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应用免疫过氧化物酶试验诊断猪PRRS
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作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1996年第5期3-3,共1页
1995年波兰学者建立一种免疫过氧化物酶单层细胞试验,用于诊断猪生殖—呼吸综合症(即蓝耳病,PRRS)血清抗体,从可疑猪场采集42份猪血清样本,经该法检测结果有23份为PRRS抗体阳性,其中有10份抗体滴度】1:256;另对没有感染PRRS猪场采集的6... 1995年波兰学者建立一种免疫过氧化物酶单层细胞试验,用于诊断猪生殖—呼吸综合症(即蓝耳病,PRRS)血清抗体,从可疑猪场采集42份猪血清样本,经该法检测结果有23份为PRRS抗体阳性,其中有10份抗体滴度】1:256;另对没有感染PRRS猪场采集的60份血样检测,结果全为阴性。证实该法是比较特异的。目前,波兰已将此法作为PRRS常规诊断方法应用。 展开更多
关键词 免疫过氧化物单层细胞试验 试验诊断 猪PRRS 呼吸综合症 血清抗体 诊断方法 抗体滴度 血清样本 蓝耳病 抗体阳性
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猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量:43
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作者 刘长明 张超范 +2 位作者 危艳武 张朝霞 袁婧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期621-624,633,共5页
本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3... 本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周~10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 免疫过氧化物单层细胞试验 抗体检测试剂盒
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猪传染性胃肠炎病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验原位检测方法的建立 被引量:5
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作者 朱蕴暖 张鑫 +4 位作者 朱向东 陈建飞 时洪艳 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期237-239,共3页
为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的原位检测方法,本研究以TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,羊抗小鼠IgG-HRP为二抗,AEC过氧化物酶底物为显色液,建立了TGEV的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测方法。检测结果显示,一抗的最佳使用浓度为... 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的原位检测方法,本研究以TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,羊抗小鼠IgG-HRP为二抗,AEC过氧化物酶底物为显色液,建立了TGEV的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测方法。检测结果显示,一抗的最佳使用浓度为0.5 ng/μL,二抗的最佳稀释倍数为1∶2 000倍,经AEC显色,TGEV感染的阳性细胞呈红棕色;对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好特异性;同时该方法能够在普通显微镜下观察到病毒在细胞中的分布情况。本研究建立的方法为TGEV的实验室鉴定及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供有效的检测手段。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白 过氧化物单层试验
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猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫过氧化物酶单层细胞检测方法的建立 被引量:4
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作者 李华玮 付永 +4 位作者 黄岚 郭宏伟 乔宏兴 赵绪永 边传周 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第1期62-67,共6页
【目的】建立一种可直观判断猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的检测方法。【方法】应用PRRSV多抗血清作为一抗,建立了PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测体系,并对相关反应条件进行优... 【目的】建立一种可直观判断猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的检测方法。【方法】应用PRRSV多抗血清作为一抗,建立了PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测体系,并对相关反应条件进行优化,对其特异性和敏感性进行检测。【结果】最佳病毒接种感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.1,最佳感染时间为24 h,一抗最佳稀释度为1∶1000,所建立的PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测方法与其他几种流行猪病无交叉反应。对300份来自不同地区的临床血清进行检测,IPMA与PCR检测阳性符合率达93%。【结论】该方法具有良好的特异性和敏感性,为PRRSV的临床检测提供新方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 免疫过氧化物单层细胞试验 检测
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猪瘟病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验检测方法的建立
