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番茄SlMYB80转录激活结构域的鉴定及其在拟南芥花粉发育中的功能验证
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作者 张雨晴 董丽雪 +4 位作者 张宝月 张颖 刘雪敖 熊双喜 张洪霞 《生物技术通报》 北大核心 2025年第10期222-232,共11页
【目的】MYB80是拟南芥和水稻中的一个花粉壁形成关键调节因子,探究番茄中同源基因SlMYB80的功能并鉴定其转录激活结构域,为进一步丰富MYB转录因子对番茄雄性不育系基因资源提供理论依据。【方法】以栽培番茄‘Moneymaker’为野生型材料... 【目的】MYB80是拟南芥和水稻中的一个花粉壁形成关键调节因子,探究番茄中同源基因SlMYB80的功能并鉴定其转录激活结构域,为进一步丰富MYB转录因子对番茄雄性不育系基因资源提供理论依据。【方法】以栽培番茄‘Moneymaker’为野生型材料,以其花苞cDNA为模板克隆SlMYB80基因。利用花椰菜花叶病毒CaMV 35s启动子驱动SlMYB80编码区(CDS)与绿色荧光蛋白eGFP编码序列融合,用于检测SlMYB80蛋白亚细胞定位。同时,将该基因编码区分成4个片段,分别连接酵母表达载体pGTBKT7,与pGTADT7共转酵母进行互作试验以确定其转录激活结构域。此外,构建拟南芥MS188(Male Sterile 188)/AtMYB80启动子驱动SlMYB80 CDS的融合双元载体p AtMYB80:SlMYB80并互补拟南芥ms188突变体,探究SlMYB80的生物学功能。【结果】MYB80氨基酸序列比对和进化树结果表明,MYB80的氨基酸序列在陆生植物中十分保守,特别是R2R3 DNA结合结构域区域;烟草亚细胞定位试验表明,SlMYB80-eGFP定位于细胞核。酵母互作试验表明,SlMYB80转录激活结构域位于肽链C末端17个氨基酸残基;拟南芥ms188突变体互补结果表明,在转基因互补突变体植株的花苞中表达SlMYB80基因,能使部分花粉正常形成,从而恢复部分育性。【结论】SlMYB80作为拟南芥MS188/AtMYB80的直系同源基因编码一个R2R3 MYB转录因子定位于细胞核中,其多肽链C末端17个氨基酸为激活结构域,能部分互补ms188突变体花粉败育的表型,揭示了MYB80转录因子功能的保守性。 展开更多
关键词 番茄 SlMYB80 转录因子 转录激活结构域 雄性不育 同源性分析 酵母杂交 功能互补
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Stat3蛋白氨基端转录激活结构域的鉴定
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作者 张浩 陶无凡 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期845-849,共5页
Stat3是一个在调控胚胎发育、细胞增殖、凋亡、炎症反应和血管生成等多种生理过程发挥关键作用的重要转录因子。Stat3蛋白有Stat3α和缺少羧基端转录激活结构域的Stat3β两个剪接异构体。Stat3基因纯合缺失突变的小鼠在早期胚胎死亡。表... Stat3是一个在调控胚胎发育、细胞增殖、凋亡、炎症反应和血管生成等多种生理过程发挥关键作用的重要转录因子。Stat3蛋白有Stat3α和缺少羧基端转录激活结构域的Stat3β两个剪接异构体。Stat3基因纯合缺失突变的小鼠在早期胚胎死亡。表达Stat3β可逆转Stat3纯合缺失突变小鼠的胚胎致死表型,并可诱导其下游基因的短期表达,然而其潜在的转录激活结构域一直没有被测定和证实。为进一步解析Stat3蛋白的结构和功能,本研究构建并在酵母中表达了一系列Stat3蛋白的截短体,利用酵母双杂交和双荧光素酶报告基因实验,在酵母和哺乳动物细胞中证实了Stat3蛋白的第2~11位短肽(aa2-11)具有转录激活的作用。这一发现为表达Stat3β逆转Stat3基因缺失引起小鼠胚胎致死表型提供了一种可能的解释,也进一步加深了对Stat3蛋白结构和功能的了解和认识。 展开更多
关键词 Stat3α Stat3β 氨基端转录激活结构域 胚胎发育
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酵母单杂交系统在植物基因工程研究中的应用 被引量:9
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作者 王琪 朱延明 王冬冬 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期141-147,共7页
酵母单杂交系统是由酵母双杂交系统衍生来的研究DNA与蛋白质之间相互作用的新型系统。该文系统阐述了单杂交系统的基本原理和技术路线,详细综述了其在植物基因工程各个领域的应用研究进展,即克隆抗渗透胁迫类转录因子基因,确定已知DNA... 酵母单杂交系统是由酵母双杂交系统衍生来的研究DNA与蛋白质之间相互作用的新型系统。该文系统阐述了单杂交系统的基本原理和技术路线,详细综述了其在植物基因工程各个领域的应用研究进展,即克隆抗渗透胁迫类转录因子基因,确定已知DNA与蛋白质之间的相互作用,定位已证实的具有相互作用的DNA结合结构域以及验证转录激活作用;并分析了当前该系统在植物基因工程研究中存在的问题,进而结合自己的研究对解决问题的途径进行了探讨。 展开更多
关键词 酵母单杂交 植物基因工程 转录因子 转录激活结构域 DNA结合结构域
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酵母双杂交体系的原理及研究进展 被引量:5
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作者 段强德 陈铁桥 《畜牧兽医杂志》 2009年第1期56-58,共3页
阐述酵母双杂交技术能辨别两未知蛋白的相互作用,描述两己知相互作用蛋白的特征,控制蛋白的相互作用。与传统的生化和遗传学方法比较起来有明显的优势,得到愈来愈广泛的应用,并且在此过程中衍生了基于不同适用范围和不同物种的杂交技术... 阐述酵母双杂交技术能辨别两未知蛋白的相互作用,描述两己知相互作用蛋白的特征,控制蛋白的相互作用。与传统的生化和遗传学方法比较起来有明显的优势,得到愈来愈广泛的应用,并且在此过程中衍生了基于不同适用范围和不同物种的杂交技术。等酵母双杂交的原理及酵母双杂交体系的研究进展。 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 DNA结合结构域 转录激活结构域 酵母交配
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