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小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较
被引量:
2
1
作者
辛颖
张志强
+3 位作者
安宁
张涛
张建峰
张智英
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期93-100,共8页
本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中,转染48 h后通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细...
本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中,转染48 h后通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细胞的效率.结果显示,脂质体转染效率最高仅为8.64%,不能满足对精原干细胞进一步实验的要求;电穿孔法效率最高达到25.27%,但转化后细胞大量死亡;腺病毒转染细胞的效率达到了32.4%;慢病毒转染效率最高,达到74.25%.因此,慢病毒转染法是体外转染小鼠精原干细胞的有效方法.
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关键词
精原干细胞(SSCs)
转
染
效率
不同
转染方法
比较
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职称材料
绵羊成纤维细胞OAR-L1高效转染方法的探索
2
作者
吴飞
吴杰
+7 位作者
陈学秋
周静茹
张惠
黄艳
时恒枝
杨怡
马光旭
杜爱芳
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期96-105,共10页
为了在绵羊肺成纤维细胞OAR-L1中高效表达外源蛋白,探索适合该细胞的转染方法,本研究比较了聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)、脂质体2000转染试剂(Lipofectamine^(TM) 2000 transfection reagent,Lipo 2000)、成纤维细胞转染试剂盒(C...
为了在绵羊肺成纤维细胞OAR-L1中高效表达外源蛋白,探索适合该细胞的转染方法,本研究比较了聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)、脂质体2000转染试剂(Lipofectamine^(TM) 2000 transfection reagent,Lipo 2000)、成纤维细胞转染试剂盒(Cytofect^(TM) fibroblast transfection kit,CF2)以及慢病毒介导的细胞转染方法在OAR-L1细胞中表达外源蛋白的效果。结果显示:以pLentiCMV-EGFP-Puro或pLentiCMV-mCherry-Puro荧光质粒转染OAR-L1细胞时,细胞密度和转染试剂用量均可影响PEI、Lipo 2000和CF2介导的细胞转染效率,且三者最佳转染效率均不超过30%,而慢病毒介导的细胞侵染不受细胞密度和病毒液用量的限制,获得的荧光细胞数目也显著高于前三者。包装好的病毒液可以在4或-80℃条件下至少保存15 d而侵染效果不受影响。在OAR-L1细胞中共表达2种外源蛋白时,包装获得的2种慢病毒液等比例混合后再侵染的方式能获得更高的共转率。综上所述,慢病毒侵染是一种能够实现在OAR-L1细胞中高效表达外源蛋白的细胞转染方式,本研究结果为其他难转染细胞系转染方式的选择提供了一定的参考。
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关键词
成纤维细胞OAR-L1
转染方法
慢病毒
绵羊
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职称材料
用转染技术建立巨噬细胞传代株
3
作者
丁桂凤
《北京大学学报(医学版)》
CAS
1986年第4期281-284,共4页
本文报告应用转染技术建立巨噬细胞传代株,探讨应用不同来源的DNA获得具有不同功能特性的巨噬细胞株,应用SV40DNA、C-myc基因,U937DNA和胰岛素基因已获得7株细胞,经鉴定它们均有巨噬细胞的特性,即可分泌胶元酶、溶菌酶,其中有30—40%...
本文报告应用转染技术建立巨噬细胞传代株,探讨应用不同来源的DNA获得具有不同功能特性的巨噬细胞株,应用SV40DNA、C-myc基因,U937DNA和胰岛素基因已获得7株细胞,经鉴定它们均有巨噬细胞的特性,即可分泌胶元酶、溶菌酶,其中有30—40%的细胞带有Fc受体,并有经Fc受体介导的吞噬功能。细胞株内细胞功能各异是因为细胞株尚未克隆化。从本试验结果看不仅经转染方法可获得巨噬细胞株,而且有可能经此法获得B或T淋巴细胞传代株。
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关键词
巨噬细胞
转染方法
红血球
绵羊
DNA
细胞表面
吞噬细胞
红细胞
受体介导
单核细胞因子
转
染
技术
在线阅读
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职称材料
人ehCGβ^+肿瘤小鼠模型的建立
4
作者
王立新
关庆东
+2 位作者
吴瑾
王缨
熊思东
《动物医学进展》
CSCD
2004年第1期76-79,共4页
采用脂质体转染方法将含人 eh CGβ编码基因的重组质粒 pc DNA3 -eh CGβ转染鼠SP2 / 0细胞 ,经 G41 8选择培养和有限稀释培养获得抗性细胞克隆 ,FSCA检测显示 :该抗性细胞的 eh CGβ表达比例高达 84.75%、平均荧光强度达 2 2 .1 2 ;采...
