数字PCR和荧光定量PCR检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数方法的建立及其应用 被引量：3

1

作者 谢秀菊 夏启玉 +7 位作者 刘帅 麦贤俊 贾瑞宗 郭安平 徐志胜 李峰 孔祥义 赵辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期663-673,共11页

传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛... 传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛选出2个单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770,以已知外源基因为单拷贝整合的转基因番木瓜为参照,利用数字PCR鉴定其拷贝数,进一步以其为内参基因,以番木瓜转基因育种常用的筛选标记基因NPTⅡ为外源目的基因,建立利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。结果表明:Cpa03g018830和Cpa03g018770均为单拷贝基因;建立的数字PCR方法对转基因番木瓜中的外源基因拷贝数的检测准确可靠,而荧光定量PCR对转基因番木瓜中外源基因单低拷贝整合的检测准确度较高,对外源基因多拷贝整合的检测准确度则较低,因此,荧光定量PCR适合用来在大量转基因植株中初筛出单低拷贝整合的植株。本研究鉴定的单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770可作为转基因番木瓜中外源基因拷贝数检测的内参基因,且建立的利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法,操作简单,速度快,适合批量检测,可为番木瓜转基因抗病育种中单低拷贝株系的选育提供新的方法。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 拷贝数 内参基因 数字PCR 荧光定量PCR

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转基因番木瓜的抗病性及分子鉴定 被引量：19

2

作者 叶长明 魏祥东 +2 位作者 陈东红 蓝崇钰 朱利民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期181-184,共4页

对T1代转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶(RP)突变体基因的两个番木瓜株系,进行了抗病性和分子生物学分析。结果表明,转基因番木瓜对PRV抗性达到高抗或免疫,目的基因RP遗传至转基因后代并在RNA水平表达,PCR可检测到CaMV35S启动子序列、标记基... 对T1代转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶(RP)突变体基因的两个番木瓜株系,进行了抗病性和分子生物学分析。结果表明,转基因番木瓜对PRV抗性达到高抗或免疫,目的基因RP遗传至转基因后代并在RNA水平表达,PCR可检测到CaMV35S启动子序列、标记基因NPTII。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 抗病性 检测 分子鉴定

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转基因番木瓜“华农一号”事件特异性定性PCR检测方法的建立 被引量：11

3

作者 姜大刚 周峰 +2 位作者 姚涓 穆虹 梅曼彤 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期37-41,共5页

以我国自主研发的转基因抗环斑病毒番木瓜"华农一号"为研究对象,应用TAIL-PCR技术,用载体中靠近右边界的Nos启动子序列设计特异引物,扩增插入的旁邻序列;根据测序结果,设计了产物长度分别为753和298 bp但均跨越转化载体和番... 以我国自主研发的转基因抗环斑病毒番木瓜"华农一号"为研究对象,应用TAIL-PCR技术,用载体中靠近右边界的Nos启动子序列设计特异引物,扩增插入的旁邻序列;根据测序结果,设计了产物长度分别为753和298 bp但均跨越转化载体和番木瓜基因组序列的2套特异引物,对"华农一号"进行检测,证明其可特异地把"华农一号"从转基因番木瓜品系中检测出来;2对引物的检测灵敏度都可以达到0.05%的标准,高于欧盟0.9%的检测要求;利用2对特异引物对"华农一号"的果肉、果皮、种子进行检测,可得到特异性良好的扩增. 展开更多

关键词 转基因番木瓜 TAIL-PCR “华农一号” 事件特异性检测

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采用多重PCR技术检测转基因番木瓜华农一号 被引量：5

4

作者 白卫滨 曹春廷 +4 位作者 朱翠娟 文罗娜 吴贤权 欧仕益 孙建霞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期165-169,共5页

