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人宫颈癌细胞辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的表达及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 宋旭红 梁斌 +3 位作者 刘戈飞 谢健平 李蕊 黄东阳 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期983-986,共4页
目的制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体,为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法扩增NRDRB1开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRB1... 目的制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体,为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法扩增NRDRB1开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRB1包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的NRDRB1重组蛋白作为免疫原,经肩胛骨下注射免疫新西兰白兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProteinG柱纯化兔IgG,免疫印迹和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果NRDRB1在大肠杆菌BL21-AI中高效表达,回收的NRDRB1蛋白溶液浓度为0.42mg/ml。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清。血清效价为l∶2000,对NRDRB1蛋白的检测极限是6.4ng。纯化后的NRDRB1抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论NRDRB1原核表达载体的构建、蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 辅酶ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶b1 基因表达 宫颈肿瘤
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辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 刘戈飞 宋旭红 +2 位作者 梁斌 杜昆 黄东阳 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期227-229,共3页
目的制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProte... 目的制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProteinG柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性。结果BL21-AI对NRDR进行了高效表达。回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1∶500,检测极限是8ngNRDR蛋白。纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法。 展开更多
关键词 辅酶依赖性黄醇/还原酶 基因表达 多克隆抗体 免疫
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