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表达NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的构建 被引量:2
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作者 苏春霞 张彦明 +2 位作者 张雪莲 徐学清 陈溥言 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第1期1-4,共4页
 将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp...  将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp的下游,最后将包含gB启动子和F基因表达盒3500bp克隆到包含MDVCVI988非必须片段US10的载体SK中。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的MDVCVI988重组病毒奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 马立克氏病病毒CVI988转移质粒载体
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含NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的真核表达
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作者 苏春霞 苏鑫铭 +3 位作者 张彦明 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第5期59-62,共4页
为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移... 为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移质粒载体已经进入细胞DNA;转染转移质粒载体 pUS10F后的293 T细胞所表达的NDV F基因产物抗原性较好,能够与抗NDV的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:DNA 3μg/mL,转染后48 h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以 2×105/孔和1×101/孔的转染效果最好。 展开更多
关键词 畜禽疫病 新城疫病毒 F基因 马立克氏病病毒CVI988转移质粒载体
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亚抑菌浓度万古霉素对质粒接合转移的促进作用
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作者 游祖姣 曾福鑫 +1 位作者 王志强 肖霞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期78-85,共8页
为了分析亚抑菌浓度万古霉素对质粒接合转移的影响,本试验建立了以大肠杆菌(E.coli)J53作为受体菌,携带RP4-7质粒的E.coli DH5α和携带mcr-1阳性IncI2质粒的临床菌株E.coli LD67-1为供体菌的接合转移模型,测定亚抑菌浓度的万古霉素对接... 为了分析亚抑菌浓度万古霉素对质粒接合转移的影响,本试验建立了以大肠杆菌(E.coli)J53作为受体菌,携带RP4-7质粒的E.coli DH5α和携带mcr-1阳性IncI2质粒的临床菌株E.coli LD67-1为供体菌的接合转移模型,测定亚抑菌浓度的万古霉素对接合转移的影响,并通过细胞膜通透性检测、扫描电子显微镜观察、活性氧(ROS)检测和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法探究其内在机制。结果显示,与空白对照组相比,亚抑菌浓度万古霉素可显著提高RP4-7质粒和mcr-1阳性IncI2质粒的接合转移频率(P<0.05);N-苯基-1-萘胺(NPN)和碘化丙啶(PI)探针检测显示,亚抑菌浓度万古霉素可使受体菌细胞内、外膜通透性增加,供体菌细胞外膜通透性增加;扫描电子显微镜观察显示,经1/4最小抑菌浓度(MIC)万古霉素处理后接合细菌细胞膜发生损伤;ROS检测结果显示,与空白对照组相比,虽然经1/4 MIC万古霉素处理的受体菌的ROS表达水平显著上调(P<0.05),但1/8 MIC万古霉素处理后,供体菌和受体菌的ROS水平均无显著变化(P>0.05);RT-qPCR结果显示,与空白对照组相比,亚抑菌浓度万古霉素显著上调了供体菌和受体菌的孔蛋白基因ompF和ompC的mRNA表达水平(P<0.05),极显著上调了trbBp基因(调控细菌间形成“连接桥”)的mRNA表达水平(P<0.01),显著上调了细菌SOS响应(SOS response)相关基因recA、recN、ruvA和lexA的mRNA表达水平(P<0.05)。结果表明,亚抑菌浓度的万古霉素可能通过提高细菌细胞膜通透性,触发SOS响应,促进接合转移“连接桥”形成等方式促进RP4-7质粒和mcr-1阳性IncI2质粒的接合转移过程。 展开更多