为了建立针对转基因番木瓜华农一号简便、快速、高灵敏度的多重PCR技术,用DP305植物基因组试剂盒方法提取3种转基因番木瓜(Event 55-1、GM-YK和华农一号)和非转基因番木瓜(台农2号)样品DNA,以木瓜蛋白酶基因(Papain)作为内参基因,进行... 为了建立针对转基因番木瓜华农一号简便、快速、高灵敏度的多重PCR技术,用DP305植物基因组试剂盒方法提取3种转基因番木瓜(Event 55-1、GM-YK和华农一号)和非转基因番木瓜(台农2号)样品DNA,以木瓜蛋白酶基因(Papain)作为内参基因,进行了单重PCR技术引物特异性验证,多重PCR方法条件摸索及引物的灵敏度确定。结果表明∶5对特异性引物(CP、35s、NPTII、Papain、RP)得到相应的不同大小单一条带,其大小分别103、166、213、281、369 bp,说明引物具有特异性;建立了检测转基因番木瓜华农一号的五重PCR检测技术,检测限为0.2 ng。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 华农一号 通用引物 多重PCR

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PRSV-CP转基因番木瓜表达与抗病能力关系的研究 被引量：15

5

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1996年第2期77-83,共7页

利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ... 利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜中的表达量，最后通过大田攻毒试验检测了ＲＮＡ、蛋白质的表达量与抗病能力的关系。 展开更多

关键词 番木瓜 转基因番木瓜 杂交 抗病性

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PRV-CP-SN转基因番木瓜表达与抗病能力的研究 被引量：9

6

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1996年第2期84-87,共4页

通过ＲＮＡ斑点杂交和酶联吸附免疫试验等技术定性地分析了ＰＲＶ－ＣＰ－ＳＮ转基因番木瓜的表达，又通过大田接种攻毒试验检验了ＰＲＶ－ＣＰ－ＳＮ转基因番木瓜的抗病能力，这为定量分析表达量和抗病能力关系研究奠定了理论的基础。

关键词 番木瓜 转基因番木瓜 杂交 抗病性

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T4转基因番木瓜遗传性和果实品质分析 被引量：1

7

作者 魏祥东 蓝崇钰 +1 位作者 卢志菁 叶长明 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期3301-3306,共6页

对T4代转基因番木瓜进行了分子生物学和果实品质分析,结果表明,筛选获得的转基因番木瓜均为转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶突变体基因(RP),且对PRV抗性达到了高抗或免疫,RP基因在转基因植物中能稳定遗传至后代并在RNA水平上表达.在田间种... 对T4代转基因番木瓜进行了分子生物学和果实品质分析,结果表明,筛选获得的转基因番木瓜均为转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶突变体基因(RP),且对PRV抗性达到了高抗或免疫,RP基因在转基因植物中能稳定遗传至后代并在RNA水平上表达.在田间种植时,转基因木瓜的生长状况普遍好于普通番木瓜,尤其在生长后期(10月以后),普通番木瓜100%发病(大规模种植时),而大部分(约91.8%)转基因植株生长良好,果实较多且表面光洁、基本上无环斑.与非转基因亲本相比,T4代转基因番木瓜的果实长度增加2.6%～5%,果实直径变小0.6%～1.5%,果肉厚度增加了12%～15%,因而果实形状与亲本相近或更好,且信用价值更高.转基因番木瓜果实中水分、蛋白质、氮、脂肪、还原性糖、维生素A、维生素C和类胡萝卜素的含量与对照都无显著性差异,即转基因番木瓜与亲本具有实质等同性,这表明转入的外源基因对番木瓜果实品质没有不良影响. 展开更多

关键词 转基因番木瓜 分子检测 果实品质

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转基因番木瓜55-1品系的环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：1

8

作者 夏启玉 李美英 +4 位作者 肖苏生 贺萍萍 杨小亮 张雨良 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期308-316,共9页

根据55-1的品系特异性序列设计了5套LAMP引物,筛选扩增效率高的引物。对筛选到的LAMP引物的反应温度和反应体系进行了优化,并进行了特异性、灵敏度和稳定性的实验。结果表明,该套LAMP引物的特异性和稳定性良好,灵敏度为0.05%,最快能在30... 根据55-1的品系特异性序列设计了5套LAMP引物,筛选扩增效率高的引物。对筛选到的LAMP引物的反应温度和反应体系进行了优化,并进行了特异性、灵敏度和稳定性的实验。结果表明,该套LAMP引物的特异性和稳定性良好,灵敏度为0.05%,最快能在30 min内得到检测结果。建立的LAMP检测方法能有效地检测转基因番木瓜55-1品系,既简化了检测步骤,又缩短了检测时间,为转基因番木瓜的快速检测提供了技术支撑。 展开更多