采用脂质体转染方法将含人 eh CGβ编码基因的重组质粒 pc DNA3 -eh CGβ转染鼠SP2 / 0细胞 ,经 G41 8选择培养和有限稀释培养获得抗性细胞克隆 ,FSCA检测显示 :该抗性细胞的 eh CGβ表达比例高达 84.75%、平均荧光强度达 2 2 .1 2 ;采用相同方法获得转 HBV-pre S2 / S编码基因的 Sp2 / 0 -pre S2 / S细胞作为转染无关基因的对照细胞克隆 ,FACS检测发现该细胞表达 pre S2 / S比例为 72 .60 %、平均荧光强度为1 6.80。将不同数量的 Sp2 / 0 -eh CGβ细胞皮下接种 BAL B/ c小鼠 ,结果表明 ,接种 1× 1 0 5及以上Sp2 / 0 -eh CGβ细胞在小鼠体内能形成实体瘤 ,且实体瘤的大小与接种细胞数量呈正相关 (R值为 0 .989)。将相同数量 (5× 1 0 5个细胞 )的 Sp2 /0、Sp2 / 0 -eh CGβ和 Sp2 / 0 -pre S2 / S细胞接种同一只 BAL B/ c小鼠不同部位 ,结果发现 3种肿瘤细胞均在 BAL B/ c小鼠皮下形成了实体瘤 ,比较三组的平均瘤重量无统计学差异 (P >0 .0 5) ,提示外源性 eh CGβ基因的转染不影响Sp2 / 0细胞的致瘤特性。文章建立的人 eh CGβ+肿瘤细胞的荷瘤小鼠模型 ,为研究 eh CGβ+肿瘤细胞的生物学特征、eh
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关键词
人ehCGβ^+肿瘤小鼠模型
模型建立
人绒毛膜促性腺激素
脂质体
转染方法
抗性细胞克隆
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职称材料
题名
小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较
被引量:
2
1
作者
辛颖
张志强
安宁
张涛
张建峰
张智英
机构
西北农林科技大学动物科技学院
陕西省畜牧技术推广总站
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期93-100,共8页
基金
国家重点基础研究发展计划项目(973计划
No.2011CBA01002)~~
文摘
本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中,转染48 h后通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细胞的效率.结果显示,脂质体转染效率最高仅为8.64%,不能满足对精原干细胞进一步实验的要求;电穿孔法效率最高达到25.27%,但转化后细胞大量死亡;腺病毒转染细胞的效率达到了32.4%;慢病毒转染效率最高,达到74.25%.因此,慢病毒转染法是体外转染小鼠精原干细胞的有效方法.
关键词
精原干细胞(SSCs)
转
染
效率
不同
转染方法
比较
Keywords
permatogonial stem cells(SSCs)
transfection efficiency
different transfection methods
分类号
Q2-33 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
绵羊成纤维细胞OAR-L1高效转染方法的探索
2
作者
吴飞
吴杰
陈学秋
周静茹
张惠
黄艳
时恒枝
杨怡
马光旭
杜爱芳
机构
浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所
出处
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期96-105,共10页
基金
国家重点研发计划(2017YFD0501203)
国家自然科学基金(32002304)
浙江省公益技术研究计划(LGN18C180002)。
文摘
为了在绵羊肺成纤维细胞OAR-L1中高效表达外源蛋白,探索适合该细胞的转染方法,本研究比较了聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)、脂质体2000转染试剂(Lipofectamine^(TM) 2000 transfection reagent,Lipo 2000)、成纤维细胞转染试剂盒(Cytofect^(TM) fibroblast transfection kit,CF2)以及慢病毒介导的细胞转染方法在OAR-L1细胞中表达外源蛋白的效果。结果显示:以pLentiCMV-EGFP-Puro或pLentiCMV-mCherry-Puro荧光质粒转染OAR-L1细胞时,细胞密度和转染试剂用量均可影响PEI、Lipo 2000和CF2介导的细胞转染效率,且三者最佳转染效率均不超过30%,而慢病毒介导的细胞侵染不受细胞密度和病毒液用量的限制,获得的荧光细胞数目也显著高于前三者。包装好的病毒液可以在4或-80℃条件下至少保存15 d而侵染效果不受影响。在OAR-L1细胞中共表达2种外源蛋白时,包装获得的2种慢病毒液等比例混合后再侵染的方式能获得更高的共转率。综上所述,慢病毒侵染是一种能够实现在OAR-L1细胞中高效表达外源蛋白的细胞转染方式,本研究结果为其他难转染细胞系转染方式的选择提供了一定的参考。