关键词 亚抑菌浓度 万古霉素 质粒接合转移 mcr-1
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大黄鱼病原弧菌耐药质粒转移研究 被引量:6
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作者 鄢庆枇 方恩华 +2 位作者 苏永全 王军 庄峙厦 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期44-49,共6页
用混合培养法进行耐药质粒从大肠杆菌 (Escherichiacoli)向病原弧菌转移研究 ,结果表明 ,耐药质粒 pBR322和 pBR325可以从大肠杆菌向病原弧菌转移。在混合培养30min后 ,部分弧菌获得耐药质粒 ,质粒的转化率随着培养时间的延长而增大 ;... 用混合培养法进行耐药质粒从大肠杆菌 (Escherichiacoli)向病原弧菌转移研究 ,结果表明 ,耐药质粒 pBR322和 pBR325可以从大肠杆菌向病原弧菌转移。在混合培养30min后 ,部分弧菌获得耐药质粒 ,质粒的转化率随着培养时间的延长而增大 ;混合培养24h后 ,转化率分别提高至4.62×10-6~1.18×10-5。耐药质粒 pBR322和 pBR325在2株病原弧菌细胞内能较为稳定地遗传 ,在培养初期 (0~1h) ,均未出现质粒丢失 ,随着培养时间的延长 ,有少量细胞因丢失耐药质粒而表现出对药物的敏感性 ;培养72h后 ,质粒 pBR322和 pBR325在副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)中的丢失率分别为10 %和9% ,溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)中2种质粒的丢失率分别为22%和19 %。细菌的药敏试验表明不同菌株在获得耐药质粒后对特定药物的抗性大大增强 ,但不同菌株的耐药水平有所不同 ,说明耐药质粒在不同菌株中的表达水平有所不同。 展开更多
关键词 大黄鱼 病原弧菌 耐药质粒 溶藻弧菌 副溶血弧菌 质粒转移 药物 菌株
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含LacZ报告基因的传染性喉气管炎病毒TK基因转移载体质粒的构建 被引量:1
5
作者 吴红专 刘福安 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期262-266,共5页
在传染性喉气管炎病毒(ILTV)北京E2株TK基因克隆、鉴定的基础上[1],进一步构建转移载体质粒,为ILTVTK基因缺失毒株的构建作准备,先用PstI将pSVgal线性化,再经EcoRI不完全酶切,分离含SV40... 在传染性喉气管炎病毒(ILTV)北京E2株TK基因克隆、鉴定的基础上[1],进一步构建转移载体质粒,为ILTVTK基因缺失毒株的构建作准备,先用PstI将pSVgal线性化,再经EcoRI不完全酶切,分离含SV40立即早期启动子和增强子的42Kb的LacZ报告基因片段,并用Klenow大片段补平,将克隆TK基因的载体pTK用SnaBI处理,后用T4DNA连接酶将以上两个片段平端连接成重组质粒,转化JM109,在Xgal、IPTG、Amp、LB平板上筛选蓝色菌落,经琼脂糖凝胶电泳筛选到12个阳性重组子,命名为pPTK,用pstI和HindII单酶切都得到了分子量为813Kb的质粒,进一步用狄高辛标记LacZ基因片段作探针对pPTK进行打点杂交,结果均成阳性,证明了LacZ基因已插入了pTK,脂质体转染法也得到了蓝斑病毒,结果表明我们已成功构建了转移载体质粒pPTK。 展开更多
关键词 传染性 喉气管炎病毒 TK基因 转移载体质粒 ILTV
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枯草杆菌和乳链球菌间质粒转移
6
作者 Mario Bazgori 胡尚勤 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1990年第Z1期149-151,共3页
