采用高压脉冲电场(pulsed electric field,PEF)结合糖基化处理β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg),在β-Lg与半乳糖质量比1:2、反应温度60℃、反应时间3 h、p H 7.4和不同PEF强度反应条件下,研究改性前后β-Lg的过敏原性和功能性质的...采用高压脉冲电场(pulsed electric field,PEF)结合糖基化处理β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg),在β-Lg与半乳糖质量比1:2、反应温度60℃、反应时间3 h、p H 7.4和不同PEF强度反应条件下,研究改性前后β-Lg的过敏原性和功能性质的变化。结果表明,经过PEF结合糖基化处理后,β-Lg自由氨基含量显著降低,β-Lg过敏原性有一定程度下降,15 kV/cm PEF处理90μs后进行糖基化,过敏原性降低程度最大;在此条件下,β-Lg的溶解性、乳化性、乳化稳定性及抗氧化活性显著提高(P<0.05)。这为制备低致敏性且功能性质好的β-Lg提供了一种新的方法。展开更多
本文研究了56个花生品种中8种主要过敏蛋白及其过敏原性的差异,为低致敏性花生的育种和消费提供支持。收集了33个中国花生品种和23个日本花生品种并统一种植,收获后进行花生品种间的致敏性差异性研究。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶成...本文研究了56个花生品种中8种主要过敏蛋白及其过敏原性的差异,为低致敏性花生的育种和消费提供支持。收集了33个中国花生品种和23个日本花生品种并统一种植,收获后进行花生品种间的致敏性差异性研究。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶成像系统分析了花生主要过敏原的种类和含量,用免疫印迹和间接ELISA方法测定各花生品种的致敏蛋白及其过敏原性。结果发现,过敏原Ara h 1在56个品种中的相对含量最高,其次是Ara h 2(20 kDa)和Ara h 3(14 kDa)。中国花生品种中绥中大花生和沭阳大站秧缺失过敏蛋白Ara h 3(35 kDa),新金伏大、兴城大花生和如东碗儿青缺失过敏蛋白Ara h 3(24 kDa),日本花生品种JP-16与JP-19中过敏蛋白Ara h 3(24 kDa)缺失。用中国花生过敏患者的血清进行间接ELISA试验,发现中国花生的过敏原性较日本花生强,这可能与所用的血清来源于中国病人有关。中国花生品种中致敏性最低的是铁岭四粒红,最高的是营口四粒红。日本花生品种中JP-10的致敏性最强,JP-6的致敏性最低。决定花生的致敏性强弱的因素复杂,单纯过敏条带的缺失或含量高低和花生致敏性并不存在线性关系。展开更多
通过生物信息学相关软件分析大豆过敏原Gly m 4蛋白理化性质(Prot Param)、信号肽(Signal P 4.1 Server)、跨膜区(TMHMM Server V 2.0)、B细胞表位(DNAStar)、MHC-Ⅱ类分子的结合能力(Net MHCⅡ2.2)。结果发现:Gly m4蛋白稳定性较好,无...通过生物信息学相关软件分析大豆过敏原Gly m 4蛋白理化性质(Prot Param)、信号肽(Signal P 4.1 Server)、跨膜区(TMHMM Server V 2.0)、B细胞表位(DNAStar)、MHC-Ⅱ类分子的结合能力(Net MHCⅡ2.2)。结果发现:Gly m4蛋白稳定性较好,无信号肽与跨膜区,转角结构丰富;B细胞抗原表位预测表明,Gly m 4蛋白61~64、93~94、122~125、127~130、134~137区域是潜在B细胞抗原表位;MHC-Ⅱ类分子的结合力分析表明Gly m 4蛋白144~153区域及82~96区域是潜在T细胞抗原表位,同时发现HLA-DRB10701、HLA-DRB10101等位基因型人群对Gly m 4蛋白较敏感。Gly m 4蛋白抗原表位分析为大豆过敏原的低过敏原性改造提供参考依据。展开更多
粉尘螨是诱导过敏性疾病的重要变应原,可诱发Ⅰ型变态反应,对其免疫原性的鉴定是研究过敏性鼻炎等过敏性疾病的基础.首次对粉尘螨过敏原基因Der f 35进行克隆表达、纯化及免疫原性鉴定,提取粉尘螨总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),根...粉尘螨是诱导过敏性疾病的重要变应原,可诱发Ⅰ型变态反应,对其免疫原性的鉴定是研究过敏性鼻炎等过敏性疾病的基础.首次对粉尘螨过敏原基因Der f 35进行克隆表达、纯化及免疫原性鉴定,提取粉尘螨总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),根据已知基因序列(GenBank:LC175222.1)设计引物进行反转录聚合酶链式反应扩增,经Bam H I和Xho I双酶切,连接构建pET-32a-Der f 35载体,并克隆至大肠杆菌TOP 10菌株,取1 mL克隆菌液进行测序.使用试剂盒提取高纯度质粒转至感受态细胞Rosetta(DE3)中进行诱导、表达纯化及免疫学鉴定,并进行同源性比对分析、进化树构建及二级结构预测.克隆和表达结果显示,Der f 35基因的片段长约436个碱基对(base pair,bp);重组蛋白Der f 35相对分子质量约为30 ku(1 u=1 D),与预期结果相符.蛋白质印迹法结果证明,Der f 35与尘螨过敏性疾病患者的血清结合有明显的反应原性.生物信息学进化树结果显示,粉尘螨与屋尘螨、热带无爪螨、害嗜鳞螨、绵羊痒螨和免耳痒螨亲缘关系较近,二级结构预测显示Der f 35的氨基酸序列由2个α螺旋、6个β折叠、2个β转角和10个无规则卷曲片段组成.研究结果可为尘螨过敏性疾病的诊断与治疗提供理论依据.展开更多
