极细链格孢菌蛋白激发子Peat1在酵母双杂交系统中转录激活活性检测 被引量：4

1

作者 刘延锋 邱德文 +1 位作者 曾洪梅 杨秀芬 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第20期8500-8501,共2页

以PCR法从pGEX-6p-1-peaT1中扩增出peaT1基因片段,电泳回收后将peaT1基因定向克隆到plexA载体中。将诱饵载体plexA-peaT1经酶切和测序鉴定后,用PEG/LiAC法转化酵母EGY48[p8op-lacZ],并进行诱饵载体转录激活活性检测。结果表明,重组质粒... 以PCR法从pGEX-6p-1-peaT1中扩增出peaT1基因片段,电泳回收后将peaT1基因定向克隆到plexA载体中。将诱饵载体plexA-peaT1经酶切和测序鉴定后,用PEG/LiAC法转化酵母EGY48[p8op-lacZ],并进行诱饵载体转录激活活性检测。结果表明,重组质粒经EcoR I和XhoⅠ双酶切后,琼脂糖凝胶电泳检测可见2条与预期相符的条带,表明诱饵载体构建成功。β-半乳糖苷酶活性分析表明,诱饵载体plexA-peat1无转录激活活性,对酵母菌株也无毒害作用。该诱饵载体可用于酵母双杂交系统中,为下一步筛选cDNA文库奠定了基础。 展开更多

关键词 Peat1 酵母双杂交 转录激活活性

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日本结缕草ZjERF2基因的克隆、转录激活活性、亚细胞定位和表达分析 被引量：1

2

作者 张蕊 姜红岩 +4 位作者 滕珂 檀鹏辉 汪呈 刘凌云 常智慧 《草业科学》 CAS CSCD 2019年第5期1255-1265,共11页

采用RACE的方法,克隆了日本结缕草(Zoysia japonica)ZjERF2基因(GenBank登录号为MH479420)。其开放阅读框为825 bp,编码274个氨基酸,含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征。遗传进化分析表明其与黍(Panicum hallii)ER... 采用RACE的方法,克隆了日本结缕草(Zoysia japonica)ZjERF2基因(GenBank登录号为MH479420)。其开放阅读框为825 bp,编码274个氨基酸,含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征。遗传进化分析表明其与黍(Panicum hallii)ERF亲缘关系最近。利用染色体步移的方法克隆ATG上游1 549 bp的启动子序列,PLACE预测其含有多个响应激素和胁迫处理的作用元件。构建了pGBKT7-ZjERF2载体,转化Y2HGold酵母感受态细胞,结果表明其具有较强的转录激活活性。为探析其亚细胞定位情况,成功构建35S??ZjERF2?YFP载体,本生烟草(Nicotiana tabacum)瞬时表达结果证明ZjERF2定位于细胞核。利用实时荧光定量的方法分析了ZjERF2的表达特征,结果表明ZjERF2基因在日本结缕草不同部位及不同发育时期表达量均有差异,在成熟叶片表达量最高。此外ZjERF2表达受ET、MeJA的诱导,但受ABA、PEG和NaCl的抑制。本研究表明ZjERF2是一个参与多种信号转导途径的转录因子。 展开更多

关键词 日本结缕草 ZjERF2转录因子 转录激活活性 亚细胞定位 表达分析

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铁皮石斛DcNAC1基因克隆、表达及转录自激活活性分析 被引量：3

3

作者 陈彧 邢文婷 +3 位作者 李雨欣 张婷婷 饶丹丹 周扬 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1612-1621,共10页