往复性质粒PGK_(12)以及几种金黄色葡萄球菌质粒通过与枯草杆菌属间原生质体融合而引入到乳链球菌中,金黄色葡萄球菌质粒乳链球菌是稳定遗传的,所以,它们完全可以在乳链球菌中用作无性系载体。
关键词 乳链球菌 质粒转移 金黄色葡萄球菌 原生质体融合 稳定遗传 无性系 厌氧生活 基因转移 芽抱杆菌 细菌菌株
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豌豆根瘤菌共生质粒pJB5JI对费氏中华根瘤菌共生固氮作用的影响 被引量:2
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作者 杨成运 樊剑鸣 +1 位作者 张书杰 周俊初 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期462-467,共6页
通过两亲本接合转移,将豌豆根瘤菌T83K3共生质粒pJB5JI转入费氏中华根瘤菌HN01及其质粒缺失突变株中,获得8个转移接合子,其中受体为HN01和pSfrHN01a缺失突变株HND28的接合子能够在大豆上形成有效根瘤,无论是人工传代还是与植物共生,外... 通过两亲本接合转移,将豌豆根瘤菌T83K3共生质粒pJB5JI转入费氏中华根瘤菌HN01及其质粒缺失突变株中,获得8个转移接合子,其中受体为HN01和pSfrHN01a缺失突变株HND28的接合子能够在大豆上形成有效根瘤,无论是人工传代还是与植物共生,外源质粒pJB5JI与受体菌内源质粒均能稳定存在,但不能在豌豆上结瘤,与大豆共生固氮能力和竞争结瘤能力与受体菌亲本相比没有明显变化.消除共生质粒的突变株HND29和共生质粒与pSfrHN01a质粒均消除的突变株HND100作受体菌的接合子,既不能在大豆上结瘤,也不能在豌豆上结瘤.研究结果表明,pJB5JI与HN01的3个质粒属于不同的不相容群.pJB5JI在HN01中的表达功能可能受到受体菌的共生质粒和染色体基因的共同影响. 展开更多
关键词 共生质粒 费氏中华根瘤菌 pJB5JI 质粒转移
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1984年度国际细菌质粒会议在美国举行
8
《微生物学杂志》 CAS 1984年第1期27-27,共1页
1984年5月14日至5月18日在美国伊利诺斯州厄巴拉举行这次学术讨论会。这次会议特邀请世界各国从事这方面研究的著名科学家,其中有美国、英国、苏联、瑞士、西德、日本、法国、荷兰、中国、瑞典、以色列、苏格兰、澳大利亚、比利时等国... 1984年5月14日至5月18日在美国伊利诺斯州厄巴拉举行这次学术讨论会。这次会议特邀请世界各国从事这方面研究的著名科学家,其中有美国、英国、苏联、瑞士、西德、日本、法国、荷兰、中国、瑞典、以色列、苏格兰、澳大利亚、比利时等国家的学者出席。会议进程:头一天全体大会(主席I.G.Gunsalus,英国)。 展开更多
关键词 细菌质粒 质粒转移 美国 美利坚合众国 北美洲 会议 苏格兰 学术讨论会
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通过胚电泳转移基因
9
作者 李思经 《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第1期17-17,共1页
美国农业部花卉与苗圃作物实验室的 R.J.Griesbach 开发了一种直接把基因转移给植物的新方法。此方法是将植物胚顶端的分生组织暴露在有电场的外源 DNA 里,把含有0.3%琼脂糖的吸管和含有 DNA的乙酸缓冲液置于带顶端分生组织的胚一端,而... 美国农业部花卉与苗圃作物实验室的 R.J.Griesbach 开发了一种直接把基因转移给植物的新方法。此方法是将植物胚顶端的分生组织暴露在有电场的外源 DNA 里,把含有0.3%琼脂糖的吸管和含有 DNA的乙酸缓冲液置于带顶端分生组织的胚一端,而另一端与仅含缓冲液和琼脂糖的吸管连接,通过电流而产生 DNA 摄取。Griesbach 利用这种胚电泳系统把含有 GUS 标记基因的质粒转移到了虾脊兰胚的顶端分生组织里, 展开更多
关键词 顶端分生组织 虾脊兰 质粒转移 种胚 转移基因 美国农业部 琼脂糖 基因转移 标记基因 DNA
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转基因动物中慢病毒载体包装的优化
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作者 谭碧君 《上海畜牧兽医通讯》 2008年第2期15-16,共2页
