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转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光定量PCR检测方法建立 被引量:6
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作者 刘二龙 郑冠津 +7 位作者 王毅谦 李志勇 魏霜 关丽军 卢丽 蒋湘 刘金华 王振华 《安徽农业科学》 CAS 2022年第4期102-105,共4页
[目的]为完善我国转基因检测方法体系,建立转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,PCR)检测方法。[方法]根据MON87751的3′端邻接区序列设计特异性引物和探针,建立MON87751品系特异... [目的]为完善我国转基因检测方法体系,建立转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,PCR)检测方法。[方法]根据MON87751的3′端邻接区序列设计特异性引物和探针,建立MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法,并测定该方法的灵敏度、特异性及可重复性。[结果]灵敏度测试显示,其定量下限为40拷贝;重复性试验显示其相对标准偏差在可接受范围内。[结论]该研究建立的MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法特异性良好,灵敏度高,有良好的可重复性,适合对转基因大豆MON87751品系进行检测鉴定。 展开更多
关键词 实时荧光PCR 转基因大豆mon87751 品系特异性
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转基因大豆MON89788双重数字PCR通用定量检测方法的建立 被引量:19
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作者 刘津 李婷 +3 位作者 冼钰茵 吴希阳 凌莉 高东微 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第4期312-319,共8页
建立一种特异、稳定、灵敏、通用的转基因大豆MON89788品系双重数字聚合酶链式反应(digital polymerase chain reaction,d PCR)定量检测方法,在一个体系内同时进行内外源基因的定量检测,适用于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR... 建立一种特异、稳定、灵敏、通用的转基因大豆MON89788品系双重数字聚合酶链式反应(digital polymerase chain reaction,d PCR)定量检测方法,在一个体系内同时进行内外源基因的定量检测,适用于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)和芯片式数字PCR(chip digital PCR,cd PCR)平台,并通过了食品分析能力评价体系国际能力验证项目的盲样检测评价。dd PCR平台对大豆MON89788品系和内源Lectin的绝对定量限分别为8.0 copies/μL和8.2 copies/μL;cd PCR平台对大豆MON89788品系和内源Lectin的绝对定量限分别为7.443 copies/μL和7.646 copies/μL;dd PCR和cd PCR对转基因大豆MON89788品系成分相对含量的相对定量限均为0.1%。 展开更多
关键词 微滴式数字PCR 芯片式数字PCR 转基因大豆mon89788品系 定量检测
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转基因大豆MON89788转化体特异性定性PCR检测 被引量:18
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作者 李飞武 李葱葱 +2 位作者 董立明 邢珍娟 张明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第13期6679-6682,共4页
[目的]建立MON89788大豆转化体特异性定性PCR检测方法。[方法]利用TAIL-PCR技术分离MON89788大豆的3′端旁侧序列,据此序列设计特异性引物进行PCR检测,并对该方法的特异性和灵敏度进行测试。[结果]获得了1142bp的3′端旁侧序列;依据该... [目的]建立MON89788大豆转化体特异性定性PCR检测方法。[方法]利用TAIL-PCR技术分离MON89788大豆的3′端旁侧序列,据此序列设计特异性引物进行PCR检测,并对该方法的特异性和灵敏度进行测试。[结果]获得了1142bp的3′端旁侧序列;依据该序列建立的PCR检测方法能特异性从MON89788大豆中扩增出170bp的产物,检测灵敏度达到0.05%,约为40个起始模板拷贝。[结论]该研究建立的方法特异性强、灵敏度高,可适用于MON89788大豆检测。 展开更多
关键词 转基因大豆 mon89788转化体 定性PCR
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转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:8
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作者 刘欣 张国丛 +2 位作者 周兴虎 祝长青 黄明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第4期193-197,共5页
为实现转基因大豆MON89788的标识管理,针对转基因大豆MON89788的品系特异性序列设计引物和Taq Man探针,建立转基因大豆MON89788实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进... 为实现转基因大豆MON89788的标识管理,针对转基因大豆MON89788的品系特异性序列设计引物和Taq Man探针,建立转基因大豆MON89788实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果显示:建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法能扩增出127 bp的产物,特异性强,灵敏度达到0.1%,约为40个单倍体基因组拷贝,检测重复性好,可成功应用于实际样品检测。因此,建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法可以应用于转基因大豆MON89788大豆及其制品的检测。 展开更多
关键词 转基因大豆 mon89788品系 实时荧光PCR 品系特异性检测 转基因标识
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转基因大豆Mon89788基体标准物质协同实验研究 被引量:5
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作者 张玲 盛灵慧 +4 位作者 王晶 曹应龙 柳方方 隋志伟 卢长明 《计量学报》 CSCD 北大核心 2011年第B12期106-109,共4页
