凋亡的发生与庆大霉素肾毒性作用强弱有关。 展开更多

关键词 大鼠 庆大霉素肾毒性 肾近端小管上皮细胞 细胞凋亡 超微结构

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下调miR-153促进高糖诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化 被引量：4

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作者 王筱霞 姜珍珍 +6 位作者 汪年松 陈玉强 李军辉 范瑛 刘玉梅 鲍宏达 程东生 《中国中西医结合肾病杂志》 2013年第10期850-854,I0001,共6页

目的:探讨miR-153调控高糖诱导肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的机制,为研究糖尿病肾病(DN)间质纤维化机制提供新思路。方法:采用生物信息学方法预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与S... 目的:探讨miR-153调控高糖诱导肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的机制,为研究糖尿病肾病(DN)间质纤维化机制提供新思路。方法:采用生物信息学方法预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与Snail做pearson相关性分析,筛选出与Snail负相关最显著的miRNA;以高糖诱导的HK2细胞为载体,转染该miRNA mimics 72 h后,采用real-time PCR、western blot方法,观察该miRNAs、Snail以及E-cadherin的表达改变。结果:调控Snail的候选miRNAs共7个,分别是:miR-153、miR-30e、miR-30d、miR-30b、miR-384-5p、miR-30a、miR-30c;与db/m相比,miR-153、miR-30d及miR-30e在db/db小鼠肾皮质中表达显著下调(P<0.05),其中miR-153与Snail表达水平负相关最显著(r=-0.501 56);高糖诱导HK2细胞下调miR-153,肾小管上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达减少;过表达miR-153抑制HK2细胞表达Snail,而E-cadherin水平增加。结论:MiR-153可能通过靶基因Snail参与调控高糖诱导的HK2细胞EMT。 展开更多

关键词 近端肾小管上皮细胞(HK2) 上皮细胞-间充质转化(EMT) miR-153 SNAIL 生物信息学

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去甲斑蝥素对白蛋白刺激肾小管上皮细胞增殖及上调纤维连接蛋白表达的影响 被引量：4

4

作者 叶琨 刘伏友 +3 位作者 李瑛 彭佑铭 段绍斌 刘虹 《中国血液净化》 2008年第6期325-328,共4页

目的观察去甲斑蝥素(NCTD)对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及上调FN表达的影响,初步探讨NCTD延缓肾间质纤维化的体外作用机制。方法通过细胞毒性实验筛选出对HK-2细胞无明显损伤的NCTD适合浓度。将HK-2细胞随机分为5组:... 目的观察去甲斑蝥素(NCTD)对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及上调FN表达的影响,初步探讨NCTD延缓肾间质纤维化的体外作用机制。方法通过细胞毒性实验筛选出对HK-2细胞无明显损伤的NCTD适合浓度。将HK-2细胞随机分为5组:对照组(1640培基组),白蛋白组(1640+白蛋白5g/L),各浓度NCTD组(1640+白蛋白5g/L+NCTD 0.5,1,2.5mg/L)。在各组HK-2细胞中加入相应干预液孵育24h后,采用细胞增殖法(MTT法)检测NCTD对白蛋白刺激HK-2细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组细胞上清中FN的蛋白含量;RT-PCR法半定量分析HK-2细胞中FN mRNA的表达。结果①比较对照组及NCTD(0.5,1.0,2.5 mg/L)各组的乳酸脱氢酶(LDH)浓度,各组间的差异无统计学意义(P>0.05);②白蛋白组MTT值(0.438±0.073)明显高于对照组(0.330±0.060)(P<0.05),而NCTD(2.5 mg/L)组MTT值(0.327±0.080)较白蛋白组降低(P<0.05);③与白蛋白组比较,NCTD(2.5mg/L)组HK-2细胞上清中FN蛋白含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);NCTD(1mg/L和2.5mg/L)组细胞上清中FN mRNA的表达较白蛋白组明显下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白蛋白(5g/L)诱导HK-2细胞增殖及FN过表达,一定浓度去甲斑蝥素可抑制白蛋白对HK-2细胞的活化作用。 展开更多

关键词 斑蝥素 人近端肾小管上皮细胞 MTT法 纤维连接蛋白

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miR-30b/Snail调控糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT 被引量：7