慢病毒载体作为基因治疗载体发展起来,现已用于转基因动物制备。本实验用磷酸钙沉淀法将转移质粒(pCCL-hCMV-eGFP)、包装质粒(pCMVΔR8.9)、包膜蛋白质粒(pMDG(VSV-G))三质粒共转染来源于人胚肾细胞系的包装细胞—293T,转染48h后收集病... 慢病毒载体作为基因治疗载体发展起来,现已用于转基因动物制备。本实验用磷酸钙沉淀法将转移质粒(pCCL-hCMV-eGFP)、包装质粒(pCMVΔR8.9)、包膜蛋白质粒(pMDG(VSV-G))三质粒共转染来源于人胚肾细胞系的包装细胞—293T,转染48h后收集病毒上清,采用6孔板培养感染细胞,荧光显微镜计数EGFP阳性细胞法测定病毒滴度。载体滴度达2×107TU/ml左右。 展开更多
关键词 慢病毒载体 转基因动物 磷酸钙沉淀法 转移质粒 包装质粒 包膜蛋白质粒
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杀伤啤酒酵母的构建及其发酵性能研究 被引量:5
11
作者 王正祥 诸葛健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期1-6,共6页
运用原生质体融合及罕见交配法构建了一批具有杀伤性能之啤酒酵母。其中kSC-2m-2,KSC-2f-11具有与亲株相似的发酵性能。所生产的嫩啤酒经三杯品评未见明显差异,嫩啤酒杀菌活性在4℃下可维持4周以上,混合发酵试验表明,杀伤啤酒酵母可有... 运用原生质体融合及罕见交配法构建了一批具有杀伤性能之啤酒酵母。其中kSC-2m-2,KSC-2f-11具有与亲株相似的发酵性能。所生产的嫩啤酒经三杯品评未见明显差异,嫩啤酒杀菌活性在4℃下可维持4周以上,混合发酵试验表明,杀伤啤酒酵母可有效地防止野生酵母的污染。实验中同时发现大部分胞质融合株代谢性能改变。 展开更多
关键词 啤酒 酵母 杀伤质粒转移 发酵
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抗菌剂对大肠杆菌浓度依赖的联合耐药效应 被引量:2
12
作者 童丹青 孙昊宇 +3 位作者 张玉莲 王佳俊 唐量 吴明红 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第6期3194-3202,共9页
选择磺胺增效剂(SAPs)、纳米银(AgNPs)以及磺胺(SAs)3类常用抗菌剂,研究了SAPs-AgNPs、SAPs-AgNPs-SAs对大肠杆菌(E.coli)的联合耐药效应,利用突变单位法(MU)和质粒接合转移单位法(CTU)判别了混合抗菌剂在不同浓度下的联合耐药作用模式... 选择磺胺增效剂(SAPs)、纳米银(AgNPs)以及磺胺(SAs)3类常用抗菌剂,研究了SAPs-AgNPs、SAPs-AgNPs-SAs对大肠杆菌(E.coli)的联合耐药效应,利用突变单位法(MU)和质粒接合转移单位法(CTU)判别了混合抗菌剂在不同浓度下的联合耐药作用模式.结果表明,3组SAPs-AgNPs和9组SAPs-AgNPs-SAs表现出浓度依赖的联合耐药效应,即对E.coli突变促进效应的联合作用模式主要表现为拮抗,对E.coli质粒接合转移促进效应的联合作用模式随浓度由拮抗变为协同,推测这与抗菌剂的作用机制有关.较单一抗菌剂,SAPs-AgNPs、SAPs-AgNPs-SAs混合抗菌剂在低浓度时降低了细菌耐药性风险,在高浓度时降低了抗性基因(ARGs)的产生风险但增加了ARGs的传播风险. 展开更多
关键词 混合抗菌剂 浓度依赖 突变 质粒接合转移 联合耐药效应
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具有杀伤能力之啤酒酵母的选育 被引量:1
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作者 王正祥 诸葛健 《无锡轻工业学院学报》 CSCD 1992年第3期217-222,共6页
运用原生质体融合技术成功地将杀伤质粒转入啤酒酵母中,并使其能十分稳定地表达杀伤性能。经发酵试验确认胞质融合株kSC-2_f-11具有与亲株相似的发酵性能。所生产出的嫩啤酒与亲株相似且能保持较长时间的杀菌活力。
关键词 杀伤质粒转移 啤酒 酵母 选育
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蜡样芽胞杆菌族毒素研究进展 被引量:2
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作者 郑庆芳 王东澍 +2 位作者 吕宇飞 王恒樑 刘先凯 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2021年第6期75-82,共8页
