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转录因子HBP1调控H_2O_2诱导的骨肉瘤细胞生长阻滞过程
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作者 董威 张晓伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期347-353,共7页
为探讨氧化应激对人骨肉瘤细胞增殖的影响及其作用机理,首先用H2O2处理U2OS细胞,采用Western印迹和real-time PCR检测HMG盒转录因子1(HBP1)及其下游靶基因DNMT1和p16表达水平的变化.用荧光素酶报告基因实验检测在H2O2诱导下,HBP1对于DN... 为探讨氧化应激对人骨肉瘤细胞增殖的影响及其作用机理,首先用H2O2处理U2OS细胞,采用Western印迹和real-time PCR检测HMG盒转录因子1(HBP1)及其下游靶基因DNMT1和p16表达水平的变化.用荧光素酶报告基因实验检测在H2O2诱导下,HBP1对于DNMT1和p16启动子的影响.用细胞增殖试验(BrdU掺入,细胞生长曲线)检测H2O2对细胞增殖的影响以及HBP1的作用.用衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测在H2O2诱导的细胞衰老中HBP1所起的作用.Western印迹,real-time PCR及荧光素酶报告基因实验结果显示,细胞经H2O2处理后,明显增高HBP1表达水平,转录抑制DNMT1的表达,促进p16蛋白的表达.细胞增殖实验结果显示,H2O2显著抑制了细胞的增殖,HBP1 knockdown可部分逆转这种抑制作用.SA-β-Gal染色实验说明,H2O2可诱导HBP1表达正常的U2OS细胞衰老,而HBP1 knockdown使这种促衰老作用减弱.研究结果说明,H2O2可抑制人骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞衰老.其作用机制是通过上调转录因子HBP1的表达,转录抑制或促进其下游靶基因DNMT1或p16的表达来抑制细胞增殖,促进细胞衰老. 展开更多
关键词 氧化应激 HMG盒转录因子1(hbp1) 骨肉瘤细胞 基因表达 增殖
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HMG盒转录因子1(HBP1)参与H_2O_2诱导的细胞衰老过程 被引量:2
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作者 姜彬 张晓伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期739-744,共6页
为探讨HMG盒转录因子1(HBP1)在过氧化氢(H2O2)诱导的细胞衰老中所起的作用,通过慢病毒感染得到稳定表达HBP1的MDA-MB-231细胞,以H2O2处理细胞.采用Western免疫印迹杂交试验和实时PCR检测HBP1、p16和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达水平的... 为探讨HMG盒转录因子1(HBP1)在过氧化氢(H2O2)诱导的细胞衰老中所起的作用,通过慢病毒感染得到稳定表达HBP1的MDA-MB-231细胞,以H2O2处理细胞.采用Western免疫印迹杂交试验和实时PCR检测HBP1、p16和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达水平的变化.用荧光免疫试验检测H2O2对HBP1表达的影响,以及HBP1在H2O2的诱导下对于p16和细胞周期蛋白D1启动子的影响.用细胞增殖试验检测H2O2对于细胞增殖的影响.用基因敲减实验和衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测在H2O2诱导的细胞衰老中HBP1所起的作用.Western和免疫荧光实验结果显示,细胞经H2O2处理后,HBP1表达增高的同时促进了p16的表达,降低了细胞周期蛋白D1的表达.细胞增殖实验结果显示,H2O2显著抑制了细胞的增殖.基因敲减实验和SA-β-Gal染色实验说明,H2O2可诱导HBP1表达正常的MDA-MB-231细胞衰老,而HBP1的敲减则抑制了H2O2诱导的细胞衰老过程.本研究结果提示,在H2O2诱导的衰老中,HBP1的表达显著增加,并通过促进衰老相关基因p16的表达和抑制生长因子cyclinD1的表达来阻碍细胞增殖,促进细胞衰老.HBP1在H2O2诱导的细胞衰老过程中起着重要作用,H2O2诱导的细胞衰老必须在HBP1存在的情况下才能发生. 展开更多
关键词 HMG盒转录因子1(hbp1) P16 细胞周期蛋白D1 衰老 过氧化氢处理
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慢病毒载体pITA-HBP1的制备及感染效率的测定
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作者 陈月萍 杜毅聪 +2 位作者 董威 王维斌 张晓伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1044-1049,共6页
慢病毒载体是目前基因治疗中研究较多的载体,与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较,它有感染非分裂期细胞及容纳大片段外源性目的基因等优点.本文应用基因重组的方法,构建了1种新型的慢病毒载体,并将转录因子HBP1基因插入到这一... 慢病毒载体是目前基因治疗中研究较多的载体,与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较,它有感染非分裂期细胞及容纳大片段外源性目的基因等优点.本文应用基因重组的方法,构建了1种新型的慢病毒载体,并将转录因子HBP1基因插入到这一载体上,成为pITA-HBP1.检测其在人的肿瘤细胞和正常细胞中的转染效率,发现转染效率明显增加,Western印迹证实外源基因得到高效表达.这一结果,对今后实验室提高基因的转染效率、表达水平,以及研究基因的表达调控,都提供了重要的技术方案. 展开更多
关键词 慢病毒载体 转录因子hbp1 感染效率
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