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工程化生长转化因子β3促进软骨前体细胞向软骨分化的实验研究
被引量：
4
1
作者
郑东
杨述华
+3 位作者
冯勇
唐欣
梅荣成
徐亮
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期558-561,572,F0002,共6页
目的:构建LAP(latency associated peptide in TGF-beta,LAP)为潜伏作用,MMP(matrix metalloproteinase,MMP)酶切位点为导向作用,TGF-β3活性部分为治疗作用的具有靶向治疗功能的工程化TGF-β3蛋白,并转染软骨膜来源的软骨前体细胞(chon...
目的:构建LAP(latency associated peptide in TGF-beta,LAP)为潜伏作用,MMP(matrix metalloproteinase,MMP)酶切位点为导向作用,TGF-β3活性部分为治疗作用的具有靶向治疗功能的工程化TGF-β3蛋白,并转染软骨膜来源的软骨前体细胞(chondrogenic progenitor cells,CPCs),检验其特异性的靶向治疗作用。方法:将人工合成的编码MMP酶切位点氨基酸的正反义DNA序列经基因重组定向克隆插入真核表达载体pIRES-EGFP中,之后将大鼠的TGF-β3的LAP段和TGF-β3的活性片断(mature TGF-β3,mTGF-β3),分别插入到MMP的上游和下游,获pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3重组质粒。然后将其转染入软骨膜来源的CPCs,将转染后的CPCs在有MMP-1和无MMP-1的条件下进行球团培养,并分别检测胶原Ⅱ(COLⅡ),Aggrecan(Agc)和TIMP的表达。结果:经过测序和酶切鉴定,成功构建了pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3质粒,转染CPCs后,只有MMP酶存在的条件下才能有效的促进CPCs向软骨分化和软骨基质的合成。结论:通过基因工程构建的工程化TGF-β3具有靶向性促进软骨前体细胞修复软骨的应用前景。
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关键词
工程化蛋白
软骨前体细胞
基因克隆
生长转化因子β3
软骨
分化
软骨
修复
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职称材料
白藜芦醇促进软骨细胞肥大化的作用机制研究
被引量：
1
2
作者
唐翔宇
曹震
+1 位作者
董世武
武继民
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1392-1397,共6页
目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对软骨前体细胞ATDC5肥大化的影响及其可能机制。方法通过CCK-8法研究不同浓度RES对ATDC5细胞活性的影响。建立软骨肥大化诱导体系,根据活性实验的安全浓度,设立对照组(0μmol/L)和RES组(1μmol/L)。q...
目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对软骨前体细胞ATDC5肥大化的影响及其可能机制。方法通过CCK-8法研究不同浓度RES对ATDC5细胞活性的影响。建立软骨肥大化诱导体系,根据活性实验的安全浓度,设立对照组(0μmol/L)和RES组(1μmol/L)。qRT-PCR和Western blot法确定肥大化相关因子RUNX2、MMP13和COLX表达变化;甲苯胺蓝和免疫组化分析细胞外基质粘多糖及COLX、RUNX2表达;利用qRT-PCR检测软骨细胞肥大化经典通路WNT、IHH和FGF中相关因子的表达变化。结果 RES安全使用浓度为1μmol/L;与对照组相比,在肥大化诱导14 d后,RES组ATDC5细胞肥大化水平明显提升;RES组肥大化相关基因表达量在3、7、14 d时明显增加;WNT和IHH途径中促肥大化因子β-catenin和GLI2的表达水平在RES组较对照组升高,而GLI3表达水平下降。FGF途径中PI3K的表达水平较对照组没有变化。结论 RES通过激活β-catenin及GLI2,抑制GLI3,促进RUNX2表达,实现促进ATDC5肥大化的目的。
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关键词
软骨前体细胞
白藜芦醇
肥大化
软骨
内成骨
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职称材料
题名
工程化生长转化因子β3促进软骨前体细胞向软骨分化的实验研究
被引量：
4
1
作者
郑东
杨述华
冯勇
唐欣
梅荣成
徐亮
机构
