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靶向转酮醇酶样基因1 siRNA表达载体的构建及鉴定 被引量:3
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作者 张德太 杨菊红 +1 位作者 胡丽华 蔡鹏程 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期128-130,共3页
目的构建针对转酮醇酶样基因1(TKTL1)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其沉默效应。方法采用人U6 SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的TKTL1靶序列的反向重复序列,置于pEGFP-C1-U6质粒载体中,构建成TKTL1短发夹环R... 目的构建针对转酮醇酶样基因1(TKTL1)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其沉默效应。方法采用人U6 SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的TKTL1靶序列的反向重复序列,置于pEGFP-C1-U6质粒载体中,构建成TKTL1短发夹环RNA,产生重组质粒pEGFP-C1-U6/TKTL1,分别用PstⅠ和SalⅠ酶切鉴定及测序分析,并将重组质粒转染人结肠癌细胞株LoVo,通过RT-PCR检测TKTL1基因表达水平的变化。结果酶切鉴定与DNA测序分析证明,TKTL1基因的siRNA表达载体构建正确,RT-PCR结果表明转染重组质粒的LoVo细胞TKTL1基因的表达水平明显降低。结论成功构建了针对TKTL1基因的siRNA表达载体,转染LoVo细胞后可显著抑制TKTL1基因表达。 展开更多
关键词 SIRNA 转酮醇酶样基因1 人结肠癌细胞株LoVo
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喉癌组织异黏蛋白、转酮醇酶样基因1表达量与肿瘤标志物含量的相关性及对细胞增殖活力的影响 被引量:9
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作者 沈敏 周茂林 姜义道 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2018年第6期289-292,共4页
目的研究异黏蛋白(Metadherin,MTDH)、转酮醇酶样基因1(transketolase Like Protein 1,TKTL1)在喉癌组织中的表达及其与相关肿瘤标志物及癌细胞增殖活力的相关性。方法选取2013年1月~2016年12月于我科治疗的70例确诊为喉鳞状细胞癌(简... 目的研究异黏蛋白(Metadherin,MTDH)、转酮醇酶样基因1(transketolase Like Protein 1,TKTL1)在喉癌组织中的表达及其与相关肿瘤标志物及癌细胞增殖活力的相关性。方法选取2013年1月~2016年12月于我科治疗的70例确诊为喉鳞状细胞癌(简称喉癌组)患者为研究对象,另选70例同期于我院诊断为声带息肉患者为对照组,测定癌组织和息肉组织中MTDH、TKTL1的阳性表达率及MTDH、TKTL1的mRNA表达量,检测两组患者血清鳞状细胞癌抗原(squamous cell carcinoma related antigen,SCCAg)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖类抗原199(carbohydrate antigen,CA199)含量,检测组织中癌基因信号传导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription,STAT3)、原癌基因c-myc的mRNA含量,采用Pearson法检测MTDH、TKTL1与血清SCCAg、CEA、CA199及STAT3、c-myc表达量的相关性。结果喉癌组织中MTDH与TKTL1阳性率分别为58.57%、64.29%,均高于对照组的20%、12.86%(P均<0.01)。喉癌组MTDH与TKTL1的mRNA表达量分别为1.78±0.45、1.97±0.62,均显著高于对照组的0.19±0.03、0.21±0.07(P均<0.01);喉癌组的血清肿瘤标志物SCCAg、CEA、CA199水平分别为6.75±2.74、9.36±2.73、31.54±10.36,显著高于对照组的1.34±0.83、3.21±1.36、12.42±4.13(P均<0.01);喉癌组织中的STAT3、c-myc mRNA表达量分别为2.36±0.75、1.99±0.51,显著高于对照组的0.67±0.12、0.71±0.15(P均<0.01)。M T DH、T KT L1表达量与血清SCCAg、CEA、CA199含量及STAT3、c-myc均呈正相关。结论 MTDH、TKTL1在喉癌组织中的表达显著增加,与癌症发生发展密切相关,且与肿瘤标志物、促癌基因的表达呈正相关,有促进癌细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 鳞状细胞 细胞增殖 肿瘤标志物 异黏蛋白 转酮醇酶样基因1
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共转染小干扰RNA质粒联合抑制HeLa细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和转酮醇酶样基因-1表达 被引量:2
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作者 张德太 杨文 +2 位作者 涂启明 张科 胡丽华 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第11期1156-1160,共5页
目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)及转酮醇酶样基因-1(transketolase like-1,TKTL-1)是肿瘤细胞磷酸戊糖代谢途径(pentose phosphate pathway,PPP)的2个重要关键调节酶。拟通过共转染小干扰RNA(small i... 目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)及转酮醇酶样基因-1(transketolase like-1,TKTL-1)是肿瘤细胞磷酸戊糖代谢途径(pentose phosphate pathway,PPP)的2个重要关键调节酶。拟通过共转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体同时沉默人宫颈癌Hela G6PD及TKTL-1后,观察其对G6PD和TKTL1的联合抑制作用,旨在探讨共转染siRNA表达载体联合抑制PPP的效果及可行性。方法分别构建靶向G6PD和TKTL1基因siRNA干扰质粒载体,通过酶切和测序鉴定siRNA干扰质粒载体构建成功后,单独或共转染HeLa细胞株,RT-PCR检测G6PD、TKTL1 mRNA表达并结合G6PD、转酮醇酶(transketolase,TKT)活性测定判断并比较共转染联合抑制Hela细胞G6PD、TKTL1表达的效果。结果共转染靶向G6PD和TKTL1基因的siRNA干扰载体能显著下调G6PD和TKTL1基因表达水平[(0.96±0.05)vs(0.47±0.04),(0.98±0.05)vs(0.41±0.04),P<0.01]。同时,2个酶的活性也显著下降(99.2%vs34.5%和99.8%vs 40.1%,P<0.01)。共转染抑制G6PD基因mRNA表达较单独转染靶向G6PD基因的siRNA干扰载体的效果有显著下降[(0.47±0.04)vs(0.31±0.04),P<0.01)]。结论共转染siRNA干扰载体对人宫颈癌HeLa细胞PPP代谢通路进行联合抑制是一种有效的实验方案。 展开更多
关键词 小干扰RNA 基因-1 葡萄糖-6-磷酸脱氢 HELA细胞
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