杆状病毒是主要对昆虫显示病原性的一类病毒,可感染600多种昆虫,是自然生态体系统中调节虫口密度的主要生物因子之一。它以大的棒状病毒粒子、内含分子量为28～60kb 的闭环超螺旋双链 DNA 基因组的特征。分类上将杆状病毒种分为3个亚组...杆状病毒是主要对昆虫显示病原性的一类病毒,可感染600多种昆虫,是自然生态体系统中调节虫口密度的主要生物因子之一。它以大的棒状病毒粒子、内含分子量为28～60kb 的闭环超螺旋双链 DNA 基因组的特征。分类上将杆状病毒种分为3个亚组:A 亚组的核多角体病毒,以多角体蛋白结晶基质包涵许多有囊膜的核衣壳形成多角体为特征;苜蓿尺蠖核多角体病毒(AcNPV)和家蚕核多角体病毒(BmNPV)分别为多粒包埋型和单粒包埋型为代表种,B展开更多
胆固醇氧化酶在医药检测、食品加工、农业生产等方面都有重要的应用价值。以来源于Rhodococcus sp.的胆固醇氧化酶基因为研究对象,构建于温控表达载体p Hsh上,免去了诱导剂的使用,采用温度调控使胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中成功表达...胆固醇氧化酶在医药检测、食品加工、农业生产等方面都有重要的应用价值。以来源于Rhodococcus sp.的胆固醇氧化酶基因为研究对象,构建于温控表达载体p Hsh上,免去了诱导剂的使用,采用温度调控使胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中成功表达。在摇瓶水平对酶的表达量进行优化,最终的酶量为855 U/L。使用镍柱将酶纯化,得到单一条带,相对分子质量约为55 k Da。分析其酶学性质,最适p H 7.0,在p H 5.0～7.0稳定;最适反应温度40℃,在50℃保温,其半衰期为6.9 min。以胆固醇为底物,在p H 7.5、37℃条件下测酶活,计算得动力学参数K_m为3.38 mmol/L,k_（cat）/K_m为6.09 s-1·（mmol/L）。展开更多
【目的】研究旨在对努比亚山羊大脑富集Ras同源物(Ras homolog enriched in brain,Rheb)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体,为进一步揭示Rheb对努比亚山羊骨骼肌调控的分子机理奠定基础。【方法】试验采用RT-PCR方法从努比亚山...【目的】研究旨在对努比亚山羊大脑富集Ras同源物(Ras homolog enriched in brain,Rheb)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体,为进一步揭示Rheb对努比亚山羊骨骼肌调控的分子机理奠定基础。【方法】试验采用RT-PCR方法从努比亚山羊背最长肌组织中扩增Rheb基因,经琼脂糖凝胶电泳及测序验证正确后进行生物信息学分析,同时构建该基因真核表达载体,转染细胞后进行实时荧光定量PCR检测来验证所构建载体的正确性。【结果】努比亚山羊Rheb基因编码区序列长度为555 bp,编码184个氨基酸,Rheb蛋白分子式为C 910 H 1456 N 236 O 279 S 6,分子质量为20359.34 u,原子总数为2887,理论等电点为5.93。Rheb蛋白属于稳定的亲水性蛋白,不包含跨膜结构域。蛋白二级结构预测结果显示,努比亚山羊Rheb蛋白中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲分别占40.76%、7.07%、22.83%和29.35%。构建的真核表达载体pcDNA3.1-Rheb转染山羊骨骼肌细胞后,与空载体组相比,Rheb基因表达量极显著升高(P<0.01)。【结论】本试验成功克隆努比亚山羊Rheb基因编码区序列,并构建pcDNA3.1-Rheb真核表达载体,这为深入理解Rheb基因在努比亚山羊肌肉中的作用提供了理论支持。展开更多