【目的】克隆铁皮石斛NAC转录因子基因(DcNAC1),并进行表达模式及转录自激活活性分析,为铁皮石斛抗逆相关基因鉴定及其分子机制研究提供参考。【方法】以铁皮石斛cDNA为模板,PCR扩增DcNAC1基因,运用生物信息学软件分析DcNAC1蛋白的理化... 【目的】克隆铁皮石斛NAC转录因子基因(DcNAC1),并进行表达模式及转录自激活活性分析,为铁皮石斛抗逆相关基因鉴定及其分子机制研究提供参考。【方法】以铁皮石斛cDNA为模板,PCR扩增DcNAC1基因,运用生物信息学软件分析DcNAC1蛋白的理化性质、保守结构域、信号肽、跨膜结构域及亚细胞定位,通过实时荧光定量PCR检测DcNAC1基因在不同组织和不同逆境胁迫下的表达模式。同时构建该基因的酵母表达载体,分析其转录自激活活性。【结果】从铁皮石斛中PCR扩增获得DcNAC1基因的开放阅读框(ORF),全长为945 bp,与参考序列(LOC110104882)的核苷酸序列相似性为100%。该基因编码314个氨基酸残基,蛋白分子量为35.40 kD,理论等电点(pI)为8.16,为不稳定的亲水性蛋白,定位于细胞核,不含信号肽和跨膜结构域,含有特征性的NAC保守结构域。DcNAC1基因的启动子序列含茉莉酸甲酯响应元件(CGTCA-motif和TGACG-motif)、胁迫响应元件(TC-rich repeats)、光响应元件(G-box)、干旱诱导MYB结合位点(MBS)和低温响应元件(LTR)。根中DcNAC1基因的相对表达量在高温胁迫和低温胁迫处理6 h分别达最高,显著高于处理0 h(P<0.05,下同);茎中DcNAC1基因在盐胁迫处理48 h的相对表达量达最高,显著高于处理0 h。将构建的重组质粒pGBKT7-DcNAC1转化酵母菌株Y2HGold,结果发现该重组质粒无毒性,DcNAC1蛋白具有自激活活性。【结论】DcNAC1基因表达受到茉莉酸、低温、干旱、光信号和逆境胁迫等多种信号的调控。DcNAC1蛋白具有自激活活性,通过激活下游基因的表达,参与到植物生长发育和逆境胁迫响应的转录调控过程中。 展开更多

关键词 铁皮石斛 NAC转录因子 基因克隆 转录自激活活性 逆境胁迫

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PC-1分子转录激活功能研究 被引量：1

4

作者 张浩 周建光 +2 位作者 李杰之 于梅 黄翠芬 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期416-420,共5页

PC 1基因是在人前列腺癌细胞中克隆的新基因 ,表达水平随前列腺癌恶性程度增加而升高 ,其表达产物具有转录因子的一些特征 .为研究PC 1分子的转录激活功能 ,首先应用酵母双杂交系统将PC 1全长以及不同区段的cDNA克隆到表达载体pAS2 1... PC 1基因是在人前列腺癌细胞中克隆的新基因 ,表达水平随前列腺癌恶性程度增加而升高 ,其表达产物具有转录因子的一些特征 .为研究PC 1分子的转录激活功能 ,首先应用酵母双杂交系统将PC 1全长以及不同区段的cDNA克隆到表达载体pAS2 1中 ,然后分别转化酵母细胞株CG 194 5 .lacZ和His3报告基因激活的检测结果表明 ,该分子具有转录激活活性并将该活性定位于N端的 4 6个氨基酸区域 .此外 ,将PC 1分子不同区段的cDNA分别克隆至表达载体pZHO1中 ,将它们与报告基因质粒pTRE luc共转染哺乳动物细胞COS7和C4 2 ,Firefly荧光素酶相对活性的检测结果表明 ,该分子N端的 4 展开更多

关键词 PC-1 转录激活活性 酵母双杂交

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大豆MYB转录因子基因GmMYBJ6和GmMYBJ7的克隆及表达分析 被引量：22

5

作者 杜海 杨文杰 +4 位作者 刘蕾 唐晓凤 吴燕民 黄玉碧 唐益雄 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1179-1187,共9页

MYB转录因子以保守的DNA结合域为共同特征,是植物最大的转录因子家族之一,广泛参与植物代谢调控。本文根据植物中MYB转录因子的DNA保守结构域,通过RT-PCR和RACE的方法从大豆品种吉林3号的叶片中分离得到了2个MYB基因GmMYBJ6和GmMYBJ7,... MYB转录因子以保守的DNA结合域为共同特征,是植物最大的转录因子家族之一,广泛参与植物代谢调控。本文根据植物中MYB转录因子的DNA保守结构域,通过RT-PCR和RACE的方法从大豆品种吉林3号的叶片中分离得到了2个MYB基因GmMYBJ6和GmMYBJ7,并对其结构特征和表达特性进行了分析鉴定。基因组DNA序列分析表明,两个基因都含有两个内含子;酵母系统检测表明,两个基因均具有转录激活活性;β-半乳糖甘酶活性分析表明,内含子的存在使两个基因的转录激活活性明显降低;实时荧光定量PCR检测结果显示,GmMYBJ6在大豆中的表达受ABA、GA3和NAA的诱导,而GmMYBJ7的表达则受ABA和NAA的诱导;半定量RT-PCR分析表明,两个基因在大豆的根、茎、叶、花和未成熟种子中均有表达。GmMYBJ6和GmMYBJ7为典型的R2R3-MYB转录因子新基因;他们在大豆中的表达可能与ABA和NAA的信号转导途径有关。 展开更多

