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拟穴青蟹chh基因近端启动子的功能分析
被引量：
1
1
作者
黄丹萍
张子平
+3 位作者
贾锡伟
邹志华
涂传灯
王艺磊
《应用海洋学学报》
CSCD
北大核心
2017年第1期87-95,共9页
甲壳动物高血糖激素家族在调控甲壳动物的变态发育、生殖、蜕皮、血糖平衡及体内的渗透压平衡等方面起着重要的作用,甲壳动物高糖激素(CHH)是甲壳动物高血糖激素家族中的重要成员.通过Tail-PCR方法克隆获得拟穴青蟹(Scylla paramamosain...
甲壳动物高血糖激素家族在调控甲壳动物的变态发育、生殖、蜕皮、血糖平衡及体内的渗透压平衡等方面起着重要的作用,甲壳动物高糖激素(CHH)是甲壳动物高血糖激素家族中的重要成员.通过Tail-PCR方法克隆获得拟穴青蟹(Scylla paramamosain)chh基因的近端启动子区序列,从翻译起始位点(ATG)起,共657 bp.生物信息学分析结果显示,转录起始位点位于翻译起始位点(ATG)上游第74个碱基(A),在转录起始位点(A)上游31 bp处存在TATA box;核心启动子区位于-41^+9 bp之间,包含在线软件预测的转录起始位点;潜在的转录因子结合位点包括Oct-1、C/EBPalp、GATA-1、Sp1、Ap-1、NF-κappa B、NF-1、RAP1、HNF-3等;目前获得的chh基因启动子区中没有Cp G岛.成功构建了chh基因4个启动子不同长度片段C1—C4,分别位于-583^+205、-388^+205、-286^+205、-46^+205 bp.含启动子不同长度片段的表达载体瞬时转染HEK293T细胞和Sf9细胞后的活性分析表明,在-286^-46、-583^-388 bp区域可能存在负调控基因表达的转录因子结合位点,在-388^-286 bp区域可能存在正调控基因表达的转录因子结合位点.
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关键词
海洋生物学
拟穴青蟹
chh基因
近端启动子
瞬时转染
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职称材料
人β1整合素近端和远端启动子报告基因载体的构建和鉴定及启动活性分析
被引量：
9
2
作者
陈卫
苏踊跃
+3 位作者
梁光萍
陈建
张曼辉
罗向东
《医学研究生学报》
CAS
2007年第2期135-137,141,共4页
目的:克隆整合素β1近端启动子和远端启动子基因序列,构建并鉴定整合素β1启动子调控的荧光素酶报告基因载体pGL3-261和pGL3-1442。方法:以本室构建的含整合素β1全长启动子基因序列(1756 bp)的重组载体pGL3-β1为模板,用含有酶切位点...
目的:克隆整合素β1近端启动子和远端启动子基因序列,构建并鉴定整合素β1启动子调控的荧光素酶报告基因载体pGL3-261和pGL3-1442。方法:以本室构建的含整合素β1全长启动子基因序列(1756 bp)的重组载体pGL3-β1为模板,用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1近端和远端启动子基因序列,克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic,构建含正确目的基因的表达载体pGL3-261和pGL3-1442,经NheⅠ、XhoⅠ酶切、聚合酶链式反应(PCR)扩增及测序鉴定;并用pGL3-261和pGL3-1442质粒与pGL3-β1质粒同时转染人表皮细胞株HaCaT进行活性分析。结果:酶切及序列测定表明,克隆获得的近端启动子261bp和远端启动子1442bp与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,且插入方向正确;此三种质粒都有明显的启动子活性,远端启动子活性与全长启动子活性无显著差异,但明显高于近端启动子活性。结论:成功构建了整合素β1近端和远端启动子基因序列荧光素酶报告基因载体,整合素β1远端启动子在HaCaT细胞中起主要作用。为下一步研究人整合素β1启动子核心区、基因表达调控机制及其信号转导通路等奠定基础。
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关键词
整合素Β1
远
端
启动子
近端启动子
载体
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职称材料
题名
拟穴青蟹chh基因近端启动子的功能分析
被引量：
1
1
作者
黄丹萍
张子平
贾锡伟
邹志华
涂传灯
王艺磊
机构
集美大学水产学院农业部东海海水健康养殖重点实验室
福建农林大学动物科学学院
出处
《应用海洋学学报》
CSCD
北大核心
2017年第1期87-95,共9页
基金
国家自然科学基金资助项目(41176152)