关键词 转基因番木瓜55-1 环介导等温扩增 特异性检测

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PRSV—外壳蛋白基因在转基因番木瓜中的表达 被引量：3

9

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1995年第S1期36-39,共4页

用酶联免疫吸附试验（ＥｎｚｙｍｅｌｔｉｎｋｃｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｒｎｔＡｓｓａｙ　ＥＬＩＳＡ）和蛋白质免疫印迹技术（ｗｅｓｔｅｒｍｂｌｏｔ）．对番木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ－ＣＰ）基因转基因植株进行表达蛋白的检... 用酶联免疫吸附试验（ＥｎｚｙｍｅｌｔｉｎｋｃｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｒｎｔＡｓｓａｙ　ＥＬＩＳＡ）和蛋白质免疫印迹技术（ｗｅｓｔｅｒｍｂｌｏｔ）．对番木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ－ＣＰ）基因转基因植株进行表达蛋白的检测。ＥＬＩＳＡ的结果表明，外壳蛋白基因已在转基因番木瓜中表达；ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明，外壳蛋白基因在转基因植株中的表达产物具有与天然蛋白同样的大小及相同的血清学反应。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 环斑病毒外壳蛋白 酶联免疫吸附试验 蛋白质免疫印迹

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抗病毒转基因番木瓜及其安全性问题 被引量：7

10

作者 李世访 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期59-63,共5页

本文对番木瓜生产上存在的病害问题、转基因番木瓜的研发、转基因番木瓜国际竞争的动态与趋势、转基因番木瓜的安全性、转基因木瓜的标识等几个方面进行综述。

关键词 转基因番木瓜 病毒 安全性

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转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法

11

作者 潘志文 陈伟庭 +4 位作者 高洁儿 周峰 姚涓 王声斌 姜大刚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期286-294,共9页

转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步。为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要。建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清。在完成不同番木瓜样品的基因... 转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步。为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要。建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清。在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后,对获得的DNA进行PCR检测验证。普通PCR验证结果显示,本方法制备的叶片和果肉基因组DNA溶液稀释5倍时,PCR扩增条带清晰,更高稀释倍数时,叶片基因组DNA扩增条带强于果肉基因组DNA;实时荧光PCR验证结果显示,叶片基因组DNA的PCR扩增效率位于合理区间。灵敏度测试结果表明,含量低至0.1%的叶片和果肉样品,内标准基因和外源基因特异性片段普通PCR和实时荧光PCR均能得到预期扩增,且重复性较好。本研究建立的番木瓜基因组DNA快速制备与PCR方法效果良好,体系稳定。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 DNA制备 PCR 检测方法

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转基因番木瓜pUC57-Papaya质粒标准分子的构建与适用性研究

12

作者 潘志文 陈伟庭 +2 位作者 姚涓 王声斌 姜大刚 《计量学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期422-429,共8页

构建了含番木瓜2个内标准基因、4个筛选靶标及3个转化体特异性片段的质粒分子pUC57-Papaya,进行了适用性验证实验。应用普通PCR和实时荧光定量PCR对其进行互换性评估;使用质粒分子对2个样品进行转基因含量测定。结果显示:质粒分子全部9... 构建了含番木瓜2个内标准基因、4个筛选靶标及3个转化体特异性片段的质粒分子pUC57-Papaya,进行了适用性验证实验。应用普通PCR和实时荧光定量PCR对其进行互换性评估;使用质粒分子对2个样品进行转基因含量测定。结果显示:质粒分子全部9个目的片段按照设计排列,序列完全一致;全部9个基因片段普通PCR和实时荧光PCR方法均能正确扩增得到预期结果,特异性、灵敏度与基因组DNA一致;全部9个基因构建标准曲线做定量测试时,与基因组DNA标准曲线斜率无显著差异,线性相关系数均大于0.99,其中内标准基因Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段的截距无差异;利用质粒分子测量2个样品的Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段拷贝数,计算转基因含量,结果与基因组DNA一致;测序结果显示各片段拷贝数比值为1,质粒DNA拷贝数浓度为(2.54±0.10)×10^(6)copies/μL。构建的标准质粒分子可代替基因组DNA用于定量检测,也可作为转基因番木瓜定性和定量检测用标准物质。 展开更多