关键词 MYB转录因子 基因表达调控 内含子 转录激活活性

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橡胶树胶乳WRKY家族转录因子HbWRKY27基因的克隆与表达分析 被引量：3

6

作者 闫栋 陈晓丽 +2 位作者 孙丽娜 曾日中 杨礼富 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期517-524,共8页

从巴西橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳中克隆了1个WRKY转录因子家族成员基因,命名为HbWRKY27,该基因含有1个1 266 bp的开放阅读框(ORF),编码422个氨基酸。生物信息学分析结果表明,HbWRKY27含有1个WRKY保守结构域和1个C2H2锌指结构基序,... 从巴西橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳中克隆了1个WRKY转录因子家族成员基因,命名为HbWRKY27,该基因含有1个1 266 bp的开放阅读框(ORF),编码422个氨基酸。生物信息学分析结果表明,HbWRKY27含有1个WRKY保守结构域和1个C2H2锌指结构基序,属于II类WRKY家族成员,与大豆、油棕、麻风树、葡萄和拟南芥的WRKY27蛋白的同源性分别为81%、74%、63%、62%和58%。酵母转化试验表明,HbWRKY27具有转录激活活性。实时荧光定量RT-PCR分析显示,HbWRKY27基因在健康橡胶树树皮组织中表达量最高,但在死皮橡胶树树皮组织中的表达量随着死皮程度的增加而下降,而在死皮橡胶树胶乳中HbWRKY27基因表达量则随着死皮程度的增加而升高;割胶、乙烯利和茉莉酸甲酯刺激都可显著促进胶乳HbWRKY27基因上调表达。转录因子HbWRKY27可能在割胶和乙烯等调控橡胶树胶乳代谢中发挥重要作用,并且还可能与橡胶树死皮病的发生相关。 展开更多

关键词 橡胶树 胶乳 死皮 HbWRKY27转录因子 转录激活活性 基因表达

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水稻瘤矮病毒P3、P7、P8、Pn9、Pn10、Pn11、Pn12的酵母双杂交载体的构建及自激活效应检测 被引量：2

7

作者 吴建国 蔡丽君 +4 位作者 胡梅群 谢荔岩 林奇英 吴祖建 谢联辉 《热带作物学报》 CSCD 2009年第9期1364-1368,共5页

将编码水稻瘤矮病毒P3、P7、P8、Pn9、Pn10、Pn11、Pn12的S3,S7,S8,S9,S10,S11和S12基因分别克隆到酵母表达载体pGBKT7和pGADT7中,转化AH109酵母细胞,结果显示:除pGBK-S10转化子可以在SD/-Trp和SD/-His营养缺陷固体培养基上正常生长外,... 将编码水稻瘤矮病毒P3、P7、P8、Pn9、Pn10、Pn11、Pn12的S3,S7,S8,S9,S10,S11和S12基因分别克隆到酵母表达载体pGBKT7和pGADT7中,转化AH109酵母细胞,结果显示:除pGBK-S10转化子可以在SD/-Trp和SD/-His营养缺陷固体培养基上正常生长外,其它转化子均只能在SD/-Trp或SD/-Leu营养缺陷固体培养基上正常生长。通过α-半乳糖苷酶活性分析揭示,除pGBK-S10可以在SD/-Trp/X-α-Gal平板上生长并变蓝外,其它均不变蓝。结果证实:RGDVPn10在酵母细胞中具有转录激活活性,融合GAL4的RGDVPn10蛋白可以在酵母细胞内激活HIS3和MEL1报告基因的表达。暗示该蛋白可能在病毒的侵染和复制过程中参与调控病毒或寄主基因的转录表达。 展开更多

关键词 水稻瘤矮病毒 转录激活活性 酵母表达载体 Pn10

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人糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及其活性研究 被引量：1