5
作者 朱海侠 陈雷 +3 位作者 查代灿 张惠云 胡晓涵 包松英 《福建畜牧兽医》 2022年第3期8-11,共4页
本研究旨在建立一种针对猪瘟病毒测定的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。通过优化一抗二抗的稀释倍数、细胞接毒时间、细胞固定条件等,建立能够测定猪瘟病毒的特异性方法。结果显示,建立的IPMA检测方法最优反应条件为接种CSFV,3... 本研究旨在建立一种针对猪瘟病毒测定的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。通过优化一抗二抗的稀释倍数、细胞接毒时间、细胞固定条件等,建立能够测定猪瘟病毒的特异性方法。结果显示,建立的IPMA检测方法最优反应条件为接种CSFV,37℃、5%CO_(2)培养72 h后,用含0.3%H_(2)O_(2)的甲醇溶液固定10 min,5%BSA封闭处理,1:200倍稀释的高免血清作用2 h,以1:1000倍稀释羊抗兔HRP-IgG作为二抗作用1 h,AEC 37℃显色15 min。结论:成功建立能够快速对猪瘟病毒含量测定的方法,该方法特异性强、操作方便,可以在生产过程中对猪瘟病毒的产毒情况进行监测。 展开更多
关键词 免疫过氧化物单层细胞试验 猪瘟病毒 特异性
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PRV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用 被引量:5
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作者 张超范 刘长明 +1 位作者 危艳武 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期445-449,共5页
本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),用于猪伪狂犬病病毒(PRV)血清抗体检测。通过对IPMA反应条件的优化,组装成PRV-IPMA诊断试剂盒,并对该试剂盒检测的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验。结果表明,IPMA检... 本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),用于猪伪狂犬病病毒(PRV)血清抗体检测。通过对IPMA反应条件的优化,组装成PRV-IPMA诊断试剂盒,并对该试剂盒检测的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验。结果表明,IPMA检测相对于SN的敏感性为96.2%,特异性为97.7%,两者的总符合率为96.9%;该试剂盒检测的重复性好,与其它病毒参考血清无交叉反应;试剂盒可在-20℃保存12个月,用该试剂盒检测PRV人工感染猪血清,于感染后2周抗体全部阳转,健康对照组猪血清抗体检测均为阴性结果。对来自黑龙江、吉林、上海、内蒙古、河北等地采集的5个猪场后备母猪150份血清样本进行检测,PRV血清抗体阳性检出率为16.7%~50%。检测结果表明这些猪场后备猪群仍需加强疫苗免疫。该试剂盒的研制为我国PRV流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪伪狂犬痛病毒 免疫过氧化物单层细胞试验 抗体检测试剂盒
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猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:4
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作者 李鸽 刘肖 +3 位作者 李青梅 杨艳艳 王彦红 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2019年第8期129-133,共5页
为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获... 为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为16D5、18G8和20C4,将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10^-6、1×10^-6和1×10^-5。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链为κ链。3株单克隆抗体特异识别H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒,并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应。Westernblot检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清均在56ku附近出现一条特异性的蛋白质条带,说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体。综上,成功制备了针对SIVNP蛋白的3株单克隆抗体,可识别不同亚型的SIV。 展开更多
关键词 猪流感病毒 免疫过氧化物单层细胞试验 NP蛋白 单克隆抗体
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IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究 被引量:3
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作者 杨艳艳 乔松林 +8 位作者 李睿 郭军庆 李青梅 滕蔓 王丽 赵东 李学伍 邓瑞广 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期217-223,共7页
为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12h后用含3%H2O2的甲醇固定细胞,以... 为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12h后用含3%H2O2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 免疫过氧化物单层细胞试验 筛选 单克隆抗体
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鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2
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作者 李青梅 王丽 +9 位作者 冯丽丽 张雨杭 赵东 杨艳艳 邢广旭 柴书军 李赛赛 张丽萍 郭军庆 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第1期127-131,共5页
