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分子技术对表达GFP转基因胚胎的再检测
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作者 肖红卫 郑新民 +3 位作者 李莉 陈思怀 张涌 魏庆信 《湖北农业科学》 北大核心 2006年第2期144-146,共3页
把经脂质体包埋的含CD59基因的重组质粒pEGFP-CD59注进小鼠睾丸组织和小鼠的输精管中,分别过1个月和7d与经过超排处理的母鼠交配,在胚胎发育的不同发育时期冲出胚胎于荧光显微镜下观察,显出荧光的转基因小鼠胚胎经PCR和Southern杂交检... 把经脂质体包埋的含CD59基因的重组质粒pEGFP-CD59注进小鼠睾丸组织和小鼠的输精管中,分别过1个月和7d与经过超排处理的母鼠交配,在胚胎发育的不同发育时期冲出胚胎于荧光显微镜下观察,显出荧光的转基因小鼠胚胎经PCR和Southern杂交检测确认,转基因小鼠胚胎阳性率为11%(3/27)。表明GFP基因不能完全准确地反映转基因的情况,需要用PCR结合Southern杂交方法对表达绿色荧光蛋白转基因胚胎进行再检测。 展开更多
关键词 PCR SOUTHERN杂交 绿色荧光蛋白 转基因胚胎
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猪前脂肪细胞为核供体生产表达绿色荧光蛋白的转基因克隆胚胎 被引量:2
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作者 潘登科 万荣 +4 位作者 刘吉 牟玉莲 张莉 李奎 冯书堂 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1389-1393,共5页
分离培养了成年猪前脂肪原代细胞,并对前脂肪细胞向成熟脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色法鉴定了脂肪细胞。利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染前脂肪细胞,经过G418筛选获得了阳性细胞株。然后分别以前脂肪细胞、转绿色荧光蛋白(G... 分离培养了成年猪前脂肪原代细胞,并对前脂肪细胞向成熟脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色法鉴定了脂肪细胞。利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染前脂肪细胞,经过G418筛选获得了阳性细胞株。然后分别以前脂肪细胞、转绿色荧光蛋白(GFP)前脂肪细胞及胎儿成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植,结果表明:前脂肪细胞(8.8%)和胎儿成纤维细胞(8.3%)的囊胚发育率无显差异著(P>0.05);与前脂肪细胞相比,转基因前脂肪细胞的囊胚发育率降低,但差异不显著(3.7%vs.8.8%,P>0.05)。前脂肪细胞为核供体生产转基因克隆胚胎,能够获得转基因囊胚。虽然囊胚发育率不高,但为生产脂肪细胞转基因克隆猪奠定了基础。 展开更多
关键词 前脂肪细胞 油红O染色 绿色荧光蛋白 转基因胚胎
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转基因奶牛胚胎移植技术的试验研究 被引量:2
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作者 薛建华 周高峰 +5 位作者 赵鹏 吴胜权 朱玉林 李艳华 戴蕴平 李荣 《中国奶牛》 2010年第9期23-26,共4页
2006年6月至2010年3月以来,北京奶牛中心与中国农业大学合作,在北京奶牛中心良种场开展了转基因牛胚胎移植试验研究。本试验利用中国农业大学培育的转基因母牛作为供体,进行超数排卵生产体内胚胎,将获得的胚胎移植给15~15.5月龄荷斯坦... 2006年6月至2010年3月以来,北京奶牛中心与中国农业大学合作,在北京奶牛中心良种场开展了转基因牛胚胎移植试验研究。本试验利用中国农业大学培育的转基因母牛作为供体,进行超数排卵生产体内胚胎,将获得的胚胎移植给15~15.5月龄荷斯坦母牛受体。截止2010年3月21日,累计移植转基因奶牛胚胎87枚,移植受体牛87头,妊娠48头,移植妊娠率为55.17%;产犊43头,成活34头,犊牛成活率为79%;经中国农业大学研究人员检测,有14头公牛携带转入目的基因,这14头公牛已全部进入北京市种公牛站饲养。目前,有10头公牛到了试采精月龄,精液经农业部牛冷冻精液质量监督检验测试中心(北京)检测,质量符合国家标准。 展开更多