8

作者 张方 钱桂生 +3 位作者 吴学玲 谢永宏 王兴友 陈维中 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期50-52,共3页

目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能。方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand b ind ing dom ain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重... 目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能。方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand b ind ing dom ain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重组质粒转染表达情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性。结果扩增出长1 601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genbank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞转录激活活性增强。结论成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性。 展开更多

关键词 糖皮质激素受体 LBD 转录激活活性

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甘蔗ScWRKY4基因的克隆与表达特性分析 被引量：13

9

作者 王玲 刘峰 +7 位作者 戴明剑 孙婷婷 苏炜华 王春风 张旭 毛花英 苏亚春 阙友雄 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1367-1379,共13页

WRKY是植物中特有的转录因子家族之一,在植物对生物和非生物逆境胁迫的应答反应中起重要调控作用。本研究基于课题组前期构建的甘蔗(Saccharum spp.)转录组数据库,从新台糖22(ROC22)中成功克隆到1个WRKY基因,命名为Sc WRKY4(Gen Bank登... WRKY是植物中特有的转录因子家族之一,在植物对生物和非生物逆境胁迫的应答反应中起重要调控作用。本研究基于课题组前期构建的甘蔗(Saccharum spp.)转录组数据库,从新台糖22(ROC22)中成功克隆到1个WRKY基因,命名为Sc WRKY4(Gen Bank登录号为MG852087)。序列分析发现,Sc WRKY4基因c DNA全长1265 bp,包含1个741 bp的完整开放读码框,编码246个氨基酸,该蛋白具有1个WRKYGQK保守结构域和C2H2锌指结构域,属于IIc类WRKY转录因子。生物信息学预测分析发现,Sc WRKY4蛋白为碱性的不稳定亲水性蛋白,不存在信号肽和跨膜结构域,蛋白二级结构元件缺少β螺旋。在本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片瞬时表达中,Sc WRKY4蛋白定位于细胞核。酵母杂交实验结果显示,Sc WRKY4不具有转录激活活性。实时荧光定量PCR分析表明,Sc WRKY4基因在甘蔗的根、叶、芽和皮中的表达量无明显差异,在蔗肉中的表达量最高,为对照蔗根的18.38倍;黑穗病菌侵染0~72 h,Sc WRKY4在抗病品种崖城05-179中下调表达,在感病品种ROC22中表达较稳定;受到外源激素脱落酸、水杨酸和茉莉酸甲酯以及非生物胁迫因子氯化钠和聚乙二醇胁迫后,Sc WRKY4基因均被诱导上调表达。上述研究结果表明,Sc WRKY4基因可能不参与甘蔗对黑穗病的抗性反应或在该防御方面起负调控作用,但积极响应甘蔗对盐和干旱胁迫的应答。 展开更多

关键词 甘蔗 WRKY转录因子 生物信息学 亚细胞定位 转录激活活性 实时荧光定量PCR

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巴西橡胶树HbNAC24基因克隆和表达分析 被引量：13

10

作者 康桂娟 黎瑜 曾日中 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2374-2381,共8页

该研究以巴西橡胶树为实验材料,从橡胶树胶乳cDNA中克隆了NAC转录因子基因（HbNAC24）完整开放阅读框（ORF）,并通过酵母实验和实时荧光定量PCR技术,进行转录激活活性分析和表达分析.结果显示：（1）HbNAC24基因ORF为1 167 bp,编码388... 该研究以巴西橡胶树为实验材料,从橡胶树胶乳cDNA中克隆了NAC转录因子基因（HbNAC24）完整开放阅读框（ORF）,并通过酵母实验和实时荧光定量PCR技术,进行转录激活活性分析和表达分析.结果显示：（1）HbNAC24基因ORF为1 167 bp,编码388个氨基酸,在N端第7～174氨基酸之间含有一个典型的NAC结构域.（2）酵母实验表明,HbNAC24具有转录激活活性,转录激活区在高度变异C端,具备了NAC转录因子的基本特征.（3）序列比对和系统进化分析表明,HbNAC24蛋白属于NAC转录因子家族中的TIP亚族.（4）实时荧光定量PCR分析结果发现,HbNAC24基因在叶中的表达量显著高于其他部位;割胶和茉莉酸（JA）处理均能够诱导HbNAC24表达上调.研究认为,HbNAC24基因可能参与植物的生长发育和胁迫应答过程. 展开更多