文摘采用高压脉冲电场(pulsed electric field,PEF)结合糖基化处理β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg),在β-Lg与半乳糖质量比1:2、反应温度60℃、反应时间3 h、p H 7.4和不同PEF强度反应条件下,研究改性前后β-Lg的过敏原性和功能性质的变化。结果表明,经过PEF结合糖基化处理后,β-Lg自由氨基含量显著降低,β-Lg过敏原性有一定程度下降,15 kV/cm PEF处理90μs后进行糖基化,过敏原性降低程度最大;在此条件下,β-Lg的溶解性、乳化性、乳化稳定性及抗氧化活性显著提高(P<0.05)。这为制备低致敏性且功能性质好的β-Lg提供了一种新的方法。
文摘本文研究了56个花生品种中8种主要过敏蛋白及其过敏原性的差异,为低致敏性花生的育种和消费提供支持。收集了33个中国花生品种和23个日本花生品种并统一种植,收获后进行花生品种间的致敏性差异性研究。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶成像系统分析了花生主要过敏原的种类和含量,用免疫印迹和间接ELISA方法测定各花生品种的致敏蛋白及其过敏原性。结果发现,过敏原Ara h 1在56个品种中的相对含量最高,其次是Ara h 2(20 kDa)和Ara h 3(14 kDa)。中国花生品种中绥中大花生和沭阳大站秧缺失过敏蛋白Ara h 3(35 kDa),新金伏大、兴城大花生和如东碗儿青缺失过敏蛋白Ara h 3(24 kDa),日本花生品种JP-16与JP-19中过敏蛋白Ara h 3(24 kDa)缺失。用中国花生过敏患者的血清进行间接ELISA试验,发现中国花生的过敏原性较日本花生强,这可能与所用的血清来源于中国病人有关。中国花生品种中致敏性最低的是铁岭四粒红,最高的是营口四粒红。日本花生品种中JP-10的致敏性最强,JP-6的致敏性最低。决定花生的致敏性强弱的因素复杂,单纯过敏条带的缺失或含量高低和花生致敏性并不存在线性关系。
文摘通过生物信息学相关软件分析大豆过敏原Gly m 4蛋白理化性质(Prot Param)、信号肽(Signal P 4.1 Server)、跨膜区(TMHMM Server V 2.0)、B细胞表位(DNAStar)、MHC-Ⅱ类分子的结合能力(Net MHCⅡ2.2)。结果发现:Gly m4蛋白稳定性较好,无信号肽与跨膜区,转角结构丰富;B细胞抗原表位预测表明,Gly m 4蛋白61~64、93~94、122~125、127~130、134~137区域是潜在B细胞抗原表位;MHC-Ⅱ类分子的结合力分析表明Gly m 4蛋白144~153区域及82~96区域是潜在T细胞抗原表位,同时发现HLA-DRB10701、HLA-DRB10101等位基因型人群对Gly m 4蛋白较敏感。Gly m 4蛋白抗原表位分析为大豆过敏原的低过敏原性改造提供参考依据。
文摘粉尘螨是诱导过敏性疾病的重要变应原,可诱发Ⅰ型变态反应,对其免疫原性的鉴定是研究过敏性鼻炎等过敏性疾病的基础.首次对粉尘螨过敏原基因Der f 35进行克隆表达、纯化及免疫原性鉴定,提取粉尘螨总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),根据已知基因序列(GenBank:LC175222.1)设计引物进行反转录聚合酶链式反应扩增,经Bam H I和Xho I双酶切,连接构建pET-32a-Der f 35载体,并克隆至大肠杆菌TOP 10菌株,取1 mL克隆菌液进行测序.使用试剂盒提取高纯度质粒转至感受态细胞Rosetta(DE3)中进行诱导、表达纯化及免疫学鉴定,并进行同源性比对分析、进化树构建及二级结构预测.克隆和表达结果显示,Der f 35基因的片段长约436个碱基对(base pair,bp);重组蛋白Der f 35相对分子质量约为30 ku(1 u=1 D),与预期结果相符.蛋白质印迹法结果证明,Der f 35与尘螨过敏性疾病患者的血清结合有明显的反应原性.生物信息学进化树结果显示,粉尘螨与屋尘螨、热带无爪螨、害嗜鳞螨、绵羊痒螨和免耳痒螨亲缘关系较近,二级结构预测显示Der f 35的氨基酸序列由2个α螺旋、6个β折叠、2个β转角和10个无规则卷曲片段组成.研究结果可为尘螨过敏性疾病的诊断与治疗提供理论依据.