关键词 计量学 转基因番木瓜 质粒标准分子 核酸标准物质

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转基因番木瓜检测方法的建立

13

作者 王恒波 余泽怀 +2 位作者 肖乃衍 张华 陈平华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1198-1200,共3页

番木瓜(Carica papaya)是一种有较高食用和药用价值的草本果树,番木瓜蛋白酶广泛应用于医药、美容、日化品等行业[1]。番木瓜环斑花叶病毒(PRSV)是危害番木瓜生产的一种世界性病毒,植株受到侵染后,无法进行有效治疗,目前的化学杀菌剂不... 番木瓜(Carica papaya)是一种有较高食用和药用价值的草本果树,番木瓜蛋白酶广泛应用于医药、美容、日化品等行业[1]。番木瓜环斑花叶病毒(PRSV)是危害番木瓜生产的一种世界性病毒,植株受到侵染后,无法进行有效治疗,目前的化学杀菌剂不能有效控制其蔓延[2]。培育抗病品种是防治环斑花叶病毒最紧迫的任务之一,但番木瓜栽培品种中缺乏有效抗病基因资源[3]。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 筛选 定性聚合酶链式反应(PCR) 检测

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SYBR-Green实时荧光PCR检测转基因番木瓜 被引量：5

14

作者 刘建越 邓欣 +3 位作者 康林 余道坚 高必达 陈冬美 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期371-374,共4页

分别以RBCL基因和PRSV-CP基因、PRSV-RP基因为内源基因和目标基因,设计了3对特异性引物,对转基因番木瓜进行了SYBRGreen实时荧光PCR检测.结果表明,RBCL基因引物对所有供试样品成功扩增,Ct值为15～16,PRSV-CP引物对转PRSV-CP基因番木瓜... 分别以RBCL基因和PRSV-CP基因、PRSV-RP基因为内源基因和目标基因,设计了3对特异性引物,对转基因番木瓜进行了SYBRGreen实时荧光PCR检测.结果表明,RBCL基因引物对所有供试样品成功扩增,Ct值为15～16,PRSV-CP引物对转PRSV-CP基因番木瓜样品成功扩增,Ct值为20～25,PRSV-RP引物对转PRSV-RP基因番木瓜样品成功扩增,Ct值为21～22.运用熔解曲线进行产物分析,验证了试验结果的特异性和准确性. 展开更多

关键词 转基因番木瓜 番木瓜环斑病毒 SYBR-Green实时荧光PCR 检测

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农民选择转基因番木瓜技术的影响因素分析 被引量：3

15

作者 李晓伟 薛春玲 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期220-222,共3页

利用实证研究的方法,以广东广州番禺、高要、鹤山、廉江、徐闻、珠海等6个番木瓜主栽地区230户农户的实地调查数据为依据,运用二元Logistic模型对影响农民选择转基因番木瓜技术的主要因素进行计量经济分析。结果表明,农民的年龄、受教... 利用实证研究的方法,以广东广州番禺、高要、鹤山、廉江、徐闻、珠海等6个番木瓜主栽地区230户农户的实地调查数据为依据,运用二元Logistic模型对影响农民选择转基因番木瓜技术的主要因素进行计量经济分析。结果表明,农民的年龄、受教育年限、家庭收入、种植番木瓜的面积和年数、对农业信息的获取以及对转基因技术的认知等因素,对农户选择转基因番木瓜技术具有显著影响。并根据影响程度提出了广泛推广转基因技术的政策建议。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 农民选择 影响因素 LOGISTIC模型

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转基因番木瓜PCR快速检测体系的优化

16

作者 罗琪宇 方扬 +3 位作者 张定鹏 朱鹏 谈凤笑 王建武 《生态科学》 CSCD 2015年第6期36-41,共6页

随着公众对转基因食品安全性的关注,转基因番木瓜的快速检测技术成为关键问题。优化了番木瓜总DNA的提取方法,选用木瓜蛋白酶基因(Papain)作为内源参照基因,建立了转基因番木瓜GM YK和华农一号的双重PCR定性检测方法。通过对广州市超市... 随着公众对转基因食品安全性的关注,转基因番木瓜的快速检测技术成为关键问题。优化了番木瓜总DNA的提取方法,选用木瓜蛋白酶基因(Papain)作为内源参照基因,建立了转基因番木瓜GM YK和华农一号的双重PCR定性检测方法。通过对广州市超市和批发市场222个样品的检验,并与SN/T 2653—2010行业标准对比,证明该方法具有污染少、速度快、成本低的优点。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 品系鉴定 PCR检测 DNA提取