采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法... 采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 单克隆抗体 免疫过氧化物单层细胞试验 血凝抑制试验 中和试验 中和活性
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猪细小病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:2
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作者 刘运超 杨苏珍 +6 位作者 陈玉梅 王聚财 尚延丽 魏蔷 陈维聪 冯华 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2021年第12期155-162,共8页
为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)单克隆抗体,采用血凝试验(HA)鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制(HI)效价可达1∶2^(16),取免... 为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)单克隆抗体,采用血凝试验(HA)鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制(HI)效价可达1∶2^(16),取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,采用有限稀释法进行多轮亚克隆,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选,成功获得杂交瘤细胞株5F7和11B3,能够稳定分泌中和性单克隆抗体。单克隆抗体5F7和11B3的轻链型均为Kappa,重链型分别为IgG2a和IgG2b。经ELISA和IPMA检测,单克隆抗体5F7和11B3均能与重组PPV VP2蛋白和PPV病毒粒子发生特异反应,而与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。5F7和11B3腹水针对PPV病毒反应的ELSIA效价分别为1∶10 240和1∶20 480;针对PPV感染PK15细胞的中和效价分别为1∶2^(11)和1∶2^(10)。Western blot鉴定结果显示,单克隆抗体5F7和11B3均不与变性的VP2蛋白发生反应,说明2株单克隆抗体均识别重组PPV VP2蛋白的构象型表位。综上,成功制备了2株具有中和活性的抗PPV单克隆抗体。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2蛋白 中和性单克隆抗体 免疫过氧化物单层细胞试验 杂交瘤细胞株
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非洲猪瘟病毒特异性抗体检测研究进展 被引量:9
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作者 祁元明 陈玉梅 王爱萍 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2021年第5期807-814,共8页
非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)会引发猪的急性、烈性、高度传染性疾病,因其病程短、传播迅速、死亡率高,严重影响中国养猪业健康发展。目前市场上仍缺乏有效的疫苗,因此ASFV抗体检测技术也可以作为ASFV诊断的参考方法... 非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)会引发猪的急性、烈性、高度传染性疾病,因其病程短、传播迅速、死亡率高,严重影响中国养猪业健康发展。目前市场上仍缺乏有效的疫苗,因此ASFV抗体检测技术也可以作为ASFV诊断的参考方法。开发快速简便的抗体检测技术,对于大规模的流行病学调查和无症状感染/康复猪的筛查尤为重要。本文系统总结了现有ASFV抗体检测技术和最新研究进展,阐述ASFV特异性抗体检测意义和ASFV特异性抗体检测样本类型,重点考察了ASFV特异性抗体检测常用的靶标以及检测靶标的筛选及其应用,比较了ASFV抗体检测的主要检测方法,明确了ASFV抗体检测的改进方向,并指出即时、即地、精准、快速以及自动化将是未来ASFV抗体检测技术的发展趋势。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 流行病学调查 特异性抗体检测 联免疫吸附试验 免疫印迹试验 间接免疫荧光试验 间接免疫过氧化物酶试验
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新生儿血清游离胆红素的测定及临床应用价值探讨 被引量:5
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作者 黄益础 陈雪雨 +5 位作者 杨勇 余霞娟 邱晓媚 赵捷 熊小云 杨传忠 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期318-325,共8页
[目的]探讨过氧化物酶(POD)法检测新生儿血清游离胆红素(UB)的临床适用性及应用价值。[方法]向胆红素标准品溶液(1、2、3μmol/L)加入H_(2)O_(2)(0.33 mol/L)和三种不同终末浓度(0.019、0.038、0.075μg/mL)的辣根过氧化物酶(HRP)以获... [目的]探讨过氧化物酶(POD)法检测新生儿血清游离胆红素(UB)的临床适用性及应用价值。[方法]向胆红素标准品溶液(1、2、3μmol/L)加入H_(2)O_(2)(0.33 mol/L)和三种不同终末浓度(0.019、0.038、0.075μg/mL)的辣根过氧化物酶(HRP)以获得标准化的HRP一级速率常数Kp;新生儿血清上样量25μL,稀释倍数41.6,于37℃且避光条件下用2.4、4.8μg/mL HRP检测血清UB水平,并验证该方法学的准确性、精密度以及稳定性;收集33例黄疸患儿的一般情况及临床资料,主要包括血清总胆红素(TSB)、间接胆红素(IDB)、白蛋白(ALB)、胆红素与白蛋白摩尔比值(BAMR)等;用Graphpad Prism 8.0统计分析实验数据。[结果]在pH值为7.4±0.2,反应温度37℃且避光条件下,标准化Kp为(7.20±1.08)mL·μg^(^(-1))·min^(-1)。HRP活性和UB水平分别于-20℃冻存3周和1周内无明显下降。不同UB水平血清样品的平均日内、日间变异系数均小于10%。本研究用POD法检测33例黄疸患儿(胎龄≥35周)的血清UB范围为(0.32~1.20)μg/dL,与TSB、IDB及BAMR均显著相关。有5例UB水平≥1.0μg/dL,强光疗者占60%(3/5)。[结论]采用POD法结合常见设备分光光度计检测新生儿血清UB水平不仅操作简易、检测快速,且试剂成本低,具有良好的准确性和精密度,便于临床开展。血清UB的测定对新生儿黄疸的临床管理有一定的指导意义。 展开更多