关键词
成纤维细胞OAR-L1
转染方法
慢病毒
绵羊
Keywords
fibroblasts OAR-L1
transfection method
lentivirus
sheep
分类号
S855.9 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
用转染技术建立巨噬细胞传代株
3
作者
丁桂凤
机构
北京医科大学微生物学与免疫学教研室
出处
《北京大学学报(医学版)》
CAS
1986年第4期281-284,共4页
文摘
本文报告应用转染技术建立巨噬细胞传代株,探讨应用不同来源的DNA获得具有不同功能特性的巨噬细胞株,应用SV40DNA、C-myc基因,U937DNA和胰岛素基因已获得7株细胞,经鉴定它们均有巨噬细胞的特性,即可分泌胶元酶、溶菌酶,其中有30—40%的细胞带有Fc受体,并有经Fc受体介导的吞噬功能。细胞株内细胞功能各异是因为细胞株尚未克隆化。从本试验结果看不仅经转染方法可获得巨噬细胞株,而且有可能经此法获得B或T淋巴细胞传代株。
关键词
巨噬细胞
转染方法
红血球
绵羊
DNA
细胞表面
吞噬细胞
红细胞
受体介导
单核细胞因子
转
染
技术
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
在线阅读
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职称材料
题名
人ehCGβ^+肿瘤小鼠模型的建立
4
作者
王立新
关庆东
吴瑾
王缨
熊思东
机构
复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心
出处
《动物医学进展》
CSCD
2004年第1期76-79,共4页
基金
国家杰出青年科学基金研究计划 (3992 5 0 31)
国家重点基础研究发展计划 (2 0 0 1CB5 10 0 0 6 )
文摘
采用脂质体转染方法将含人 eh CGβ编码基因的重组质粒 pc DNA3 -eh CGβ转染鼠SP2 / 0细胞 ,经 G41 8选择培养和有限稀释培养获得抗性细胞克隆 ,FSCA检测显示 :该抗性细胞的 eh CGβ表达比例高达 84.75%、平均荧光强度达 2 2 .1 2 ;采用相同方法获得转 HBV-pre S2 / S编码基因的 Sp2 / 0 -pre S2 / S细胞作为转染无关基因的对照细胞克隆 ,FACS检测发现该细胞表达 pre S2 / S比例为 72 .60 %、平均荧光强度为1 6.80。将不同数量的 Sp2 / 0 -eh CGβ细胞皮下接种 BAL B/ c小鼠 ,结果表明 ,接种 1× 1 0 5及以上Sp2 / 0 -eh CGβ细胞在小鼠体内能形成实体瘤 ,且实体瘤的大小与接种细胞数量呈正相关 (R值为 0 .989)。将相同数量 (5× 1 0 5个细胞 )的 Sp2 /0、Sp2 / 0 -eh CGβ和 Sp2 / 0 -pre S2 / S细胞接种同一只 BAL B/ c小鼠不同部位 ,结果发现 3种肿瘤细胞均在 BAL B/ c小鼠皮下形成了实体瘤 ,比较三组的平均瘤重量无统计学差异 (P >0 .0 5) ,提示外源性 eh CGβ基因的转染不影响Sp2 / 0细胞的致瘤特性。文章建立的人 eh CGβ+肿瘤细胞的荷瘤小鼠模型 ,为研究 eh CGβ+肿瘤细胞的生物学特征、eh
关键词
人ehCGβ^+肿瘤小鼠模型
模型建立
人绒毛膜促性腺激素
脂质体
转染方法
抗性细胞克隆
Keywords
human chorionic gonadotrophin (hCG)
tumor
mice
model
分类号
R735.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较
辛颖
张志强
安宁
张涛
张建峰
张智英
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
绵羊成纤维细胞OAR-L1高效转染方法的探索
吴飞
吴杰
陈学秋
周静茹
张惠
黄艳
时恒枝
杨怡
马光旭
杜爱芳
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
用转染技术建立巨噬细胞传代株
丁桂凤
《北京大学学报(医学版)》
CAS
1986
0
在线阅读
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职称材料
4
人ehCGβ^+肿瘤小鼠模型的建立
王立新
关庆东
吴瑾
王缨
熊思东
《动物医学进展》
CSCD
2004
0
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职称材料
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