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PRDM5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染Neuro-2a细胞的建立: 1; 作者吴钊淳李友 +2 位作者何嘉文廖科棋李胜男《吉林大学学报(医学版)》北大核心 2025年第1期1-8,共8页; 目的:构建PR锌指区域蛋白(PRDM)5基因的过表达慢病毒载体,建立稳定转染的小鼠神经瘤母细胞Neuro-2a,为探讨PRDM5在缺血性脑卒中(IS)发病机制中的作用奠定基础。方方法法:在NCBI上搜索PRDM5的序列并设计引物,PCR法扩增获取PRDM5基因序列... 展开更多; 关键词 PR锌指区域蛋白过表达慢病毒载体稳定表达 Neuro-2a细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

胞质分裂作用因子4过表达慢病毒载体的构建和稳定转染Neuro-2a细胞的建立: 2; 作者李胜男何嘉文 +1 位作者廖科棋李友《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1322-1329,共8页; 目的:构建胞质分裂作用因子4(DOCK4)过表达慢病毒载体,建立DOCK4稳定过表达的Neuro-2a细胞。方法:在美国国家生物信息中心(NCBI)查找DOCK4的序列并设计合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增获取DOCK4基因序列,通过Bam HⅠ和AgeⅠ限... 展开更多; 关键词胞质分裂作用因子4 过表达慢病毒载体 Neuro-2a细胞稳定转染过表达慢病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

miR-186过表达慢病毒载体的构建及鉴定被引量：3: 3; 作者李胜男王梦旭 +3 位作者胡伟东陈少凤陈杏兰李友《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期997-1002,I0001,共7页; 目的:构建miR-186过表达慢病毒载体并包装慢病毒,探讨miR-186在人胚胎肾细胞(HEK)293T细胞系中的感染效率和表达水平。方法:以Hsa-miR-186前体序列为模板,设计并合成引物,PCR法扩增pre-miR-186基因序列,并将其克隆到携带EGFP/Puromycin... 展开更多; 关键词 miR-186 慢病毒 HEK293T细胞过表达慢病毒载体绿色荧光蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

TAZ诱导性过表达慢病毒载体的构建、鉴定及诱导过表达TAZ神经母细胞瘤细胞株的建立被引量：2: 4; 作者阮红峰应忠明罗环《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1035-1036,共2页; 神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见且致死性极高的实体肿瘤之一[1]。由NB所致死亡人数占所有儿童肿瘤死亡总数的15%[2]。分子靶向治疗是近年肿瘤领域研究的热点[3]。TAZ是一个包含WW-domain结构域的转录共激活子,参与多种肿... 展开更多; 关键词 TAZ基因神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 诱导过表达慢病毒载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

Vasohibin-2慢病毒过表达载体的构建及相关增殖功能研究被引量：1: 5; 作者孙杰涂敏 +2 位作者卫积书高文涛苗毅《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期732-737,共6页; 目的:构建Vasohibin-2(VASH2)慢病毒过表达载体,获得稳定表达的肝癌细胞株HepG2,并观察其对HepG2增殖的影响。方法:通过逆转录、PCR技术从细胞总RNA中获得VASH2目的基因,引入NheⅠ和PstⅠ酶切位点,连接到pTA2 vector中,经NheⅠ和PstⅠ... 展开更多; 关键词 Vasohibin-2 慢病毒过表达载体细胞增殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PRDM5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染Neuro-2a细胞的建立: 1; 作者吴钊淳李友何嘉文廖科棋李胜男; 机构广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东医科大学附属医院神经病学研究所; 出处《吉林大学学报(医学版)》北大核心 2025年第1期1-8,共8页; 基金国家自然科学基金项目(81571157) 广东省基础与应用基础研究基金委员会自然科学基金面上项目(2023A1515012750) +1 种基金广东医科大学百项青年研究项目资助计划项目(GDMUD2022010)。; 文摘目的:构建PR锌指区域蛋白(PRDM)5基因的过表达慢病毒载体,建立稳定转染的小鼠神经瘤母细胞Neuro-2a,为探讨PRDM5在缺血性脑卒中(IS)发病机制中的作用奠定基础。方方法法:在NCBI上搜索PRDM5的序列并设计引物,PCR法扩增获取PRDM5基因序列,将其与Bam HⅠ和AgeⅠ限制性内切酶双酶切后的慢病毒载体GV492进行连接,构建GV492-PRDM5过表达重组质粒,采用PCR法筛选并鉴定出的与目的基因片段长度相近的阳性克隆送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。将测序正确的GV492-control质粒和GV492-PRDM5过表达重组质粒分别转染至人胚胎肾细胞HEK293T中,转染48 h后离心收集慢病毒,分别为GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒,采用慢病毒滴度测定法检测上述2种慢病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为GV492-control组和GV492-PRDM5组,分别使用GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,感染72 h后使用嘌呤霉素(10 mg·L^(-1))对成功感染GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒的Neuro-2a细胞进行筛选,通过荧光显微镜观察GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞的生长状态及绿色荧光蛋白的表达情况。