【目的】试验旨在探究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,CEBPA)基因在如皋黄鸡中的生物学特征、组织表达水平,并构建其表达载体。【方法】对如皋黄鸡CEBPA基因CDS区进行克隆并测序,与其他物种进行相似性比...【目的】试验旨在探究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,CEBPA)基因在如皋黄鸡中的生物学特征、组织表达水平,并构建其表达载体。【方法】对如皋黄鸡CEBPA基因CDS区进行克隆并测序,与其他物种进行相似性比对及系统进化树构建,通过生物信息学软件对如皋黄鸡CEBPA蛋白的理化性质、磷酸化位点、糖基化位点、功能结构域、互作蛋白及二级结构、三级结构进行预测。利用实时荧光定量PCR技术检测CEBPA基因在如皋黄鸡心脏、肝脏、肺脏、肾脏、十二指肠、空肠、腺胃、肌肉、睾丸中的表达情况。构建CEBPA基因过表达(OE-CEBPA)和干扰载体(CEBPA-sh12,CEBPA-sh167,CEBPA-sh727),并检测各载体活性。【结果】如皋黄鸡CEBPA基因CDS区序列全长975 bp,共编码324个氨基酸。相似性比对结果显示,如皋黄鸡与日本鹌鹑、鸿雁、野鸽、野鸭的CEBPA氨基酸序列相似性均>94%,其中与日本鹌鹑的相似性最高,达99.4%;系统进化树结果表明,如皋黄鸡与日本鹌鹑的亲缘关系较近,与哺乳动物的亲缘关系较远。如皋黄鸡CEBPA蛋白为亲水不稳定蛋白,存在25个磷酸化位点,含9个N-糖基化位点和109个O-糖基化位点;CEBPA蛋白具有1个转录激活区和1个与DNA结合的亮氨酸拉链结构bZIP;如皋黄鸡CEBPA蛋白二级结构主要由193个无规则卷曲、93个α-螺旋、25个延伸链和13个β-转角组成,三级结构预测结果与二级结构基本一致;CEBPA蛋白主要与TRIB1、PPARG、RXRA、MAPK9、MAPK10、JUN、ESR1等蛋白互作。CEBPA基因在如皋黄鸡各组织中均有表达,其中以肝脏中表达量最高。成功构建CEBPA过表达载体和3个干扰载体,将它们分别转染至鸡成纤维细胞,与对照组相比,过表达组(OE-CEBPA)CEBPA基因表达量显著升高(P<0.05),干扰组(CEBPA-sh167)CEBPA基因表达量显著下降(P<0.05)。【结论】试验获得如皋黄鸡CEBPA基因完整CDS区并成功构建与筛选出具有过表达/干扰活性最佳的鸡CEBPA表达载体,该基因在如皋黄鸡各组织中广泛表达,其中以肝脏中相对表达量较高。结果为进一步研究鸡CEBPA的功能提供了参考依据。展开更多
文摘杆状病毒是主要对昆虫显示病原性的一类病毒,可感染600多种昆虫,是自然生态体系统中调节虫口密度的主要生物因子之一。它以大的棒状病毒粒子、内含分子量为28～60kb 的闭环超螺旋双链 DNA 基因组的特征。分类上将杆状病毒种分为3个亚组:A 亚组的核多角体病毒,以多角体蛋白结晶基质包涵许多有囊膜的核衣壳形成多角体为特征;苜蓿尺蠖核多角体病毒(AcNPV)和家蚕核多角体病毒(BmNPV)分别为多粒包埋型和单粒包埋型为代表种,B
文摘胆固醇氧化酶在医药检测、食品加工、农业生产等方面都有重要的应用价值。以来源于Rhodococcus sp.的胆固醇氧化酶基因为研究对象,构建于温控表达载体p Hsh上,免去了诱导剂的使用,采用温度调控使胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中成功表达。在摇瓶水平对酶的表达量进行优化,最终的酶量为855 U/L。使用镍柱将酶纯化,得到单一条带,相对分子质量约为55 k Da。分析其酶学性质,最适p H 7.0,在p H 5.0～7.0稳定;最适反应温度40℃,在50℃保温,其半衰期为6.9 min。以胆固醇为底物,在p H 7.5、37℃条件下测酶活,计算得动力学参数K_m为3.38 mmol/L,k_（cat）/K_m为6.09 s-1·（mmol/L）。