蜡样芽胞杆菌族(Bacillus cereus sensu lato)包括几个具有密切系统发育关系的芽胞杆菌物种,产生的毒素种类繁多,备受人们关注。质粒在菌株中的水平转移,会改变其表型、致病性和毒力,同时也带来分类的问题。通过综述几种蜡样芽胞杆菌毒... 蜡样芽胞杆菌族(Bacillus cereus sensu lato)包括几个具有密切系统发育关系的芽胞杆菌物种,产生的毒素种类繁多,备受人们关注。质粒在菌株中的水平转移,会改变其表型、致病性和毒力,同时也带来分类的问题。通过综述几种蜡样芽胞杆菌毒素的结构特性、作用机制及其危害或生物应用,从质粒水平转移的角度介绍蜡样芽胞杆菌族成员错综复杂的关系。 展开更多
关键词 蜡样芽胞杆菌族 炭疽毒素 肠毒素 呕吐毒素 Cry毒素 致病机制 质粒水平转移
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生物固氮
15
《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第3期55-56,共2页
关键词 质粒转移 豌豆根瘤菌 结瘤 田桂英 大豆根 固氮酶活性 大豆基因 共生固氮 大豆植株 克隆位点
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生物固氮
16
《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第6期89-91,共3页
巴西固氮螺菌((Azospirillumbrasiliense)菌株B25含有两个质粒,pAbl和pAb2(分别为90和120 MDa), pAbl有6个Eco R I位点,pAb2没有.用两种方法鉴定这两个质粒:(Ⅰ)单个或一起将质粒转移到大肠杆菌中,并检测对受体表型的影响,(II)分别删除... 巴西固氮螺菌((Azospirillumbrasiliense)菌株B25含有两个质粒,pAbl和pAb2(分别为90和120 MDa), pAbl有6个Eco R I位点,pAb2没有.用两种方法鉴定这两个质粒:(Ⅰ)单个或一起将质粒转移到大肠杆菌中,并检测对受体表型的影响,(II)分别删除每个质粒。 展开更多
关键词 质粒转移 固氮酶 螺菌 共生固氮作用 田桂英 固氮细菌 牛角花 豆科植物 共生基因 固氮微生物
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植物生物技术的十年
17
作者 Jan Leemans 李思经 《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第9期5-8,共4页
在1983年1月于迈阿密召开的"植物和动物分子遗传学"冬季研讨会上,以比利时 Gent 大学 MarcVan Montagu 和 Jeff Schell 为首以及孟山都公司以 Rob Frally 为首的研究小组提交了三篇文章,这标志着植物遗传工程的开始。他们把... 在1983年1月于迈阿密召开的"植物和动物分子遗传学"冬季研讨会上,以比利时 Gent 大学 MarcVan Montagu 和 Jeff Schell 为首以及孟山都公司以 Rob Frally 为首的研究小组提交了三篇文章,这标志着植物遗传工程的开始。他们把根癌土壤杆菌(一种能转移部分 Ti 质粒—称之为 T-DNA—的细菌)中的脱毒 Ti 质粒转移到了植物基因组。从该 T-DNA 区除去致冠瘿病的基因而保留完整的转移机制。 展开更多
关键词 植物基因组 根癌土壤杆菌 植物生物技术 质粒转移 孟山都公司 冠瘿 转移 选择标记 DNA 拟南芥基因组
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冀东56株仔猪白痢大肠艾希氏杆菌对14种抗菌类药物的敏感性检测报告
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作者 裴桂有 张国琴 张建文 《现代畜牧兽医》 1989年第3期23-25,共3页
由某些特定血清型别的大肠艾希氏杆菌所引起的仔猪白痢病,对养猪生产危害较大。尽管一些抗菌类药物可以有效地控制本病,但由于大肠艾希氏杆菌很易产生耐药性,特别是目前存在滥用抗菌类药物的倾向,使临床耐药菌株日益增多,并可通过质粒... 由某些特定血清型别的大肠艾希氏杆菌所引起的仔猪白痢病,对养猪生产危害较大。尽管一些抗菌类药物可以有效地控制本病,但由于大肠艾希氏杆菌很易产生耐药性,特别是目前存在滥用抗菌类药物的倾向,使临床耐药菌株日益增多,并可通过质粒转移不断蔓延扩大。 展开更多
关键词 艾希 抗菌类药物 血清型鉴定 冀东地区 临床耐药 敏感性检测 质粒转移 先锋霉素 白痢病 药物敏感性
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