关键词 巴西橡胶树 NAC转录因子 基因克隆 表达分析 转录激活活性

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巴西橡胶树HbNTL2基因的克隆和表达分析 被引量：3

11

作者 康桂娟 黎瑜 曾日中 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期602-609,共8页

利用RT–PCR和实时荧光定量PCR技术,对巴西橡胶树膜结合转录因子Hb NTL2进行克隆和表达,并通过酵母试验进行转录激活功能分析。结果表明,Hb NTL2基因的开放阅读框为1 380 bp,编码一个由459个氨基酸组成的蛋白,该蛋白属于NAC转录因子家... 利用RT–PCR和实时荧光定量PCR技术,对巴西橡胶树膜结合转录因子Hb NTL2进行克隆和表达,并通过酵母试验进行转录激活功能分析。结果表明,Hb NTL2基因的开放阅读框为1 380 bp,编码一个由459个氨基酸组成的蛋白,该蛋白属于NAC转录因子家族中的ANAC001亚族;在第6~172位氨基酸之间含有典型的NAC结构域,第433~453位氨基酸具有跨膜结构域,是膜结合NAC转录因子;Hb NTL2具有转录激活功能,转录激活区在C–末端;Hb NTL2在叶片的表达高于在橡胶树的其他部位,受割胶、茉莉酸（JA）和乙烯（ET）处理以及低温胁迫诱导。综合分析结果表明,Hb NTL2可能参与调控巴西橡胶树的生长发育和胁迫应答过程。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 膜结合NAC转录因子 基因克隆 基因表达 转录激活活性

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缺失激素结合区的人糖皮质激素受体突变体的研究 被引量：1

12

作者 张方 施毅 +5 位作者 辛晓峰 钱桂生 罗向东 宋勇 赵明 李子玲 《医学研究生学报》 CAS 2007年第5期474-476,489,I0002,共5页

目的:构建缺失激素结合区(LBD)的人糖皮质激素受体突变体表达载体,并研究其表达和功能。方法:运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体(GR)基因不含编码LBD的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选编码正确的重组质粒;... 目的:构建缺失激素结合区(LBD)的人糖皮质激素受体突变体表达载体,并研究其表达和功能。方法:运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体(GR)基因不含编码LBD的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选编码正确的重组质粒;荧光显微镜观察GR突变体重组质粒转染人巨噬细胞株U937后的表达情况;相对荧光素酶法检测转染后细胞GR转录激活活性。结果:扩增出长1601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genebank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞GR转录激活活性增强。结论:成功构建缺失LBD的GR突变体表达载体,该突变体具有不依赖激素的GR转录激活活性。 展开更多

关键词 糖皮质激素受体 激素结合区 转录激活活性

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金边红苞凤梨叶片的超微观察和AbGLK1的克隆与表达分析 被引量：1

13

作者 毛美琴 薛彦斌 +2 位作者 胡豪 周徐子鑫 马均 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期311-320,共10页

为了解Golden2-like(GLK)转录因子在金边红苞凤梨(Ananas comosus var.bracteatus‘Chiyan’)绿白嵌合叶片形成中的作用,采用RT-PCR技术克隆得到了AbGLK1基因,其开放阅读框全长1371 bp,编码456个氨基酸,含有1个GARP-DNA结合域和1个C末... 为了解Golden2-like(GLK)转录因子在金边红苞凤梨(Ananas comosus var.bracteatus‘Chiyan’)绿白嵌合叶片形成中的作用,采用RT-PCR技术克隆得到了AbGLK1基因,其开放阅读框全长1371 bp,编码456个氨基酸,含有1个GARP-DNA结合域和1个C末端结构域GCT box(GOLDEN2 C-terminal box),属于GLK转录因子家族,在酵母中具有转录因子的转录激活活性。烟草亚细胞定位表明AbGLK1蛋白定位在细胞核。RT-qPCR分析表明,AbGLK1基因在金边红苞凤梨的根、茎、叶中均有表达,但具有组织器官差异性,在叶片中的表达量显著高于根和茎(P<0.05)。AbGLK1基因在叶片边缘白化组织中的表达量显著低于绿色组织,约为绿色组织的1/3(P<0.05)。叶片白化组织叶绿体内膜系统模糊,无类囊体存在,含有大量囊状小泡,质体小球数量多且体积较大。因此,推测AbGLK1基因可能参与了金边红苞凤梨中的叶绿体发育,其下调表达可能导致叶片白化组织中叶绿体发育不成熟。 展开更多

