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有效抑制小胶质细胞上TLR4表达的siRNA筛选及转染复合物细胞毒性的检测
被引量：
11
1
作者
刘思兰
杨建平
+8 位作者
王丽娜
刘磊
李彩芳
任春光
周静
李伟
江淼
马珍妮
邱桥成
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期457-465,共9页
目的筛选有效抑制小胶质细胞上TLR4(Toll-like receptor 4)表达的小干扰RNA(simall interference RNA,siR-NA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计并合成针对TLR4的siRNA4条(siRNA312,siRNA439,siRNA1495,siRNA2062)及1条与TLR4...
目的筛选有效抑制小胶质细胞上TLR4(Toll-like receptor 4)表达的小干扰RNA(simall interference RNA,siR-NA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计并合成针对TLR4的siRNA4条(siRNA312,siRNA439,siRNA1495,siRNA2062)及1条与TLR4基因无同源性的带绿色荧光标记的阴性对照siRNA:在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞。用RT-PCR方法测定干扰后小胶质细胞上TLR4mRNA表达,Western blot方法测定干扰后TLR4蛋白表达,比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA。采用MTT法检测转染复合物的细胞毒性。结果①siRNA(40nmol·L-1)和LipofectamineTM 2000(1μl)有较高的转染效率;②与阴性对照组相比,TLR4 siRNA(40nmol·L-1)干扰小胶质细胞24h后TLR4 mRNA的相对表达量降低,分别为:85%(siRNA439)、73%(siRNA312)、67%(siRNA1495)和33%(siRNA2062)。③siRNA439干扰小胶质细胞48h后TLR4蛋白表达最低(P<0.01)。④LipofectamineTM 20001μl复合低于40nmol·L-1的siRNA的各组细胞存活率均在85%以上。结论①siRNA439对小胶质细胞上TLR4表达的抑制效果最大。②siRNA浓度40nmol·L-1,LipofectamineTM 2000浓度1μl,细胞毒性很低,适合转染。
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关键词
小胶质细胞
TOLL-LIKE
RECEPTOR
4
小干扰RNA
筛选
转染复合物
细胞毒性
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职称材料
siRNA-pool抑制大鼠脊髓背角神经细胞TDAG8的表达
被引量：
4
2
作者
杭黎华
杨建平
+1 位作者
殷伟
吴娟
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1699-1701,共3页
目的观察siRNA-pool对大鼠脊髓背角神经细胞(rat neurons-dorsal spinal cord cells,RNdsc)上T细胞死亡偶联基因8(T-cell death-associated gene 8,TDAG8)表达的影响。方法设计并合成针对TDAG8的siRNA 3对(siRNA63、siRNA341、siRNA897...
目的观察siRNA-pool对大鼠脊髓背角神经细胞(rat neurons-dorsal spinal cord cells,RNdsc)上T细胞死亡偶联基因8(T-cell death-associated gene 8,TDAG8)表达的影响。方法设计并合成针对TDAG8的siRNA 3对(siRNA63、siRNA341、siRNA897)及一条带绿色荧光标记的阴性对照siRNA。在阳离子聚合物纳米粒jetPEITM介导下转染RNdsc。RNdsc细胞随机分为正常(normal)组,载体(vehicle)组,阴性对照(mismatch)组,siRNA 50、100、200 pmol组。转染24 h后,荧光显微镜下计算转染复合物的转染效率,用MTT法检测转染复合物的细胞毒性,采用real-time PCR及Western blot测定siRNA-pool的干扰效率。结果采用jetPEITM作为转染介质转染效率高达98.9%。转染复合物的细胞毒性低,各组细胞成活率差异无统计学意义。siRNA 50、100、200 pmol可剂量依赖性地抑制TDAG8的表达,siRNA200 pmol组对TDAG8 mRNA表达的抑制率达88%,对TDAG8蛋白的表达抑制率达73%。结论 siRNA-pool能高效地抑制RNdsc上TDAG8的表达。
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关键词
小干扰RNA
大鼠脊髓背角神经细胞
T细胞死亡偶
联基因8
表达
转染复合物
细胞毒性
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职称材料
题名
有效抑制小胶质细胞上TLR4表达的siRNA筛选及转染复合物细胞毒性的检测
被引量：
11
1
作者
刘思兰
杨建平
王丽娜
刘磊
李彩芳
任春光
周静
李伟
江淼
马珍妮
邱桥成
机构
苏州大学附属第一医院麻醉科
