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拟南芥AtIDD4基因过表达植株构建及其对生长发育的影响
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作者 于德嘉 张国斌 +5 位作者 陈健鑫 徐晓东 李林倩 董萍萍 郭丽红 杨红玉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期2583-2590,共8页
【目的】构建拟南芥AtIDD4基因过量表达植物,以期探究拟南芥IDD基因家族中AtIDD4基因在调控植物生长发育与抗逆反应应答中的作用。【方法】提取拟南芥叶片总RNA反转成cDNA,利用特异性引物PCR法扩增出CDS片段。将目的片段与花椰菜花叶病... 【目的】构建拟南芥AtIDD4基因过量表达植物,以期探究拟南芥IDD基因家族中AtIDD4基因在调控植物生长发育与抗逆反应应答中的作用。【方法】提取拟南芥叶片总RNA反转成cDNA,利用特异性引物PCR法扩增出CDS片段。将目的片段与花椰菜花叶病毒的35S启动子连接得到重组质粒,将质粒转化到农杆菌中,构建35S-AtIDD4CDS农杆菌表达载体,利用花序浸染方法将其导入拟南芥野生型植株(WT)中。将收取的T0代种子播种于含有潮霉素的MS培养基上进行抗性筛选直到获得T3代植株,得到AtIDD4基因的超表达植株AtIDD4-OE。【结果】半定量和定量RT-PCR结果表明,相较于拟南芥野生型植株,AtIDD4-OE植株中AtIDD4基因的表达量显著提高,约为野生型植株的2倍。表型观察结果表明,在MS培养基中垂直培养14 d的AtIDD4-OE幼苗根长和鲜重等指标显著低于WT幼苗。土壤中生长14 d的AtIDD4-OE植株与WT植株比较,生长状态弱,植株矮小,莲座叶面积较小。【结论】拟南芥AtIDD4基因的过量表达会抑制拟南芥植株的生长,其在拟南芥生长发育过程中以负调控因子发挥作用。 展开更多
关键词 拟南芥 AtIDD4 基因过表达植株构建 生长
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不结球白菜BcICE1基因的克隆与功能分析 被引量:4
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作者 任海波 刘同坤 +3 位作者 袁敬平 吴小婷 王惠玉 侯喜林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期802-810,共9页
[目的]本文旨在分析不结球白菜BcICE1基因的表达模式并探索其在冷胁迫中的功能。[方法]以不结球白菜品种‘NHCC001’为材料,采用同源克隆的方法获得BcICE1基因的全长序列,并进行生物信息学分析;对‘NHCC001’进行4℃低温和PEG-6000模拟... [目的]本文旨在分析不结球白菜BcICE1基因的表达模式并探索其在冷胁迫中的功能。[方法]以不结球白菜品种‘NHCC001’为材料,采用同源克隆的方法获得BcICE1基因的全长序列,并进行生物信息学分析;对‘NHCC001’进行4℃低温和PEG-6000模拟干旱处理,检测BcICE1基因对胁迫的响应;构建过表达载体pEarlyGate-BcICE1,利用注射法将载体农杆菌菌液导入烟草细胞进行BcICE1基因的瞬时表达并检测;构建酵母诱饵载体pGBKT7-BcICE1,转化AH109验证其转录激活活性;将pEarlyGate-BcICE1农杆菌菌液利用蘸花法进行BcICE1基因的遗传转化,并用RT-qPCR和Westernblot对阳性苗进行鉴定。通过RT-qPCR对BcICE1过表达拟南芥中冷胁迫相关基因的表达水平进行分析。[结果]克隆获得不结球白菜BcICE1基因,其含有1338bp的开放阅读框,编码466个氨基酸,相对分子质量为47.40×10^3,等电点为5.42;氨基酸的多序列比对和系统进化树结果表明,BcICE1蛋白与欧洲油菜、荠菜和拟南芥ICE1蛋白同源关系较近。亚细胞定位表明BcICE1蛋白定位在细胞核中,具有转录激活性且对冷胁迫与干旱胁迫有响应。BcICE1过表达株系能增强植株的抗寒性,同时在低温处理后BcICE1过表达植株中冷胁迫相关基因AtCBF3和COR15A的表达量显著高于野生型植株。[结论]克隆并获得BcICE1过表达拟南芥植株,功能分析表明BcICE1基因能增强植株抗寒性。 展开更多
关键词 不结球白菜 BcICE1基因 抗寒 亚细胞定位 过表达植株