华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期558-561,572,F0002,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30471753)
文摘
目的:构建LAP(latency associated peptide in TGF-beta,LAP)为潜伏作用,MMP(matrix metalloproteinase,MMP)酶切位点为导向作用,TGF-β3活性部分为治疗作用的具有靶向治疗功能的工程化TGF-β3蛋白,并转染软骨膜来源的软骨前体细胞(chondrogenic progenitor cells,CPCs),检验其特异性的靶向治疗作用。方法:将人工合成的编码MMP酶切位点氨基酸的正反义DNA序列经基因重组定向克隆插入真核表达载体pIRES-EGFP中,之后将大鼠的TGF-β3的LAP段和TGF-β3的活性片断(mature TGF-β3,mTGF-β3),分别插入到MMP的上游和下游,获pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3重组质粒。然后将其转染入软骨膜来源的CPCs,将转染后的CPCs在有MMP-1和无MMP-1的条件下进行球团培养,并分别检测胶原Ⅱ(COLⅡ),Aggrecan(Agc)和TIMP的表达。结果:经过测序和酶切鉴定,成功构建了pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3质粒,转染CPCs后,只有MMP酶存在的条件下才能有效的促进CPCs向软骨分化和软骨基质的合成。结论:通过基因工程构建的工程化TGF-β3具有靶向性促进软骨前体细胞修复软骨的应用前景。
关键词
工程化蛋白
软骨前体细胞
基因克隆
生长转化因子β3
软骨
分化
软骨
修复
Keywords
engineering protein
chondrogenic progenitor cells
gene clone
transforming growth factor-β3
chondrogenesis
repair of cartilage
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
R322.71 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
白藜芦醇促进软骨细胞肥大化的作用机制研究
被引量：
1
2
作者
唐翔宇
曹震
董世武
武继民
机构
军事医学科学院卫生装备研究所
第三军医大学生物医学工程学院生物医学材料学教研室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1392-1397,共6页
基金
国家自然科学基金面上项目(30970724
31271007)
天津市自然科学基金(13JCZDJC33400)~~
文摘
目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对软骨前体细胞ATDC5肥大化的影响及其可能机制。方法通过CCK-8法研究不同浓度RES对ATDC5细胞活性的影响。建立软骨肥大化诱导体系,根据活性实验的安全浓度,设立对照组(0μmol/L)和RES组(1μmol/L)。qRT-PCR和Western blot法确定肥大化相关因子RUNX2、MMP13和COLX表达变化;甲苯胺蓝和免疫组化分析细胞外基质粘多糖及COLX、RUNX2表达;利用qRT-PCR检测软骨细胞肥大化经典通路WNT、IHH和FGF中相关因子的表达变化。结果 RES安全使用浓度为1μmol/L;与对照组相比,在肥大化诱导14 d后,RES组ATDC5细胞肥大化水平明显提升;RES组肥大化相关基因表达量在3、7、14 d时明显增加;WNT和IHH途径中促肥大化因子β-catenin和GLI2的表达水平在RES组较对照组升高,而GLI3表达水平下降。FGF途径中PI3K的表达水平较对照组没有变化。结论 RES通过激活β-catenin及GLI2,抑制GLI3,促进RUNX2表达,实现促进ATDC5肥大化的目的。
关键词
软骨前体细胞
白藜芦醇
肥大化
软骨
内成骨
Keywords
pre-chondrocyte cells
resveratrol
hypertrophy
endochondral ossification
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
R322.71 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
工程化生长转化因子β3促进软骨前体细胞向软骨分化的实验研究
郑东
杨述华
冯勇
唐欣
梅荣成
徐亮
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
白藜芦醇促进软骨细胞肥大化的作用机制研究
唐翔宇
曹震
董世武
武继民
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
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