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提高重组型腺相关病毒转导效率的研究现状 被引量:3
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作者 殷子斐 王丽娜 +1 位作者 王园 凌晨 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期49-59,共11页
重组型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,r AAV)载体是目前基因治疗研究中常用的、非常有前景的载体之一。欧洲第一个批准上市的基因治疗药物正是基于r AAV。然而,r AAV的转导效率相对有限,导致其治疗成本过高;且过高剂量... 重组型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,r AAV)载体是目前基因治疗研究中常用的、非常有前景的载体之一。欧洲第一个批准上市的基因治疗药物正是基于r AAV。然而,r AAV的转导效率相对有限,导致其治疗成本过高;且过高剂量的r AAV可以激发人体的免疫反应,降低其疗效。因此,如何提高r AAV的转导效率一直是基因治疗领域研究的热点之一。目前常用的提高r AAV转导效率的方法有:使用组织特异性强的血清型/变体、应用蛋白酶体抑制剂、突变衣壳蛋白表面裸露氨基酸、增加单链DNA的第二链合成、构建自身互补型双链载体等。就这些方法各自的原理、应用现状及优劣势进行系统地综述。 展开更多
关键词 重组腺相关病毒载体 基因治疗 转导效率
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绿色荧光蛋白基因在白血病细胞K562中的转导效率
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作者 白元松 孙延霞 +1 位作者 刁建东 卢振霞 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期135-137,F0003,共4页
目的:探讨慢病毒载体在白血病细胞中的基因转导效率,为白血病基因治疗提供关键依据。方法:应用1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)改造而成的第3代自身失活(SIN)慢病毒载体(lentiviral vector)系统,与鼠白血病病毒(MLV)SIN载体进行比较,通过荧... 目的:探讨慢病毒载体在白血病细胞中的基因转导效率,为白血病基因治疗提供关键依据。方法:应用1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)改造而成的第3代自身失活(SIN)慢病毒载体(lentiviral vector)系统,与鼠白血病病毒(MLV)SIN载体进行比较,通过荧光显微镜观察细胞内标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况,应用流式细胞术检测基因导入细胞百分比,评价两种载体系统在人白血病细胞系K562中的基因转导效率。结果:通过荧光显微镜可定性观察GFP在K562细胞中的表达情况,在同样的基因转导条件下,HIV载体转导的白血病细胞中被转导的标记基因GFP的表达强度及GFP阳性细胞数明显高于MLV载体转导的细胞。流式细胞仪定量检测HIV载体的转导效率接近100%,而MLV低于40%,两组间转导效率比较差异有显著性(P<0.05)。结论:基于慢病毒载体基因转导的高效性,该载体系统可作为白血病细胞基因转导的极好工具。 展开更多
关键词 白血病 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 基因转导效率
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重组腺相关病毒对NK92细胞的转导条件优化
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作者 沈晓丽 周群刚 +3 位作者 郑然 沈湘君 邱香 李泰明 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期115-121,共7页
为提高重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)对NK92细胞的转导效率,对转导细胞密度、培养基中IL-2浓度、rAAV血清型和用量进行优化;此外,用不同浓度的促进剂(ZnCl_(2)、氯喹、聚乙烯醇和金雀异黄酮)溶液处理细胞,... 为提高重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)对NK92细胞的转导效率,对转导细胞密度、培养基中IL-2浓度、rAAV血清型和用量进行优化;此外,用不同浓度的促进剂(ZnCl_(2)、氯喹、聚乙烯醇和金雀异黄酮)溶液处理细胞,以进一步提高病毒转导效率。结果表明,在细胞密度为5×10^(5)时,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达效率相对较高;当培养基中IL-2的浓度为1000 IU/mL时,NK92的细胞生长状态最适合病毒转导;不同血清型rAAV对NK92细胞的转导效率由高到低依次为rAAV6、rAAV2和rAAV9;用金雀异黄酮预处理NK92细胞,能够显著提高病毒转导效率,而其他促进剂的添加对病毒转导效率无显著影响。通过上述条件的优化,显著提高了rAAV对NK92细胞的转导效率,为rAAV载体介导工程化NK92细胞奠定基础。 展开更多
关键词 NK92细胞 腺相关病毒 转导效率
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聚乙烯亚胺促进腺病毒体外基因表达 被引量:1
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作者 颜丹萍 张洪 马频 《医药导报》 CAS 2017年第8期862-864,共3页
目的筛选较合适相对分子质量的聚乙烯亚胺(PEI)用于提高腺病毒载体基因表达效率。方法首先以物理吸附法使PEI与腺病毒相吸附,用噻唑蓝(MTT)法考察PEI-600、PEI-1 800、PEI-25 000复合腺病毒对细胞的毒性;利用体外A549细胞转导实验确定PE... 目的筛选较合适相对分子质量的聚乙烯亚胺(PEI)用于提高腺病毒载体基因表达效率。方法首先以物理吸附法使PEI与腺病毒相吸附,用噻唑蓝(MTT)法考察PEI-600、PEI-1 800、PEI-25 000复合腺病毒对细胞的毒性;利用体外A549细胞转导实验确定PEI-600、PEI-1 800和PEI-25 000复合腺病毒的最佳剂量比,并对复合物的Zeta电位和粒径分布进行考察分析。结果 MTT实验证明PEI相对分子质量越大,细胞毒性越大,其中PEI-25 000毒性最大;细胞转导试验中,PEI-1 800相对于PEI-600和PEI-25 000更显著促进腺病毒基因在A549细胞中的表达;Zeta电位测定结果显示PEI可以将腺病毒的表面负电荷转变为表面正电荷的粒子。结论在3种聚合物/腺病毒的复合物中,细胞毒性与聚合物的相对分子质量和浓度呈正相关。相对分子质量越大,浓度越大则聚合物对细胞毒性越大。 展开更多
关键词 聚乙烯亚胺 分子质量 相对 腺病毒 转导效率
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