文摘【目的】研究旨在对努比亚山羊大脑富集Ras同源物(Ras homolog enriched in brain,Rheb)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体,为进一步揭示Rheb对努比亚山羊骨骼肌调控的分子机理奠定基础。【方法】试验采用RT-PCR方法从努比亚山羊背最长肌组织中扩增Rheb基因,经琼脂糖凝胶电泳及测序验证正确后进行生物信息学分析,同时构建该基因真核表达载体,转染细胞后进行实时荧光定量PCR检测来验证所构建载体的正确性。【结果】努比亚山羊Rheb基因编码区序列长度为555 bp,编码184个氨基酸,Rheb蛋白分子式为C 910 H 1456 N 236 O 279 S 6,分子质量为20359.34 u,原子总数为2887,理论等电点为5.93。Rheb蛋白属于稳定的亲水性蛋白,不包含跨膜结构域。蛋白二级结构预测结果显示,努比亚山羊Rheb蛋白中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲分别占40.76%、7.07%、22.83%和29.35%。构建的真核表达载体pcDNA3.1-Rheb转染山羊骨骼肌细胞后,与空载体组相比,Rheb基因表达量极显著升高(P<0.01)。【结论】本试验成功克隆努比亚山羊Rheb基因编码区序列,并构建pcDNA3.1-Rheb真核表达载体,这为深入理解Rheb基因在努比亚山羊肌肉中的作用提供了理论支持。
文摘【目的】试验旨在探究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,CEBPA)基因在如皋黄鸡中的生物学特征、组织表达水平,并构建其表达载体。【方法】对如皋黄鸡CEBPA基因CDS区进行克隆并测序,与其他物种进行相似性比对及系统进化树构建,通过生物信息学软件对如皋黄鸡CEBPA蛋白的理化性质、磷酸化位点、糖基化位点、功能结构域、互作蛋白及二级结构、三级结构进行预测。利用实时荧光定量PCR技术检测CEBPA基因在如皋黄鸡心脏、肝脏、肺脏、肾脏、十二指肠、空肠、腺胃、肌肉、睾丸中的表达情况。构建CEBPA基因过表达(OE-CEBPA)和干扰载体(CEBPA-sh12,CEBPA-sh167,CEBPA-sh727),并检测各载体活性。【结果】如皋黄鸡CEBPA基因CDS区序列全长975 bp,共编码324个氨基酸。相似性比对结果显示,如皋黄鸡与日本鹌鹑、鸿雁、野鸽、野鸭的CEBPA氨基酸序列相似性均>94%,其中与日本鹌鹑的相似性最高,达99.4%;系统进化树结果表明,如皋黄鸡与日本鹌鹑的亲缘关系较近,与哺乳动物的亲缘关系较远。如皋黄鸡CEBPA蛋白为亲水不稳定蛋白,存在25个磷酸化位点,含9个N-糖基化位点和109个O-糖基化位点;CEBPA蛋白具有1个转录激活区和1个与DNA结合的亮氨酸拉链结构bZIP;如皋黄鸡CEBPA蛋白二级结构主要由193个无规则卷曲、93个α-螺旋、25个延伸链和13个β-转角组成,三级结构预测结果与二级结构基本一致;CEBPA蛋白主要与TRIB1、PPARG、RXRA、MAPK9、MAPK10、JUN、ESR1等蛋白互作。CEBPA基因在如皋黄鸡各组织中均有表达,其中以肝脏中表达量最高。成功构建CEBPA过表达载体和3个干扰载体,将它们分别转染至鸡成纤维细胞,与对照组相比,过表达组(OE-CEBPA)CEBPA基因表达量显著升高(P<0.05),干扰组(CEBPA-sh167)CEBPA基因表达量显著下降(P<0.05)。【结论】试验获得如皋黄鸡CEBPA基因完整CDS区并成功构建与筛选出具有过表达/干扰活性最佳的鸡CEBPA表达载体,该基因在如皋黄鸡各组织中广泛表达,其中以肝脏中相对表达量较高。结果为进一步研究鸡CEBPA的功能提供了参考依据。