5

作者 王彦哲 王筱霞 汪年松 《中国中西医结合肾病杂志》 2017年第4期288-291,I0001,I0002,共6页

目的:探讨miR-30b/Snail调控高糖诱导人源肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的可能机制,为糖尿病肾病(DN)间质纤维化的防治提供新的实验依据及思路。方法:通过生物信息学预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选m... 目的:探讨miR-30b/Snail调控高糖诱导人源肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的可能机制,为糖尿病肾病(DN)间质纤维化的防治提供新的实验依据及思路。方法:通过生物信息学预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与Snail做pearson相关性分析,筛选出与Snail负相关最显著的miRNA;以高糖诱导的HK2细胞为载体,转染该miRNA mimics 72 h后,采用real-time PCR、western blot方法,观察该miRNA、Snail以及EMT相关蛋白的表达改变。结果:调控Snail的候选miRNAs共6个,分别是miR-30b-5p、miR-25-3p、miR-199a-5p、miR-128-3p、miR-22-3p、miR-27-3p,其中miR-30b与Snail存在明显负相关,r2=0.775 49;高糖诱导HK2细胞miR-30b表达下调,肾小管上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达减少;过表达miR-30b-5p可抑制HK2细胞Snail表达,同时上调E-cadherin表达,而Vimentin、α-SMA表达下调。结论:miR-30b/Snail参与调控高糖引起的肾小管上皮细胞EMT。 展开更多

关键词 近端肾小管上皮细胞 上皮细胞-间充质转化(EMT) miR-30b SNAIL 生物信息学

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衔接蛋白p66Shc在高糖诱导的肾小管上皮细胞线粒体活性氧簇产生中的作用 被引量：4

6

作者 聂静 孙林 +3 位作者 刘伏友 刘映红 孙岩 邹莎琳 《中国中西医结合肾病杂志》 2009年第9期757-760,I0001,共5页

目的:观察高糖环境下人近端肾小管上皮细胞HK-2中p66Shc的表达和磷酸化,以及p66Shc瞬时高表达对高糖诱导的HK-2线粒体活性氧簇产生的影响,为探讨糖尿病肾病线粒体ROS产生的机制提供新的思路。方法:常规培养正常人近端肾小管上皮细胞(HK-... 目的:观察高糖环境下人近端肾小管上皮细胞HK-2中p66Shc的表达和磷酸化,以及p66Shc瞬时高表达对高糖诱导的HK-2线粒体活性氧簇产生的影响,为探讨糖尿病肾病线粒体ROS产生的机制提供新的思路。方法:常规培养正常人近端肾小管上皮细胞(HK-2),将30mmol/LD-葡萄糖在不同时间点作用于体外培养的HK-2细胞,采用Real-time-PCR检测p66ShcmRNA的表达变化,Westem blot检测p66Shc蛋白、磷酸化p66Shc-Ser36蛋白的表达;进一步将pcDNA3.1hisp66Shc质粒转染HK-2细胞,采用激光共聚焦显微镜观察p66Shc高表达对高糖诱导的线粒体活性氧簇产生的影响。结果:30mmol/LD-葡萄糖能呈时间依赖性上调p66Shc mRNA和蛋白表达水平,同时增强p66Shc第36位丝氨酸的磷酸化;在30mmol/LD-葡萄糖作用下,转染p66Shc的HK-2线粒体ROS水平明显高于未转染组及空载体转染组(P<0.05)。结论:p66Shc参与了高糖诱导的线粒体活性氧簇的产生,可能在糖尿病肾病早期肾小管氧化损伤过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 葡萄糖 近端肾小管上皮细胞 活性氧簇

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构建促红细胞生成素表达载体及其在肾小管上皮细胞中的表达 被引量：1

7

作者 朱蓓 赵卫红 吴剑卿 《中国血液净化》 2009年第4期211-214,共4页

目的构建促红细胞生成素(EPO)表达质粒,并在人近端肾小管上皮细胞中稳定表达。方法应用标准分子克隆技术构建EPO真核表达载体pcDNA3.1(-)-hEPO。磷酸钙法转染人肾小管近端上皮细胞(HK-2)。酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液上清中的EPO... 目的构建促红细胞生成素(EPO)表达质粒,并在人近端肾小管上皮细胞中稳定表达。方法应用标准分子克隆技术构建EPO真核表达载体pcDNA3.1(-)-hEPO。磷酸钙法转染人肾小管近端上皮细胞(HK-2)。酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液上清中的EPO含量。MTT法绘制各组细胞生长曲线。结果构建获得EPO基因的表达质粒,并成功转染肾小管上皮细胞,后者经G418筛选,稳定表达EPO。转染后第21天,其表达量为同期转染的293细胞的(35.0±5.3)%。转染后HK-2细胞生长曲线未见明显改变。结论人近端肾小管上皮细胞可以稳定表达EPO,这为EPO基因治疗选择新靶点奠定了基础。 展开更多

关键词 促红细胞生成素 近端肾小管上皮细胞 基因转染 基因表达

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温阳消癥方调控LncRNA MEG3对TGF-β_(1)诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子的影响

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作者 林晓蒙 余柯娜 +1 位作者 伍云洲 蔡旭东 《中国中西医结合肾病杂志》 2023年第2期108-111,共4页