关键词 金边红苞凤梨 叶绿体 超微结构 AbGLK1 基因克隆 转录激活活性 基因表达

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一氧化氮调节脂多糖致炎大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体功能的研究

14

作者 钱频 张芳 +1 位作者 钱桂生 陈维中 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1223-1225,共3页

目的　研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法　将GR荧光表达质粒pGFP GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP GR核移位情况;相对荧光... 目的　研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法　将GR荧光表达质粒pGFP GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP GR核移位情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性;EMSA检测检测细胞NF κB活性。结果　5 0 0 μmol LSNP作用2h出现GFP GR核移位,同时GR转录激活活性显著增强,NF κB活性被显著抑制。运用GR特异性拮抗剂RU486后,NF κB活性抑制现象消失。结论　肺泡巨噬细胞在致炎因子作用条件下,一氧化氮供体(5 0 0 μmol LSNP )通过活化GR发挥抗炎活性。 展开更多

关键词 一氧化氮供体 糖皮质激素受体 NF-κB 转录激活活性

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苦荞麦FtWRKY6基因的克隆及其在低磷与激素诱导下根中的表达分析 被引量：2

15

作者 田建红 彭喜旭 +4 位作者 邬清韬 文碧瑶 邓楚楚 唐新科 王海华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期32-39,共8页

WRKY转录因子是植物非生物胁迫反应中的重要调节子。荞麦耐贫瘠,磷利用率较高。为了探究WRKY基因在荞麦磷饥饿反应中可能的调节作用,以苦荞麦为材料,采用逆转录PCR方法,从低磷处理的根RNA样品中获得了FtWRKY6基因的编码序列。FtWRKY6 c... WRKY转录因子是植物非生物胁迫反应中的重要调节子。荞麦耐贫瘠,磷利用率较高。为了探究WRKY基因在荞麦磷饥饿反应中可能的调节作用,以苦荞麦为材料,采用逆转录PCR方法,从低磷处理的根RNA样品中获得了FtWRKY6基因的编码序列。FtWRKY6 cDNA长1 572 bp,编码524个氨基酸,含有2个典型的WRKY保守结构域,锌指类型为C_(2)H_(2),归属于第Ⅰ类WRKY,与绿茶CsWRKY24在氨基酸水平上的同一性较高(55.5%)。拟南芥原生质体瞬时表达分析表明,FtWRKY6定位于细胞核中;酵母单杂交试验表明,FtWRKY6具有转录激活活性。实时荧光定量PCR分析表明,在根中FtWRKY6的表达受低磷和3种重要的低磷反应相关激素—吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA)和细胞分裂素(CTK)显著诱导。上述结果提示,FtWRKY6具有转录因子的基本结构与生化特征,在根中可能通过IAA、GA、CTK信号通路的交互作用介导苦荞麦在低磷条件下的响应过程。 展开更多

关键词 苦荞麦 低磷胁迫 WRKY基因 基因表达 转录激活活性 亚细胞定位

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薄荷McHD-Zip3基因的克隆及其调控腺毛发育的功能分析 被引量：1

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作者 陈泽群 亓希武 +3 位作者 房海灵 于盱 李莉 梁呈元 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1-10,共10页