关键词 新生儿黄疸 血清游离胆红素 过氧化物酶试验
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猪细小病毒单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:1
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作者 张倩 李晓霞 +9 位作者 董昕欣 顾小雪 曹振 邓小雨 胡冬梅 刘奇 周智 遇秀玲 翟新验 田克恭 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第9期54-57,F0004,共5页
目的制备猪细小病毒(PPV)杂交瘤细胞株,并对其分泌的PPV单克隆抗体进行鉴定。方法按常规方法制备并获得2株杂交瘤细胞。用染色体分析对杂交瘤细胞进行鉴定,用间接ELISA、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)对其分泌... 目的制备猪细小病毒(PPV)杂交瘤细胞株,并对其分泌的PPV单克隆抗体进行鉴定。方法按常规方法制备并获得2株杂交瘤细胞。用染色体分析对杂交瘤细胞进行鉴定,用间接ELISA、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)对其分泌的单克隆抗体进行效价测定、亚型鉴定和特异性鉴定。结果得到2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H9、1F9,染色体数目介于90~110之间。细胞上清效价均达1∶1×104,腹水效价均达1∶1×107,其亚型分别为IgG1、IgM,均为kappa链。2H9、1F9单抗与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒I型(PCV-1)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)、乙脑病毒(JEV)等均无交叉反应。IPMA和IFA检测结果显示2H9、1F9单抗均能与接种于PK-15细胞的PPV发生特异性反应。结论成功制备了2株抗PPV杂交瘤细胞株,证实其产生的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 猪细小病毒 单克隆抗体 免疫过氧化物单层试验 间接免疫荧光
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非洲猪瘟的抗体检测 被引量:2
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作者 中国动物疫病预防控制中心 《中国畜牧业》 2019年第4期73-74,共2页
血清学检测技术因其简便、低成本和无须特殊的仪器设备,而成为最常用的检测技术。由于非洲猪瘟(ASF)尚没有可用的疫苗,非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体阳性即表明当前或者曾经发生了感染。此外,ASFV抗体在感染早期即可出现,并持续数年。然而,在... 血清学检测技术因其简便、低成本和无须特殊的仪器设备,而成为最常用的检测技术。由于非洲猪瘟(ASF)尚没有可用的疫苗,非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体阳性即表明当前或者曾经发生了感染。此外,ASFV抗体在感染早期即可出现,并持续数年。然而,在特急性和急性感染中,猪通常在抗体转为阳性前已死亡。因此,在疫病暴发的早期阶段,建议采集样品检测病毒DNA。对于检测ASF抗体,推荐使用ELISA筛查抗体阳性样品. 展开更多
关键词 过氧化物酶试验 ASF IPT ELISA 非洲猪瘟 血清样品 抗体检测 实验室诊断技术 间接荧光抗体试验
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猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备和鉴定
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作者 曹振 邓小雨 +5 位作者 张倩 倪建强 周智 遇秀玲 赵德明 田克恭 《中国动物检疫》 CAS 2012年第9期39-42,共4页
目的制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以纯化的PRRSV全病毒抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体,并测定其免疫球蛋白亚类、效价和特异性。结果成功获得2株能稳定分泌抗PRRSV... 目的制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以纯化的PRRSV全病毒抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体,并测定其免疫球蛋白亚类、效价和特异性。结果成功获得2株能稳定分泌抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为3C3、3D2,经鉴定亚类均为IgG2a、kappa链。2株单克隆抗体腹水ELISA效价达105~107,IPMA效价达1:2560~1:10240,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒等无交叉反应。结论获得特异性针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的单克隆抗体,为研究该病的快速诊断技术奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 单克隆抗体 联免疫吸附试验 免疫过氧化物单层试验
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H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立 被引量:4
16
作者 石建州 李青梅 +5 位作者 王彦红 刘肖 李鸽 郭军庆 邓瑞广 张改平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2691-2698,共8页
本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个... 本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10 2.63 TCID 50/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H 2O 2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。 展开更多