目的:探讨温阳消癥方对TGF-β_(1)诱导的人近端肾小管上皮细胞LncRNA MEG3的调控作用及对纤维化因子的影响。方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为对照组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组、TGF-β_(1)+14 mg/m... 目的:探讨温阳消癥方对TGF-β_(1)诱导的人近端肾小管上皮细胞LncRNA MEG3的调控作用及对纤维化因子的影响。方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为对照组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组、TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组,MTT法检测细胞增殖,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)表达,蛋白质印迹法检测α-SMA、FN、CTGF蛋白表达。结果:3.5、7、14 mg/ml温阳消癥不影响细胞增殖,35 mg/ml组细胞增殖明显降低(P<0.01);与对照组比较,TGF-β_(1)组中α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3及FN、CTGF蛋白表达显著升高(P<0.01),α-SMA蛋白表达升高(P<0.05);与TGF-β_(1)组比较,两个温阳消癥方治疗组α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3、FN蛋白表达,及TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF蛋白表达均显著降低(P<0.01),TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF蛋白表达降低(P<0.05);与TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组相比,TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF mRNA及CTGF蛋白表达均显著降低(P<0.01),FN mRNA及LncRNA MEG3表达降低(P<0.05)。结论:温阳消癥方可下调LncRNA MEG3的表达,抑制TGF-β_(1)诱导的HK-2细胞纤维化,其抑制纤维化的作用可能和调控LncRNA MEG3的表达有关。 展开更多

关键词 温阳消癥方 长链非编码RNA母系表达基因3 人近端肾小管上皮细胞 转化生长因子-β_(1) 肾纤维化

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一种基于RNA-seq验证的人肾癌细胞和正常细胞原代培养方法 被引量：1

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作者 周晓光 王浩舟 +1 位作者 李彦生 宋黎明 《中国医药导报》 CAS 2020年第26期4-7,25,F0003,共6页

目的建立更加快速便捷的肾脏肿瘤及正常肾小管上皮细胞原代培养方法。方法选取2019年1—3月首都医科大学附属北京朝阳医院行肾癌根治性切除术和肾部分切除术后患者新鲜的肾透明细胞癌组织和肾脏皮质组织。采用机械分解,胶原酶消化和细... 目的建立更加快速便捷的肾脏肿瘤及正常肾小管上皮细胞原代培养方法。方法选取2019年1—3月首都医科大学附属北京朝阳医院行肾癌根治性切除术和肾部分切除术后患者新鲜的肾透明细胞癌组织和肾脏皮质组织。采用机械分解,胶原酶消化和细胞连续筛分提纯的方法提纯肿瘤和正常原代细胞。分别通过转录组测序(RNA-seq)技术鉴定两种原代细胞的遗传背景,免疫细胞化学鉴定细胞标志物的表达,透射电镜观察原代细胞的超微结构。最后采用裸鼠荷瘤模型鉴定肿瘤细胞的成瘤特性。结果共计分离纯化3株人近端肾小管上皮原代细胞,8株肾透明细胞癌原代细胞。RNA-seq显示测序结果符合两类细胞的遗传学背景,免疫细胞化学可鉴定出近端肾小管上皮细胞标志蛋白的表达。透射电镜可观察到两类细胞特异性超微结构。裸鼠荷瘤模型证实了肾癌原代细胞的成瘤特性。结论成功建立并确定一种快速便捷的肾癌细胞和肾小管上皮细胞原代培养的流程和方法。 展开更多

关键词 原代细胞培养 肾细胞癌 近端肾小管上皮细胞 转录组测序

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基于NF-κB经典信号通路研究黄芩素对高糖诱导HK-2细胞损伤的保护作用 被引量：2

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作者 邓茜 孙惠力 +1 位作者 曾又佳 宋高峰 《江西中医药》 CAS 2024年第1期71-73,77,共4页

目的:从NF-κB经典信号通路探讨黄芩素对高糖诱导近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用及机制。方法:5.5 mmol/L浓度的葡萄糖设为正常糖对照组,45 mmol/L浓度的葡萄糖设为高糖组,NF-κB特异抑制剂PDTC(100μmol/L)作为阳性对照组,观... 目的:从NF-κB经典信号通路探讨黄芩素对高糖诱导近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用及机制。方法:5.5 mmol/L浓度的葡萄糖设为正常糖对照组,45 mmol/L浓度的葡萄糖设为高糖组,NF-κB特异抑制剂PDTC(100μmol/L)作为阳性对照组,观察不同剂量黄芩素(25~100μmol/L)对高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活及其下游炎症因子的影响。Western blot法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IκBα、p65、p-p65、IKKα)及其下游炎症分子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达。结果:与正常糖对照组比较,高糖组能显著下调IκBa蛋白表达,上调p-p65/p65比值和IKKα、MCP-1、ICAM-1蛋白表达(P<0.01);与高糖组比较,黄芩素中、高剂量组呈剂量依赖性地显著抑制IκBα蛋白表达下调,p-p65/p65比值和IKKα、MCP-1、ICAM-1蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01);与高糖组比较,NF-κB特异抑制剂PDTC组能显著抑制IκBα蛋白表达下调,及p-p65/p65比值和MCP-1、ICAM-1蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩素可以通过抑制高糖诱导的HK-2细胞NF-κB信号通路关键蛋白(IKKα/IκBα/p65)的激活,下调其下游炎症分子MCP-1、ICAM-1表达,从而减轻肾脏细胞炎症。 展开更多