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菲对转基因番木瓜进行大田种植试验

17

作者 汪开治 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第6期47-47,共1页

AgBiotech Reporter2005年22卷3期17页报道：已知环斑病毒是多年来美国夏威夷州番木瓜种植业减产的严重病害。近据菲律宾的非赢利机构菲律宾生物技术联合会（BCP）主席BienvenidoPecson博士宣称，为防止环斑病毒对番木瓜的危害，菲律宾... AgBiotech Reporter2005年22卷3期17页报道：已知环斑病毒是多年来美国夏威夷州番木瓜种植业减产的严重病害。近据菲律宾的非赢利机构菲律宾生物技术联合会（BCP）主席BienvenidoPecson博士宣称，为防止环斑病毒对番木瓜的危害，菲律宾正在培育可有效地抵抗环斑病毒的新的转基因番木瓜品种，并批准对其进行大田种植试验。此外，菲律宾农业、林业和天然资源研究和开发委员会（PCARRD）的科学家已对上述品种的基因进了鉴定。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 种植试验 菲律宾 大田 环斑病毒 生物技术 天然资源 种植业

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美国:食用转基因番木瓜未发现健康问题

18

作者 禾本 《中国果业信息》 2014年第9期40-40,共1页

据美国国家环境保护局（EPA）官员在毛伊县地方议会委员会上表示，从未听说任何因食用转基因彩虹番木瓜而导致的健康问题。但毛伊县的洛林·庞医生对转基因番木瓜持反对意见。称仍存在健康风险报道。该委员会目前正通过投票的方式... 据美国国家环境保护局（EPA）官员在毛伊县地方议会委员会上表示，从未听说任何因食用转基因彩虹番木瓜而导致的健康问题。但毛伊县的洛林·庞医生对转基因番木瓜持反对意见。称仍存在健康风险报道。该委员会目前正通过投票的方式寻找合适的方法，暂停在毛伊岛进行转基因作物的培育，直至转基因作物被公众认为是安全的。委员会听取了来自EPA、夏威夷州农业及健康部门的官员的意见。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 健康问题 食用 美国 转基因作物 环境保护局 委员会 健康风险

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秘鲁开始转基因番木瓜的田间试验

19

《世界热带农业信息》 2011年第8期26-26,共1页

秘鲁计划在2012年进行转基因番木瓜的田间试验。秘鲁国家农业创新研究所的果树专家称，鉴于番木瓜产量的持续减少，转基因番木瓜的田间试验十分必要。

关键词 转基因番木瓜 田间试验 秘鲁 果树专家 农业创新 研究所

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非转基因番木瓜“红日2号”围田区栽培技术要点

20

作者 张守梅 罗金棠 《农村新技术》 2021年第10期18-19,共2页

番木瓜又称木瓜、万寿果,原产南美洲,17世纪传入我国,现主要产区为海南、广东、广西、云南、福建和台湾等地。随着绿色、有机果品成为新的消费趋势,市场对非转基因番木瓜的消费需求量与日俱增,但是非转基因番木瓜品种的种植难度较高,需... 番木瓜又称木瓜、万寿果,原产南美洲,17世纪传入我国,现主要产区为海南、广东、广西、云南、福建和台湾等地。随着绿色、有机果品成为新的消费趋势,市场对非转基因番木瓜的消费需求量与日俱增,但是非转基因番木瓜品种的种植难度较高,需要有完善的避病栽培技术才可获得预期产量。广州市南沙区万顷沙镇为人工围垦而成的河网三角洲平原,属南亚热带季风气候,土壤均为冲积土。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 亚热带季风气候 预期产量 万寿果 栽培技术 有机果品 消费趋势 三角洲平原

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