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组Neuro-2a细胞中PRDM5 mRNA表达水平;Western blotting法检测2组Neuro-2a细胞中PRDM5蛋白表达水平。结果:PCR法,GV492-PRDM5重组质粒阳性转化子的长度约为684 bp,GV492-PRDM5过表达重组质粒基因序列与设计合成的PRDM5过表达序列一致;GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒的滴度均为2.5×108 TU·mL^(-1)。荧光显微镜,GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞的生长状态均良好,且能观察到绿色荧光蛋白的表达。RT-qPCR法,与GV492-control组比较,GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞中PRDM5 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法,GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞在相对分子质量为75000附近出现特异性条带;与GV492-control组比较,GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞中PRDM5蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:成功构建PRDM5过表达慢病毒载体,建立了稳定转染的GV492-PRDM5-Neuro-2a细胞。; 关键词 PR锌指区域蛋白过表达慢病毒载体稳定表达 Neuro-2a细胞; Keywords PRDI-BF1 and RIZ domain proteins Over-expression lentivirus vector Stable expression Neuro-2a cells; 分类号 R543.5 [医药卫生—心血管疾病]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名胞质分裂作用因子4过表达慢病毒载体的构建和稳定转染Neuro-2a细胞的建立: 2; 作者李胜男何嘉文廖科棋李友; 机构广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东医科大学附属医院神经病学研究所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1322-1329,共8页; 基金国家自然科学基金资助项目(81571157) 广东省基础与应用基础研究基金委员会科研项目(2023A1515012750) +1 种基金广东医科大学科技处广东医科大学百项青年研究项目(GDMUD2022010)。; 文摘目的:构建胞质分裂作用因子4(DOCK4)过表达慢病毒载体,建立DOCK4稳定过表达的Neuro-2a细胞。方法:在美国国家生物信息中心(NCBI)查找DOCK4的序列并设计合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增获取DOCK4基因序列,通过Bam HⅠ和AgeⅠ限制性内切酶酶切后,将其与酶切后的慢病毒载体GV492进行连接,构建GV492-DOCK4过表达重组质粒,PCR法鉴定筛选出与目的基因片段长度大小相近的阳性克隆。将GV492-对照质粒和GV492-DOCK4过表达重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为GV492-对照组和GV492-DOCK4组,分别采用GV492-对照组慢病毒和GV492-DOCK4过表达慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,感染72 h后采用嘌呤霉素(10 mg·L^(-1))筛选出成功感染GV492-对照组慢病毒和GV492-DOCK4过表达慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞生长状态及绿色荧光蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中DOCK4 mRNA和DOCK4蛋白表达水平。结果:PCR检测,GV492-DOCK4过表达重组质粒的基因片段长度约为691 bp,测序结果显示GV492-DOCK4过表达重组质粒基因序列与设计合成的DOCK4过表达序列一致;GV492-对照组和GV492-DOCK4过表达组慢病毒的滴度分别为2.5×10^(8) TU·mL^(-1)和2.5×10^(8) TU·mL^(-1);荧光显微镜观察,各组Neuro-2a细胞生长状态良好且存在绿色荧光蛋白表达;RT-qPCR法检测,与GV492-对照组比较,GV492-DOCK4组Neuro-2a细胞中DOCK4 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);Western blotting法检测,各组细胞在相对分子质量225000附近出现特异性条带,与GV492-对照组比较,GV492-DOCK4组Neuro-2a细胞中DOCK4蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:本研究成功构建DOCK4过表达慢病毒载体,建立了稳定过表达DOCK4的Neuro-2a细胞。; 关键词胞质分裂作用因子4 过表达慢病毒载体 Neuro-2a细胞稳定转染过表达慢病毒; Keywords Dedicator of cytokinesis 4 Over-expression lentivirus vector Neuro-2a cell Stable transfection Over-expression lentivirus; 分类号 R743.3 [医药卫生—神经病学与精神病学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名miR-186过表达慢病毒载体的构建及鉴定被引量：3: 3; 作者李胜男王梦旭胡伟东陈少凤陈杏兰李友; 机构广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东医科大学附属医院神经病学研究所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期997-1002,I0001,共7页; 基金国家自然科学基金资助课题(81571157); 文摘目的:构建miR-186过表达慢病毒载体并包装慢病毒,探讨miR-186在人胚胎肾细胞(HEK)293T细胞系中的感染效率和表达水平。方法:以Hsa-miR-186前体序列为模板,设计并合成引物,PCR法扩增pre-miR-186基因序列,并将其克隆到携带EGFP/Puromycin的慢病毒载体FV040中,经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切及测序鉴定后获得重组慢病毒载体。