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期457-465,共9页
基金
国家自然科学基金资助课题(No30872442)
江苏省卫生厅基金资助课题(NoH200855)
江苏省卫生厅重点基金资助课题(NoK200518)
文摘
目的筛选有效抑制小胶质细胞上TLR4(Toll-like receptor 4)表达的小干扰RNA(simall interference RNA,siR-NA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计并合成针对TLR4的siRNA4条(siRNA312,siRNA439,siRNA1495,siRNA2062)及1条与TLR4基因无同源性的带绿色荧光标记的阴性对照siRNA:在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞。用RT-PCR方法测定干扰后小胶质细胞上TLR4mRNA表达,Western blot方法测定干扰后TLR4蛋白表达,比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA。采用MTT法检测转染复合物的细胞毒性。结果①siRNA(40nmol·L-1)和LipofectamineTM 2000(1μl)有较高的转染效率;②与阴性对照组相比,TLR4 siRNA(40nmol·L-1)干扰小胶质细胞24h后TLR4 mRNA的相对表达量降低,分别为:85%(siRNA439)、73%(siRNA312)、67%(siRNA1495)和33%(siRNA2062)。③siRNA439干扰小胶质细胞48h后TLR4蛋白表达最低(P<0.01)。④LipofectamineTM 20001μl复合低于40nmol·L-1的siRNA的各组细胞存活率均在85%以上。结论①siRNA439对小胶质细胞上TLR4表达的抑制效果最大。②siRNA浓度40nmol·L-1,LipofectamineTM 2000浓度1μl,细胞毒性很低,适合转染。
关键词
小胶质细胞
TOLL-LIKE
RECEPTOR
4
小干扰RNA
筛选
转染复合物
细胞毒性
Keywords
microglial
Toll-like receptor 4
small interfering RNA
select
transfection complex
cytotoxicity
分类号
R332 [医药卫生—人体生理学]
R329.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
siRNA-pool抑制大鼠脊髓背角神经细胞TDAG8的表达
被引量：
4
2
作者
杭黎华
杨建平
殷伟
吴娟
机构
苏州大学附属第一医院麻醉科
江苏大学附属人民医院麻醉科
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1699-1701,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(No 81171057
81000479)
镇江市社会发展基金资助项目(No SH2011036)
文摘
目的观察siRNA-pool对大鼠脊髓背角神经细胞(rat neurons-dorsal spinal cord cells,RNdsc)上T细胞死亡偶联基因8(T-cell death-associated gene 8,TDAG8)表达的影响。方法设计并合成针对TDAG8的siRNA 3对(siRNA63、siRNA341、siRNA897)及一条带绿色荧光标记的阴性对照siRNA。在阳离子聚合物纳米粒jetPEITM介导下转染RNdsc。RNdsc细胞随机分为正常(normal)组,载体(vehicle)组,阴性对照(mismatch)组,siRNA 50、100、200 pmol组。转染24 h后,荧光显微镜下计算转染复合物的转染效率,用MTT法检测转染复合物的细胞毒性,采用real-time PCR及Western blot测定siRNA-pool的干扰效率。结果采用jetPEITM作为转染介质转染效率高达98.9%。转染复合物的细胞毒性低,各组细胞成活率差异无统计学意义。siRNA 50、100、200 pmol可剂量依赖性地抑制TDAG8的表达,siRNA200 pmol组对TDAG8 mRNA表达的抑制率达88%,对TDAG8蛋白的表达抑制率达73%。结论 siRNA-pool能高效地抑制RNdsc上TDAG8的表达。
关键词
小干扰RNA
大鼠脊髓背角神经细胞
T细胞死亡偶
联基因8
表达
转染复合物
细胞毒性
Keywords
siRNA
RNdsc
TDAG8
expression
transfection complex
cytotoxicity
分类号
R-332 [医药卫生]
R322.81 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
有效抑制小胶质细胞上TLR4表达的siRNA筛选及转染复合物细胞毒性的检测
刘思兰
杨建平
王丽娜
刘磊
李彩芳
任春光
周静
李伟
江淼
马珍妮
邱桥成
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
11
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
siRNA-pool抑制大鼠脊髓背角神经细胞TDAG8的表达
杭黎华
杨建平
殷伟
吴娟
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
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