集美大学创新团队基金资助项目(2010A001)
文摘
甲壳动物高血糖激素家族在调控甲壳动物的变态发育、生殖、蜕皮、血糖平衡及体内的渗透压平衡等方面起着重要的作用,甲壳动物高糖激素(CHH)是甲壳动物高血糖激素家族中的重要成员.通过Tail-PCR方法克隆获得拟穴青蟹(Scylla paramamosain)chh基因的近端启动子区序列,从翻译起始位点(ATG)起,共657 bp.生物信息学分析结果显示,转录起始位点位于翻译起始位点(ATG)上游第74个碱基(A),在转录起始位点(A)上游31 bp处存在TATA box;核心启动子区位于-41^+9 bp之间,包含在线软件预测的转录起始位点;潜在的转录因子结合位点包括Oct-1、C/EBPalp、GATA-1、Sp1、Ap-1、NF-κappa B、NF-1、RAP1、HNF-3等;目前获得的chh基因启动子区中没有Cp G岛.成功构建了chh基因4个启动子不同长度片段C1—C4,分别位于-583^+205、-388^+205、-286^+205、-46^+205 bp.含启动子不同长度片段的表达载体瞬时转染HEK293T细胞和Sf9细胞后的活性分析表明,在-286^-46、-583^-388 bp区域可能存在负调控基因表达的转录因子结合位点,在-388^-286 bp区域可能存在正调控基因表达的转录因子结合位点.
关键词
海洋生物学
拟穴青蟹
chh基因
近端启动子
瞬时转染
Keywords
marine biology
Scylla paramamosain
chh gene
proximal promoter
transient transfection
分类号
P735 [天文地球—海洋生物学]
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职称材料
题名
人β1整合素近端和远端启动子报告基因载体的构建和鉴定及启动活性分析
被引量：
9
2
作者
陈卫
苏踊跃
梁光萍
陈建
张曼辉
罗向东
机构
第三军医大学西南医院烧伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室
解放军第二六三医院超声科
出处
《医学研究生学报》
CAS
2007年第2期135-137,141,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(批准号:10332060)
国家重点基础研究发展规划资助项目(批准号:2005CB522601)
文摘
目的:克隆整合素β1近端启动子和远端启动子基因序列,构建并鉴定整合素β1启动子调控的荧光素酶报告基因载体pGL3-261和pGL3-1442。方法:以本室构建的含整合素β1全长启动子基因序列(1756 bp)的重组载体pGL3-β1为模板,用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1近端和远端启动子基因序列,克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic,构建含正确目的基因的表达载体pGL3-261和pGL3-1442,经NheⅠ、XhoⅠ酶切、聚合酶链式反应(PCR)扩增及测序鉴定;并用pGL3-261和pGL3-1442质粒与pGL3-β1质粒同时转染人表皮细胞株HaCaT进行活性分析。结果:酶切及序列测定表明,克隆获得的近端启动子261bp和远端启动子1442bp与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,且插入方向正确;此三种质粒都有明显的启动子活性,远端启动子活性与全长启动子活性无显著差异,但明显高于近端启动子活性。结论:成功构建了整合素β1近端和远端启动子基因序列荧光素酶报告基因载体,整合素β1远端启动子在HaCaT细胞中起主要作用。为下一步研究人整合素β1启动子核心区、基因表达调控机制及其信号转导通路等奠定基础。
关键词
整合素Β1
远
端
启动子
近端启动子
载体
Keywords
Integrin β1
Proximal promoter
Distal promoter
Vector
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
拟穴青蟹chh基因近端启动子的功能分析
黄丹萍
张子平
贾锡伟
邹志华
涂传灯
王艺磊
《应用海洋学学报》
CSCD
北大核心
2017
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人β1整合素近端和远端启动子报告基因载体的构建和鉴定及启动活性分析
陈卫
苏踊跃
梁光萍
陈建
张曼辉
罗向东
《医学研究生学报》
CAS
2007
9
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职称材料
已选择
0
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