以薄荷(Mentha canadensis Linn.)cDNA为模版,克隆获得1个HD-Zip转录因子基因,对该基因的组织表达特性以及对转基因烟草(Nicotiana tabacum Linn.)叶片腺毛发育的影响效应进行分析,并对该基因编码的氨基酸序列的特性及其与其他植物的同... 以薄荷(Mentha canadensis Linn.)cDNA为模版,克隆获得1个HD-Zip转录因子基因,对该基因的组织表达特性以及对转基因烟草(Nicotiana tabacum Linn.)叶片腺毛发育的影响效应进行分析,并对该基因编码的氨基酸序列的特性及其与其他植物的同源性和亲缘关系以及亚细胞定位和转录激活活性进行研究。结果显示:该基因被命名为McHD-Zip3,其编码区(CDS)全长2226 bp,编码741个氨基酸残基;该基因编码的氨基酸序列的理论相对分子质量为81375.67,理论等电点为pI 5.92。McHD-Zip3基因编码的氨基酸序列与其他植物HD-Zip转录因子的氨基酸序列具有一定的序列相似性,且均具有保守的Homeodomain、bZip motif、START domain和SAD domain,其与同科植物一串红(Salvia splendens Ker-Gawl.)的SsHD-Zip转录因子的序列相似度最高(82.57%)。在系统树上,McHD-Zip3转录因子与其他植物的多个腺毛发育相关的HD-Zip转录因子聚为一支,同属于HD-ZipⅣ亚家族,其与黄花蒿(Artemisia annua Linn.)的AaHD7转录因子的亲缘关系最近。McHD-Zip3转录因子定位于细胞核中,为核定位蛋白,且具有转录激活活性。McHD-Zip3基因的相对表达量在薄荷不同组织中差异显著,其在幼叶和老叶中较高,但在根和茎中较低;McHD-Zip3转基因烟草叶片的腺毛密度明显高于野生型烟草。研究结果表明:McHD-Zip3基因主要在薄荷叶片中表达,McHD-Zip3转录因子属于HD-ZipⅣ亚家族,对薄荷腺毛发育具有调控功能。 展开更多

关键词 薄荷 McHD-Zip3基因 表达特性 亚细胞定位 转录激活活性 腺毛发育

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大鼠肺泡巨噬细胞Bcl-2相关抗凋亡蛋白-1表达变化及其调节糖皮质激素受体功能的研究 被引量：4

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作者 张方 施毅 +5 位作者 辛晓峰 刘玉秀 钱桂生 罗向东 宋勇 李子玲 《医学研究生学报》 CAS 2007年第11期1155-1158,1162,共5页

目的:在模拟大鼠肺泡巨噬细胞炎症合并糖皮质激素治疗的条件下,阐明Bcl-2相关抗凋亡蛋白-1(BAG-1)的表达变化及其对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法:Western blot检测脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1表达... 目的:在模拟大鼠肺泡巨噬细胞炎症合并糖皮质激素治疗的条件下,阐明Bcl-2相关抗凋亡蛋白-1(BAG-1)的表达变化及其对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法:Western blot检测脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1表达变化;免疫共沉淀法检测核蛋白中BAG-1与GR相互结合作用;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性。结果:LPS和Dex作用后,细胞总蛋白中BAG-1 L表达增加,BAG-1 S表达无变化;核蛋白中只能检测到BAG-1 L,表达量在LPS作用24 h内逐渐增加;细胞核内BAG-1 L与GR在LPS和Dex作用后存在着相互结合,同时GR转录激活活性逐渐降低,其变化与核蛋白中BAG-1 L表达变化呈负相关。结论:LPS和Dex作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1 L表达增加,与GR结合后共同转核,并抑制GR活性。该机制可能是感染条件下糖皮质激素抵抗的重要因素。 展开更多

关键词 Bel-2相关抗凋亡蛋白-1 糖皮质激素受体 免疫共沉淀 转录活性激活

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研究发现番茄果实中叶绿素代谢调节基因 被引量：1

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《蔬菜》 2020年第6期80-80,共1页

番茄果实成熟过程中伴随着叶绿素的降解及类胡萝卜素和类黄酮的积累。来自重庆大学的科研团队在研究中发现,SlMYB72基因在调节叶绿素、类胡萝卜素和类黄酮代谢方面具有重要作用,为园艺作物改善果实营养提供了潜在的靶点。相关成果于2020... 番茄果实成熟过程中伴随着叶绿素的降解及类胡萝卜素和类黄酮的积累。来自重庆大学的科研团队在研究中发现,SlMYB72基因在调节叶绿素、类胡萝卜素和类黄酮代谢方面具有重要作用,为园艺作物改善果实营养提供了潜在的靶点。相关成果于2020年5月发表在《植物生理学》杂志。番茄基因SlMYB72属于转录因子R2R3-MYB亚家族,位于细胞核内,具有转录激活活性。 展开更多

关键词 园艺作物 番茄果实 类胡萝卜素 转录激活活性 调节基因 果实营养 科研团队 叶绿素

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高粱镉胁迫响应基因 sbbHLH168 的表达特征及生物信息学分析