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不结球白菜耐热相关基因BcNAC036的克隆、亚细胞定位及功能分析 被引量:3
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作者 刘路平 刘高峰 +1 位作者 蒋程 侯喜林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期647-655,共9页
[目的]本文旨在研究不结球白菜基因BcNAC 036的亚细胞定位及高温胁迫下的表达分析,并探索其功能及调控机制。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为试验材料,提取叶片总RNA并且反转录成cDNA,同源克隆BcNAC 036的全长基因序列,运用在线软件工... [目的]本文旨在研究不结球白菜基因BcNAC 036的亚细胞定位及高温胁迫下的表达分析,并探索其功能及调控机制。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为试验材料,提取叶片总RNA并且反转录成cDNA,同源克隆BcNAC 036的全长基因序列,运用在线软件工具对其进行生物信息学分析。采用同源重组的方法构建过表达载体pCAMBIA1302-BcNAC 036-GFP,农杆菌介导法将构建的过表达载体注射入本氏烟草叶片背面,通过激光共聚焦显微镜观察其亚细胞表达部位。采用RT-qPCR技术检测高温处理下不结球白菜耐高温品种‘苏州青’和热敏感品种‘矮脚黄’以及转基因拟南芥体内BcNAC 036基因的表达量。对转基因拟南芥进行高温处理并统计其成活率。[结果]同源克隆的方法获得BcNAC 036基因,其开放阅读框(ORF)为840 bp,编码279个氨基酸,相对分子质量为32154.83,等电点是8.96。氨基酸序列比对以及同源进化树分析结果显示,BcNAC036蛋白与芜菁、甘蓝型油菜NAC036蛋白同源关系较近。亚细胞定位结果显示,BcNAC036的亚细胞定位表达在细胞核。RT-qPCR表明,BcNAC 036在耐高温和热敏感品种中表达差异较大且表达量均呈明显下降趋势。转基因拟南芥与野生型相比,其成活率较低。[结论]BcNAC036蛋白在细胞核表达,BcNAC 036基因与不结球白菜耐高温性呈负相关。 展开更多
关键词 不结球白菜 BcNAC036基因 亚细胞定位 耐高温 过表达植株
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转录因子GGS1参与赤霉素和糖信号调控 被引量:2
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作者 邹明学 申宇欢 陈艳红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1147-1154,共8页
MYB类转录因子GGS1(glucose and GA signaling 1)既受到DELLA蛋白的调控,又与糖受体蛋白HXK1形成核内复合体.前人的这些研究结果暗示,GGS1可能同时参与了赤霉素和糖的信号调控.为了进一步证实GGS1基因在两信号途径中发挥的作用,我们对... MYB类转录因子GGS1(glucose and GA signaling 1)既受到DELLA蛋白的调控,又与糖受体蛋白HXK1形成核内复合体.前人的这些研究结果暗示,GGS1可能同时参与了赤霉素和糖的信号调控.为了进一步证实GGS1基因在两信号途径中发挥的作用,我们对以下两个方面进行了研究.首先对GGS1基因表达谱进行分析,结果表明,GGS1特异在拟南芥各器官的维管组织的韧皮部细胞中表达;用赤霉素和高浓度蔗糖处理能抑制GGS1基因的表达.GGS1同源基因虽和GGS1具有相似的表达谱,但是其表达却不受GA和糖处理的影响,暗示二者间不存在功能冗余.其次,我们获得GGS1过表达转基因植株并通过Q-PCR分析这一植株中GA和糖代谢途径中一些重要相关基因表达变化.结果表明,在GGS1过表达植株中参与GA合成的基因表达升高,GA分解代谢基因表达降低;与糖信号密切相关的光合作用相关基因表达升高.两方面研究结果证实了GGS1的双元功能,即既可以作为GA信号调控的负调控因子,又在糖的信号传递中发挥作用. 展开更多
关键词 GA信号调控通路 糖信号通路 GGS1基因 表达谱分析 过表达转基因植株
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