关键词 糖尿病肾脏病 黄芩素 近端肾小管上皮细胞 NF-κB经典信号通路

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益肾化瘀方含药血清对NRK52E转分化过程中TGF-β_1、BMP-7表达的影响 被引量：7

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作者 汪青 肖东 +2 位作者 吕雁 高志卿 张琳琪 《中国中西医结合肾病杂志》 2016年第1期18-21,共4页

目的:采用体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,观察益肾化瘀方含药血清对NRK52E转分化过程中TGF-β_1、BMP-7 mRNA表达的影响。方法:以TGF-β_1诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,采用血清药理学方法和R... 目的:采用体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,观察益肾化瘀方含药血清对NRK52E转分化过程中TGF-β_1、BMP-7 mRNA表达的影响。方法:以TGF-β_1诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,采用血清药理学方法和RT-PCR法,观察空白对照组、TGF-β_1刺激组、益肾化瘀方含药血清高、中、低剂量组、缬沙坦含药血清组6组细胞形态的变化,以及TGF-β_1mRNA、BMP-7mRNA的表达。结果:NRK52E细胞经TGF-β_1刺激48 h后,失去原有典型的铺路石样形态,拉长增大呈梭形,细胞间隙也增宽。而与益肾化瘀方含药血清共同作用后,细胞形态有所修复,梭形改变减轻,并随着含药血清浓度的增加在一定程度上渐趋向于正常形态。而同时加入不同浓度的益肾化瘀方含药血清与TGF-β_1共刺激48 h后,呈现剂量依赖方式上调BMP-7mRNA表达,而TGF-β_1mRNA的表达则有所下降,并表现出与缬沙坦对BMP-7和TGF-β_1相互调控的高度一致性。结论:益肾化瘀方含药血清通过在基因水平抑制TGF-β_1mRNA表达,并以剂量依赖方式上调BMP-7mRNA表达,而显示出对NRK52E细胞转分化过程的阻抑作用。 展开更多

关键词 大鼠 近端肾小管上皮细胞 益肾化瘀方 含药血清 TGF-β_1 BMP-7

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蛋白质

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《国外科技资料目录（医药卫生）》 CAS 2002年第7期16-18,共3页

0224066 高半胱氨酸:硫的火焰/Hajjar KA∥J Clin Invest.-2001,107(6).-663～664 医科图0224067 C 反应蛋白在人呼吸道中的表达/Gould J M∥Infect Immun.-2001,69(3).-1747～1754 医科图0224068 兔小肠 M 细胞上的多糖-蛋白质复合物(... 0224066 高半胱氨酸:硫的火焰/Hajjar KA∥J Clin Invest.-2001,107(6).-663～664 医科图0224067 C 反应蛋白在人呼吸道中的表达/Gould J M∥Infect Immun.-2001,69(3).-1747～1754 医科图0224068 兔小肠 M 细胞上的多糖-蛋白质复合物(细胞被膜)可展示 Muc 展开更多

关键词 医科 蛋白质复合物 受体相关蛋白 反应蛋白 表达 受体介导 细胞被膜 转录因子 近端肾小管上皮细胞 结合蛋白

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人体组织生理学(机能组织学)

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《国外科技资料目录（医药卫生）》 1999年第5期6-6,共1页

9915527 NF-κB、JAK2在培养的肾小球系膜细胞产生NO的贡献[日]/中岛修∥日肾会志.-1998,40(3).-177冀医情 9915528

关键词 肾小球系膜细胞 近端肾小管上皮细胞 组织生理学 组织学 肾小球上皮细胞 培养的 静态 贡献 伸展 人体

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排泄生理

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《国外科技资料目录（医药卫生）》 2001年第2期16-16,共1页

0103929 松弛素对清醒大鼠肾血管舒张有效/Danielson L A∥J Clin Invest.-1999,103(4).-525～533 医科情 0103930 血管紧张素Ⅳ对近端肾小管上皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1表达的影响/Gesualdo L∥Kidney Int.-1999,56(2).-461～470

关键词 纤溶酶原激活物抑制剂 近端肾小管上皮细胞 血管紧张素 清醒大鼠 血管舒张 松弛素 医科 表达 成纤维细胞生长因子 排泄

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