对研制的3个含量水平的转基因大豆Mon89788基体标准物质进行多家实验室的验证研究。研究过程包括转基因大豆中基因组DNA的提取和转基因组分的定量PCR方法确认,标准物质的多家实验室协同实验,以及测最的不确定度评估。多家测定分析结... 对研制的3个含量水平的转基因大豆Mon89788基体标准物质进行多家实验室的验证研究。研究过程包括转基因大豆中基因组DNA的提取和转基因组分的定量PCR方法确认,标准物质的多家实验室协同实验,以及测最的不确定度评估。多家测定分析结果表明,转基因大豆Mon897883种不同外源基因/内源基因含量水平的标准物质参考值和扩展不确定度分别为0.35%±0.17%,0.61%±0.14%,3.17%±1.70%(k=2)。基体为大豆粉的该标准物质可用于转基因大豆含量的定量检测。 展开更多
关键词 计量学 转基因大豆 mon89788 实时荧光定量PCR 基体标准物质
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转基因大豆MON89788检测质粒标准分子的构建与应用 被引量:7
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作者 李飞武 邵改革 +3 位作者 邢珍娟 李葱葱 夏蔚 张明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第23期12330-12333,共4页
[目的]构建适用于转基因大豆MON89788检测的质粒标准分子。[方法]利用定性PCR和连接、转化等分子克隆技术,将大豆内标准基因lectin、MON89788的3′端特异性序列和5′端特异性序列依次克隆到pMD18-T载体上,获得质粒标准分子pMD-LM3M5,并... [目的]构建适用于转基因大豆MON89788检测的质粒标准分子。[方法]利用定性PCR和连接、转化等分子克隆技术,将大豆内标准基因lectin、MON89788的3′端特异性序列和5′端特异性序列依次克隆到pMD18-T载体上,获得质粒标准分子pMD-LM3M5,并进行适用性验证。[结果]获得了3700bp的质粒标准分子,其中重组DNA片段1029bp。该质粒标准分子的定性PCR检测灵敏度达到10copy。[结论]该研究构建的质粒标准分子pMD-LM3M5能替代MON89788基体标准品,用于MON89788大豆及其产品的定性PCR检测。 展开更多
关键词 转基因生物 质粒标准分子 mon89788大豆 转化体特异性检测
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转基因抗虫大豆MON87701品系实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 付海滨 张敏 +3 位作者 吴渺渺 韩宏乾 陈丽静 于洋 《辽宁农业科学》 2016年第4期23-26,共4页
建立Taq Man实时荧光PCR反应检测转基因抗虫大豆MON87701品系的鉴定方法,为转基因大豆MON87701提供科学的检测依据。根据转基因抗虫大豆MON87701品系特异基因序列设计引物和Taqman探针,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结... 建立Taq Man实时荧光PCR反应检测转基因抗虫大豆MON87701品系的鉴定方法,为转基因大豆MON87701提供科学的检测依据。根据转基因抗虫大豆MON87701品系特异基因序列设计引物和Taqman探针,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果表明,本研究设计的引物和探针具有很好的品系鉴定特异性,检测灵敏度可达到0.01%(m/m),检测重复性好。因此,建立的转基因大豆MON87701品系特异Taq Man实时荧光PCR检测方法可快速、准确地鉴定转基因抗虫大豆MON87701品系,可在日常检验中推广应用。 展开更多
关键词 转基因大豆 mon87701品系 实时荧光PCR 品系鉴定
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转基因大豆MON89788芯片式数字PCR定量方法的建立 被引量:6
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作者 杨镇州 刘刚 梁文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期68-73,共6页
针对抗虫耐除草剂大豆转基因品系MON89788,从转基因植物基因组DNA的提取、核酸模板的质量和浓度控制、引物探针的筛选、PCR反应过程的建立等方面建立了一套完整的转基因大豆芯片式dPCR定量检测方法。本实验也对该方法的重复性和定量检... 针对抗虫耐除草剂大豆转基因品系MON89788,从转基因植物基因组DNA的提取、核酸模板的质量和浓度控制、引物探针的筛选、PCR反应过程的建立等方面建立了一套完整的转基因大豆芯片式dPCR定量检测方法。本实验也对该方法的重复性和定量检测限进行考察。10组5%转基因品系大豆MON89788样品定量重复性RSD在1.17%-9.97%之间,均满足国际上转基因定量结果RSD小于25%的要求。用该方法对转基因含量为5%、1%、0.1%的大豆MON89788进行定量检测,其定量结果为5.20%、0.94%和0.11%,RSD分别为6.2%、3.6%和15.2%。该检测方法的定量限达到0.1%,能满足欧盟对转基因定量标识0.9%的要求。将本实验建立的方法用于转基因大豆的定量检测,能为规范我国转基因监管工作的实施提供强有力的技术支撑。 展开更多
关键词 转基因大豆 数字PCR 大豆mon89788
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转基因大豆MON87701品系qPCR和3D-dPCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 温洪涛 杨洋 +4 位作者 丁一佳 张晓磊 关海涛 李亮 张瑞英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期212-219,共8页
转基因大豆MON87701是由孟山都公司研发的商业化抗虫大豆品系,目前已在17个国家广泛应用。为建立适用于MON87701大豆的高效检测方法,本研究基于实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitive PCR, qPCR)和芯片式数字PCR(3D digita... 转基因大豆MON87701是由孟山都公司研发的商业化抗虫大豆品系,目前已在17个国家广泛应用。为建立适用于MON87701大豆的高效检测方法,本研究基于实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitive PCR, qPCR)和芯片式数字PCR(3D digital PCR, 3D-dPCR)平台,对44种不同转基因材料进行测试,建立双重定量检测方法。研究结果显示:只在转基因大豆MON87701样品中获得了阳性结果,证实该方法中引物和探针组合具有较高的特异性。进一步对2%、0.9%、0.09%和0.02%不同含量的MON87701转基因大豆进行定量测试,建立的qPCR和3D-dPCR两种方法的定量限均达到0.09%,检出限均达到0.02%,两者并无明显差别,但由于3D-dPCR和qPCR相比不需要标准物质制作标准曲线,并且对DNA提取质量要求更低,因此使用起来更加便捷高效,为转基因检测提供了新的方法和思路。 展开更多
关键词 转基因大豆 mon87701 定量检测 qPCR 3D-dPCR
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