关键词 转基因奶牛胚胎 受体牛 胚胎移植 情期受胎率 犊牛成活率 转基因二代牛
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显微注射对绵羊体外受精胚胎的影响
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作者 张家新 雷蕾 +5 位作者 牛志宏 玛依拉 黄俊成 宋晓兰 赵文胜 郭志勤 《草食家畜》 2001年第3期1-4,共4页
本文研究了显微注射对绵羊体外受精胚胎发育的影响。显微注射组和对照组的囊胚率分别为 9.1%和 32 .2 % (P <0 .0 5 ) ;利用慢速冷冻的方法 ,显微注射组和对照组的囊胚的冷冻解冻后的存活率没有差异 (分别为 75 .5 %和 77.7% ,P >... 本文研究了显微注射对绵羊体外受精胚胎发育的影响。显微注射组和对照组的囊胚率分别为 9.1%和 32 .2 % (P <0 .0 5 ) ;利用慢速冷冻的方法 ,显微注射组和对照组的囊胚的冷冻解冻后的存活率没有差异 (分别为 75 .5 %和 77.7% ,P >0 .0 5 )。显微注射组和对照组的冷冻胚胎移植后的产羔率分别为 2 5 .0 %和 33.3% (P >0 .0 5 )。结果表明 ,绵羊合子原核显微注射外源DNA后的发育能力下降 。 展开更多
关键词 绵羊 转基因胚胎 原核显微注射 冷冻 体外受精 胚胎发育
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巴西橡胶树抗氧化胁迫基因—超氧物歧化酶基因的遗传转化及植株再生 被引量:1
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作者 R.Jayashree 田郎 《世界热带农业信息》 2009年第6期3-13,共11页
本研究采用农杆菌介导法成功实现巴西橡胶树(Hevea Brasiliensis Muell.Arg)的遗传转化及植株再生。试验中以橡胶树未成熟花药的愈伤组织为转化材料,并通过与含有巴西橡胶树超氧物歧化酶基因(HbSOD)表达载体的根癌农杆菌进行共培养最终... 本研究采用农杆菌介导法成功实现巴西橡胶树(Hevea Brasiliensis Muell.Arg)的遗传转化及植株再生。试验中以橡胶树未成熟花药的愈伤组织为转化材料,并通过与含有巴西橡胶树超氧物歧化酶基因(HbSOD)表达载体的根癌农杆菌进行共培养最终获得转基因植株。所用表达载体为CaMV 35S启动子控制下的组成型质粒表达载体,其中带有GUS(β—葡糖醛酸酶,uidA)报告基因,nptⅡ(新霉素磷酸转移酶)选择性标记基因,以及HbSOD(巴西橡胶树超氧物歧化酶)目的基因。为了进一步优化转化体系,试验中还就共培养时间,共培养基成分,以及卡那霉素浓度等因子对转化效果的影响进行了系统性的比较研究和分析。其结果显示,在卡那霉素浓度为300mg/L的培养基上存活的转化愈伤呈现出强烈的GUS阳性反应。之后,这些转化愈伤在含有2.0mg/L精胺及0.1mg/L脱落酸的MS2培养基上再生出体细胞胚胎。然后,成熟胚胎在附加0.2mg/L赤霉酸、0.2mg/L细胞分裂素,以及0.1mg/L吲哚-3-乙酸的MS4培养基上得以继续萌发并进一步发育成小植株。试验中所得转化频率为4%。转化植株在形态上与非转化植株相似。GUS组织学分析显示,GUS基因在转基因植株的胚胎及叶片中均得到表达。PCR(多聚酶链式反应)扩增及基因组Southern印迹杂交分析进一步证实了转基因植株基因组中uidA、nptⅡ及HbSOD基因的存在。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 遗传转化 巴西橡胶树 体细胞胚胎发生.转基因植株
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