关键词 H1N1亚型猪流感病毒 免疫过氧化物单层细胞试验(IPMA) 单克隆抗体
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猪伪狂犬病毒变异株HN1201 gB蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:3
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作者 程璇 付朋飞 +3 位作者 杜永坤 褚贝贝 杨国宇 王江 《河南农业科学》 北大核心 2020年第10期137-142,共6页
为获得用于伪狂犬病毒(PRV)临床检测和实验室研究所需的PRV gB特异性抗体,以PRV变异病毒株PRV HN1201免疫小鼠,取免疫后小鼠脾脏细胞与SP/20细胞融合,制备抗PRV gB蛋白的单克隆抗体。经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光... 为获得用于伪狂犬病毒(PRV)临床检测和实验室研究所需的PRV gB特异性抗体,以PRV变异病毒株PRV HN1201免疫小鼠,取免疫后小鼠脾脏细胞与SP/20细胞融合,制备抗PRV gB蛋白的单克隆抗体。经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)筛选出1株稳定分泌PRV gB蛋白抗体的单克隆细胞系,经鉴定该细胞系所分泌抗体为IgG1亚型,腹水纯化抗体的IFA效价为2^-11;细胞培养上清和腹水纯化抗体用于Western blot的最佳稀释比分别为1∶50和1∶5000;杂交瘤细胞诱导小鼠腹水的中和效价为1∶25。IPMA、IFA及Western blot试验结果显示,制备的单克隆抗体能特异性识别PRV gB蛋白。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒变异株HN1201 gB蛋白 单克隆抗体 Western blot 免疫过氧化物单层细胞试验 间接免疫荧光试验
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我国猪繁殖——呼吸综合征研究进展
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作者 张振兴 《畜牧兽医科技信息》 1996年第16期2-3,共2页
猪繁殖——呼吸综合征(PRRS)自1987年在美国发现以来,先后在加拿大、德、荷、比、英、法、意、奥、瑞士、波兰、西班牙、丹麦、马耳他和日本等国证实存在。PRRS在短短数年间蔓延之快、扩散之广,实不多见!近两年来,本病在我国猪群被发现... 猪繁殖——呼吸综合征(PRRS)自1987年在美国发现以来,先后在加拿大、德、荷、比、英、法、意、奥、瑞士、波兰、西班牙、丹麦、马耳他和日本等国证实存在。PRRS在短短数年间蔓延之快、扩散之广,实不多见!近两年来,本病在我国猪群被发现、证实,并进行了系统研究,进展简述如下。 展开更多
关键词 呼吸综合征 PRRSV 猪繁殖 肺泡巨噬细胞 血清样本 ELISA 诊断试剂盒 免疫过氧化物单层细胞试验 流产胎儿 阳性检出率
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5株水貂阿留申病毒的分离与鉴定
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作者 刘东旭 时坤 +3 位作者 李健明 曾范利 刘菲 杜锐 《中国动物检疫》 CAS 2015年第12期73-77,共5页
为给水貂阿留申病疫苗的研制奠定基础,对疑似感染阿留申病死亡的水貂内脏处理后,接种猫肾传代细胞(CRFK)分离病毒,并对分离的毒株进行PCR鉴定及动物回归试验。与此同时,首次应用免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)对所分离的水貂阿留申... 为给水貂阿留申病疫苗的研制奠定基础,对疑似感染阿留申病死亡的水貂内脏处理后,接种猫肾传代细胞(CRFK)分离病毒,并对分离的毒株进行PCR鉴定及动物回归试验。与此同时,首次应用免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)对所分离的水貂阿留申病毒进行TCID_(50)的测定。结果成功分离并鉴定出5株水貂阿留申病毒株,分别命名为ADV-DL124、ADV-DL125、ADV-ZJ3、ADV-QD2、ADV-QD3,各分离株的TCID_(50)分别为10^(5.7)TCID_(50)/ml、10^(5.0)TCID_(50)/ml、10^(4.6)TCID_(50)/mL、10^(5.2)TCID_(50)/mL、10^(4.1)TCID_(50)/mL。动物回归实验显示,所分离的病毒对水貂具有致病性,为水貂阿留申病毒强毒株。 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒 分离 鉴定 免疫过氧化物单层细胞试验
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抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:5
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作者 刘运超 陈玉梅 +4 位作者 冯丽丽 汪磊 王聚财 陆东峰 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2019年第12期114-120,共7页
为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获... 为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体轻链均属于κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型。间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×10^5~1.02×10^6;IPMA效价分别为6.40×10^4、1.28×10^5、2.56×10^5、1.28×10^5;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV2)均无交叉反应。病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×10^4。综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 免疫过氧化物单层细胞试验
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