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作者 于文慧 郑佳 +5 位作者 李杨华 杨明川 王雅利 张子路 龚利娟 康振辉 《安徽农业科学》 CAS 2023年第24期86-92,96,共8页

[目的]以高梁基因sbbHLH168为研究对象,探究其耐镉胁迫发热分子机制,对培育耐镉高粱提供了理论参考。[方法]从高粱品种“BTx623”镉胁迫下转录组数据(RNA-seq)中筛选出一个受镉胁迫后显著上调表达的基因sbbHLH168,使用在线软件对其生物... [目的]以高梁基因sbbHLH168为研究对象,探究其耐镉胁迫发热分子机制,对培育耐镉高粱提供了理论参考。[方法]从高粱品种“BTx623”镉胁迫下转录组数据(RNA-seq)中筛选出一个受镉胁迫后显著上调表达的基因sbbHLH168,使用在线软件对其生物信息进行分析;通过洋葱表皮侵染进行亚细胞定位;构建pGBKT7-sbbHLH168载体验证sbbHLH168基因的转录激活活性;将水培至四叶一心的高粱置于NaCl、PEG、ABA、ACC、GA和JA溶液处理,分别在0、1、12、24和48 h提取RNA,通过RT-qPCR检测sbbHLH168基因的相对表达量。[结果]sbbHLH168基因的开放阅读框长度为567 bp,编码189个氨基酸残基,蛋白分子量为20.55 kD,理论等电点(PI)为8.86,为碱性带正电的蛋白,定位于细胞核,具有较强的转录激活活性。sbbHLH168基因在盐、干旱和植物激素胁迫下表达量整体呈上升趋势,但表达量在不同处理时间存在明显差异。对sbbHLH168基因在不同组织中的表达发现,该基因在高粱的根和叶中均有表达,其中在盐、干旱、ABA、GA和JA胁迫下,sbbHLH168基因在处理12 h时表达量最高。而在ACC处理时,则在处理24 h时表达量最高。[结论]sbbHLH168基因是一个定位在细胞核有转录激活活性的转录因子,属于bHLH家族。 展开更多

关键词 高粱 sbbHLH168 生物信息学分析 表达特征 转录激活活性

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竹节香附素A体外诱导乳腺癌细胞凋亡的作用机制研究 被引量：3

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作者 田朝晖 廖生伟 +1 位作者 夏伟 杨超 《世界中医药》 CAS 2023年第15期2166-2172,共7页

目的:探讨竹节香附素A(RaA)体外抗乳腺癌的作用机制。方法:体外培养乳腺癌细胞(MDA-MB-231),分别用RaA及RaA联合乙酰半胱氨酸(NAC)干预后检测相关蛋白及信号通路的变化情况。结果:与空白组比较,RaA组抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进MDA-MB-... 目的:探讨竹节香附素A(RaA)体外抗乳腺癌的作用机制。方法:体外培养乳腺癌细胞(MDA-MB-231),分别用RaA及RaA联合乙酰半胱氨酸(NAC)干预后检测相关蛋白及信号通路的变化情况。结果:与空白组比较,RaA组抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.01),促进MDA-MB-231细胞线粒体膜电位坍塌,提升MDA-MB-231细胞的活性氧(ROS)水平(P<0.01),提升MDA-MB-231细胞B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)/B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)的比值(P<0.01),上调MDA-MB-231细胞色素C(Cyt-C)、信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)和抑癌基因53(P53)的蛋白水平(P<0.05,P<0.01),下调MDA-MB-231细胞STAT3的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);与RaA组比较,RaA联合NAC组可降低MDA-MB-231细胞的ROS水平(P<0.01),降低MDA-MB-231细胞Bax/Bcl-2的比值(P<0.01),下调MDA-MB-231细胞Cyt-C、活化胱天蛋白酶-3(active CASP3,CCASP3)和P53的蛋白水平(P<0.01),上调STAT3磷酸化水平(P<0.01)。结论:RaA通过激活ROS/STAT3/P53信号通路诱导线粒体凋亡在体外发挥抗乳腺癌作用。 展开更多

关键词 竹节香附素A 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 细胞增殖 细胞凋亡 线粒体途径 活性氧/信号转导及转录激活蛋白3/P53信号通路 乙酰半胱氨酸

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