Felis domesticus allergen 1(Fel d 1)作为猫诱发过敏性疾病的主要变应原,其诱发的症状从轻度的过敏性鼻炎到危及生命的哮喘反应不等。本研究基于抗原递送系统构建了一种新型免疫干预策略:通过重组大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia col...Felis domesticus allergen 1(Fel d 1)作为猫诱发过敏性疾病的主要变应原,其诱发的症状从轻度的过敏性鼻炎到危及生命的哮喘反应不等。本研究基于抗原递送系统构建了一种新型免疫干预策略:通过重组大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)实现体内表达rFel d 1,以期能够预防rFel d 1引起的过敏反应。猫主要变应原Fel d 1基因序列号来自NCBI GenBank库,选取链1和链2的CDS序列,将链1 C端的半胱氨酸残基(Cys)与链2 N端的缬氨酸残基(Val)共价连接形成重组Fel d 1(rFel d 1)。在rFel d 1的N端引入3个重复的GS序列,C端添加一段6×His标签序列,经密码子优化后克隆至pBad载体,构成pBad-rFel d 1原核表达载体。将pBad-rFel d 1质粒转化至EcN感受态细胞中构建重组大肠杆菌EcNrFel d 1。在小鼠过敏模型中,综合分析EcNrFel d 1对rFel d 1诱发的过敏反应的预防效果。结果表明,预先给予体内表达rFel d 1的重组大肠杆菌EcNrFel d 1能够有效预防气道高反应性和IgE水平的升高,避免肺组织发生病变以及rFel d 1特异性激活的局部或全身过敏反应,防止体内Th1/Th2和Th17/Treg失衡。本研究基于益生菌EcN的体内定植优势及局部缓释特性,构建预防性重组大肠杆菌EcNrFel d 1。该疫苗通过调控Th1/Th2、Treg/Th17免疫平衡及诱导阻断性抗体的产生,从而有效预防rFel d 1诱发的过敏反应。展开更多
为构建可靠、稳定的过敏性哮喘小鼠模型,选取12只5周龄雌性BALB/c小鼠,随机分为模型组和对照组,每组6只。模型组每只小鼠腹腔注射100μL的1 g·L^(-1)猫、犬融合变应原Fel d 1-Can f 1/氢氧化铝复合物致敏,并经气管注入100μL的1 g&...为构建可靠、稳定的过敏性哮喘小鼠模型,选取12只5周龄雌性BALB/c小鼠,随机分为模型组和对照组,每组6只。模型组每只小鼠腹腔注射100μL的1 g·L^(-1)猫、犬融合变应原Fel d 1-Can f 1/氢氧化铝复合物致敏,并经气管注入100μL的1 g·L^(-1)猫、犬融合变应原Fel d 1-Can f 1激发,对照组给予等体积PBS(pH=7.4)。检测血清特异性IgE水平、气道反应性水平、变应原诱发应激性过敏反应、耳朵点刺试验、肺部组织炎症浸润程度、肺部组织多黏液杯状细胞数和胶原纤维沉积程度等多个指标,以判断过敏性哮喘模型是否构建成功。结果表明,与对照组相比,经Fel d 1-Can f 1诱导的小鼠血清特异性IgE水平显著上升,气道反应性显著增高,变应原诱发体温下降明显,耳朵染料渗漏面积增大,渗漏净强度显著增强,肺部炎症浸润显著增加,多黏液杯状细胞数增加,胶原纤维沉积程度加重。综上所述,本研究成功构建过敏性哮喘小鼠模型,可为猫、犬过敏防治型疫苗的开发及评价提供模型条件。展开更多
文摘Felis domesticus allergen 1(Fel d 1)作为猫诱发过敏性疾病的主要变应原,其诱发的症状从轻度的过敏性鼻炎到危及生命的哮喘反应不等。本研究基于抗原递送系统构建了一种新型免疫干预策略:通过重组大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)实现体内表达rFel d 1,以期能够预防rFel d 1引起的过敏反应。猫主要变应原Fel d 1基因序列号来自NCBI GenBank库,选取链1和链2的CDS序列,将链1 C端的半胱氨酸残基(Cys)与链2 N端的缬氨酸残基(Val)共价连接形成重组Fel d 1(rFel d 1)。在rFel d 1的N端引入3个重复的GS序列,C端添加一段6×His标签序列,经密码子优化后克隆至pBad载体,构成pBad-rFel d 1原核表达载体。将pBad-rFel d 1质粒转化至EcN感受态细胞中构建重组大肠杆菌EcNrFel d 1。在小鼠过敏模型中,综合分析EcNrFel d 1对rFel d 1诱发的过敏反应的预防效果。结果表明,预先给予体内表达rFel d 1的重组大肠杆菌EcNrFel d 1能够有效预防气道高反应性和IgE水平的升高,避免肺组织发生病变以及rFel d 1特异性激活的局部或全身过敏反应,防止体内Th1/Th2和Th17/Treg失衡。本研究基于益生菌EcN的体内定植优势及局部缓释特性,构建预防性重组大肠杆菌EcNrFel d 1。该疫苗通过调控Th1/Th2、Treg/Th17免疫平衡及诱导阻断性抗体的产生,从而有效预防rFel d 1诱发的过敏反应。
文摘为构建可靠、稳定的过敏性哮喘小鼠模型,选取12只5周龄雌性BALB/c小鼠,随机分为模型组和对照组,每组6只。模型组每只小鼠腹腔注射100μL的1 g·L^(-1)猫、犬融合变应原Fel d 1-Can f 1/氢氧化铝复合物致敏,并经气管注入100μL的1 g·L^(-1)猫、犬融合变应原Fel d 1-Can f 1激发,对照组给予等体积PBS(pH=7.4)。检测血清特异性IgE水平、气道反应性水平、变应原诱发应激性过敏反应、耳朵点刺试验、肺部组织炎症浸润程度、肺部组织多黏液杯状细胞数和胶原纤维沉积程度等多个指标,以判断过敏性哮喘模型是否构建成功。结果表明,与对照组相比,经Fel d 1-Can f 1诱导的小鼠血清特异性IgE水平显著上升,气道反应性显著增高,变应原诱发体温下降明显,耳朵染料渗漏面积增大,渗漏净强度显著增强,肺部炎症浸润显著增加,多黏液杯状细胞数增加,胶原纤维沉积程度加重。综上所述,本研究成功构建过敏性哮喘小鼠模型,可为猫、犬过敏防治型疫苗的开发及评价提供模型条件。
