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传染性造血器官坏死病毒微型基因组表达干扰素对病毒的抑制效应
被引量：
3
1
作者
王会英
蒋烨
+6 位作者
赵丽丽
唐丽杰
乔薪瑗
姜艳平
崔文
李一经
刘敏
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2016年第1期3-8,17,共7页
为构建传染性造血器官坏死病毒(IHNV HLJ-09)微型基因组并表达虹鳟IFN,采用RT-PCR扩增IHNV HLJ-09株的N、P、L、G和NV蛋白基因并亚克隆入真核表达载体pCI中,构建辅助质粒pCI-N、pCI-P、pCI-L、pCI-G和pCI-NV;将扩增获得的IHNV基因组两...
为构建传染性造血器官坏死病毒(IHNV HLJ-09)微型基因组并表达虹鳟IFN,采用RT-PCR扩增IHNV HLJ-09株的N、P、L、G和NV蛋白基因并亚克隆入真核表达载体pCI中,构建辅助质粒pCI-N、pCI-P、pCI-L、pCI-G和pCI-NV;将扩增获得的IHNV基因组两末端序列、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因、虹鳟I型干扰素(IFN)基因克隆到真核表达载体pCI中构建出表达EGFP的IHNV微型基因组pCI-LFGT和表达IFN的IHNV微型基因组pCI-LFIT;将pCI-LFIT质粒转染已接种IHNV HLJ-09毒株的EPC细胞,实时荧光定量PCR法测定细胞中IHNV G基因RNA。结果显示:构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与5个辅助质粒共转染,外源基因均能正确表达;pCI-LFIT质粒转染已接种病毒的EPC细胞组与对照组相比其中的病毒核酸显著减少。
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关键词
传染性造血器官坏死病毒
辅助质粒
虹鳟Ⅰ型干扰素
微型基因组
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职称材料
新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因表达载体的构建及真核表达
被引量：
1
2
作者
呙会会
刘垒
+4 位作者
周祖涛
李筱雯
金卉
肖运才
王贵强
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2014年第6期1-5,共5页
为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统,构建新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因的真核表达载体。根据GenBank中新城疫La Sota株的全长序列(JF950510.1),设计4对特异性引物,用RT-PCR法扩增出新城疫病毒La Sot...
为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统,构建新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因的真核表达载体。根据GenBank中新城疫La Sota株的全长序列(JF950510.1),设计4对特异性引物,用RT-PCR法扩增出新城疫病毒La Sota株的NP、P和L基因,将其克隆到真核载体pCl-neo上。通过酶切和测序验证克隆正确,得到重组质粒pCl-NP、pCl-P和pCl-L,瞬时转染到BHK-21细胞中。经RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光试验分别检测NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。经上述三种方法分别检测到NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。重组质粒pCl-NP、pCl-P和pCl-L构建成功,为后期新城疫病毒反向遗传操作系统的构建奠定了基础。
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关键词
新城疫病毒
P和L基因
辅助质粒
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职称材料
题名
传染性造血器官坏死病毒微型基因组表达干扰素对病毒的抑制效应
被引量：
3
1
作者
王会英
蒋烨
赵丽丽
唐丽杰
乔薪瑗
姜艳平
崔文
李一经
刘敏
机构
东北农业大学动物医学学院
东北农业大学动物科学与技术学院
出处
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2016年第1期3-8,17,共7页
基金
国家自然科学基金(31372568)
东北农业大学博士启动基金项目(2012RCB66)
文摘
为构建传染性造血器官坏死病毒(IHNV HLJ-09)微型基因组并表达虹鳟IFN,采用RT-PCR扩增IHNV HLJ-09株的N、P、L、G和NV蛋白基因并亚克隆入真核表达载体pCI中,构建辅助质粒pCI-N、pCI-P、pCI-L、pCI-G和pCI-NV;将扩增获得的IHNV基因组两末端序列、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因、虹鳟I型干扰素(IFN)基因克隆到真核表达载体pCI中构建出表达EGFP的IHNV微型基因组pCI-LFGT和表达IFN的IHNV微型基因组pCI-LFIT;将pCI-LFIT质粒转染已接种IHNV HLJ-09毒株的EPC细胞,实时荧光定量PCR法测定细胞中IHNV G基因RNA。结果显示:构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与5个辅助质粒共转染,外源基因均能正确表达;pCI-LFIT质粒转染已接种病毒的EPC细胞组与对照组相比其中的病毒核酸显著减少。
关键词
传染性造血器官坏死病毒
辅助质粒
虹鳟Ⅰ型干扰素
微型基因组
Keywords
infectious haemopoietic necrosis virus
support plasmids
rainbow trout IFN-Ⅰ
minigenome
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因表达载体的构建及真核表达
被引量：
1
2
作者
呙会会
刘垒
周祖涛
李筱雯
金卉
肖运才
王贵强
机构
华中农业大学动物医学院
湖北省畜禽育种中心
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2014年第6期1-5,共5页
基金
湖北省自然科学基金项目(2010CDB10101)
湖北省农业创新岗位基金
文摘
为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统,构建新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因的真核表达载体。根据GenBank中新城疫La Sota株的全长序列(JF950510.1),设计4对特异性引物,用RT-PCR法扩增出新城疫病毒La Sota株的NP、P和L基因,将其克隆到真核载体pCl-neo上。通过酶切和测序验证克隆正确,得到重组质粒pCl-NP、pCl-P和pCl-L,瞬时转染到BHK-21细胞中。经RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光试验分别检测NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。经上述三种方法分别检测到NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。重组质粒pCl-NP、pCl-P和pCl-L构建成功,为后期新城疫病毒反向遗传操作系统的构建奠定了基础。
关键词
新城疫病毒
P和L基因
辅助质粒
Keywords
NP
Newcastle disease virus
NP,P and L genes
helper plasmids
分类号
S852.659 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
传染性造血器官坏死病毒微型基因组表达干扰素对病毒的抑制效应
王会英
蒋烨
赵丽丽
唐丽杰
乔薪瑗
姜艳平
崔文
李一经
刘敏
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2016
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因表达载体的构建及真核表达
呙会会
刘垒
周祖涛
李筱雯
金卉
肖运才
王贵强
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2014
1
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职称材料
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