利用Lipofectamine2000将重组慢病毒质粒FV040Vector和FV040miR-186分别与辅助质粒通过共转染至HEK293T细胞中,48h后收集慢病毒,以FV040Vector慢病毒作为对照组,FV040miR-186作为实验组,分别感染HEK293T细胞。感染48h后,观察HEK293T细胞中绿色荧光的分布情况,并采用实时荧光定量PCR法检测miR-186的表达水平。结果:测序分析,miR-186过表达慢病毒与GenBank上公布的miR-186序列完全一致。与对照组(0.838 7±0.145 6)比较,实验组HEK293T细胞中miR-186表达水平(12.640 0±0.788 4)明显升高(t=14.72,P<0.01),约为对照组的15.07倍。结论:成功构建miR-186过表达慢病毒载体并包装出慢病毒,miR-186慢病毒成功感染HEK293T细胞,miR-186表达水平在HEK293T细胞中明显升高。; 关键词 miR-186 慢病毒 HEK293T细胞过表达慢病毒载体绿色荧光蛋白; Keywords miR-186 lentivirus HEK293T cells overexpression lentiviral vector green fluorescence protein; 分类号 R346 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名TAZ诱导性过表达慢病毒载体的构建、鉴定及诱导过表达TAZ神经母细胞瘤细胞株的建立被引量：2: 4; 作者阮红峰应忠明罗环; 机构浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所台州中西医结合医院神经内科浙江大学医学院附属第二医院; 出处《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1035-1036,共2页; 基金国家自然科学基金项目(81804121) 浙江省自然科学基金(LQ17H270005) +5 种基金台州市科技局项目(No.1802ky76) 温岭市科技项目(No.2017C311128)。; 文摘神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见且致死性极高的实体肿瘤之一[1]。由NB所致死亡人数占所有儿童肿瘤死亡总数的15%[2]。分子靶向治疗是近年肿瘤领域研究的热点[3]。TAZ是一个包含WW-domain结构域的转录共激活子,参与多种肿瘤细胞的增殖、调控肿瘤转移,并能预测部分肿瘤患者的预后情况[4]。针对Oncomine肿瘤数据库NB肿瘤组织的生物信息学分析发现,TAZ基因在NB肿瘤组织中呈高表达,且随着NB的恶化,表达逐渐升高。而TAZ是否参与NB的形成及恶化尚未完全明确。; 关键词 TAZ基因神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 诱导过表达慢病毒载体; Keywords TAZ gene neuroblastoma cell SH-SY5Y inducible over-expressed lentivirus vector; 分类号 R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学] R373.9 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Vasohibin-2慢病毒过表达载体的构建及相关增殖功能研究被引量：1: 5; 作者孙杰涂敏卫积书高文涛苗毅; 机构南京医科大学第一附属医院胆胰外科南京医科大学第一附属医院普外科实验室; 出处《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期732-737,共6页; 基金 ]国家自然科学基金(81172267 81170336) 卫生公益性行业科研专项经费(201202007)资助; 文摘目的:构建Vasohibin-2(VASH2)慢病毒过表达载体,获得稳定表达的肝癌细胞株HepG2,并观察其对HepG2增殖的影响。方法:通过逆转录、PCR技术从细胞总RNA中获得VASH2目的基因,引入NheⅠ和PstⅠ酶切位点,连接到pTA2 vector中,经NheⅠ和PstⅠ双酶切后再连接到Lv-CMV-EGFP vector中,并对重组后的质粒进行双酶切和测序分析;VASH2过表达载体、pVSV-G及delta8.91 3个质粒共转染293T细胞,获得慢病毒感染肝癌细胞株HepG2,经流式细胞仪分选阳性细胞;提取细胞总RNA和总蛋白,利用real-time PCR和Western blot鉴定稳转细胞株中VASH2的表达,用MTT法和细胞周期法检测各组HepG2的增殖能力。结果:成功构建VASH2慢病毒过表达载体,感染肝癌细胞株HepG2后能够稳定高表达VASH2;稳定高表达VASH2的HepG2增殖能力明显增强(P<0.05)。结论:成功构建了VASH2慢病毒过表达载体,并发现VASH2可以促进HepG2的增殖能力,这为进一步研究VASH2在肝癌中的功能及作用机制奠定了基础。; 关键词 Vasohibin-2 慢病毒过表达载体细胞增殖; Keywords Vasohibin-2 lentivirus-mediated expression vector cell proliferation; 分类号 R329.28 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	PRDM5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染Neuro-2a细胞的建立	吴钊淳李友何嘉文廖科棋李胜男	《吉林大学学报(医学版)》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	胞质分裂作用因子4过表达慢病毒载体的构建和稳定转染Neuro-2a细胞的建立	李胜男何嘉文廖科棋李友	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	miR-186过表达慢病毒载体的构建及鉴定	李胜男王梦旭胡伟东陈少凤陈杏兰李友	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2019	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	TAZ诱导性过表达慢病毒载体的构建、鉴定及诱导过表达TAZ神经母细胞瘤细胞株的建立	阮红峰应忠明罗环	《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心	2020	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	Vasohibin-2慢病毒过表达载体的构建及相关增殖功能研究	孙杰涂敏卫积书高文涛苗毅	《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料