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转化生长因子-β3基因重组腺病毒载体的构建及表达 被引量:2
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作者 邱林 吴清华 +1 位作者 肖军 李明勇 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期668-672,共5页
目的:构建含有转化生长因子-β3(Transforming growth factor-β3,TGF-β3)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒载体,使其转染兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),并在细胞内得到表... 目的:构建含有转化生长因子-β3(Transforming growth factor-β3,TGF-β3)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒载体,使其转染兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),并在细胞内得到表达。方法:将含有TGF-β3基因克隆至含有EGFP的穿梭质粒,通过在感受态菌DH5α内同源重组,构建pAdxsi-EGFP-TGF-β3。PacⅠ酶切线性化pAdxsi-EGFP-TGF-β3转染HEK293细胞,多轮"乒乓感染法"扩增收集pAdxsi-EGFP-TGF-β3病毒液,氯化铯梯度离心纯化,PCR和荧光显微镜观察EGFP的表达并检测重组腺病毒液的滴度。测定重组腺病毒液转染MSCs细胞转染效率,Western blot检测TGF-β3蛋白表达。结果:成功构建携带TGF-β3和EGFP的重组腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3,PCR和绿色荧光证实病毒包装成功,并具有感染力,病毒滴度为2×1010pfu/ml。Western blot检测表明Adxsi-EGFP-TGF-β3感染的兔骨髓MSCs细胞有效表达TGF-β3。结论:含有TGF-β3和EGFP的腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3构建成功和TGF-β3蛋白在兔骨髓MSCs中有效表达,为进一步研究转染TGF-β3基因的兔骨髓MSCs减轻创面愈合后瘢痕组织增生提供实验基础。 展开更多
关键词 转化生长因子-β3基因 增强型绿色荧光蛋白 腺病毒载体
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转化生长因子-β_3对肝纤维化的影响 被引量:2
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作者 曾玲 彭英铭 +1 位作者 沈鸿彬 安海燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第7期1190-1191,共2页
肝纤维化是各种慢性肝损伤常见和共同的病理转归.是细胞外基质(extracellularmatrix.ECM)各成分合成与降解的失衡而致纤维组织在肝内过量沉积的结果,属可逆性病变。若进一步发展则致不可逆的肝小叶结构改建、假小叶和结节形成(肝... 肝纤维化是各种慢性肝损伤常见和共同的病理转归.是细胞外基质(extracellularmatrix.ECM)各成分合成与降解的失衡而致纤维组织在肝内过量沉积的结果,属可逆性病变。若进一步发展则致不可逆的肝小叶结构改建、假小叶和结节形成(肝硬化阶段)。 展开更多
关键词 转化生长因子-β3 肝纤维化 细胞外基质 慢性肝损伤 可逆性病变 纤维组织 病理转归 结节形成
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Mmu-circRNA_016901对骨髓间充质干细胞放射敏感性的影响 被引量:1
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作者 张军华 文贤慧 +3 位作者 黄蓉 陈赛 刘凤霞 桂嵘 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1032-1037,共6页
目的:探索mmu-circ RNA016901对调控骨髓间充质干细胞放射损伤的作用及其机制,方法:通过用不同剂量X射线辐照骨髓间充质干细胞,检测不同剂量处理后骨髓间充质干细胞内mmu-circ RNA016901表达水平,利用荧光素酶报告基因检测验证mi RNA124... 目的:探索mmu-circ RNA016901对调控骨髓间充质干细胞放射损伤的作用及其机制,方法:通过用不同剂量X射线辐照骨髓间充质干细胞,检测不同剂量处理后骨髓间充质干细胞内mmu-circ RNA016901表达水平,利用荧光素酶报告基因检测验证mi RNA1249-5p为mmu-circ RNA016901的靶点,免疫共沉淀实验验证mi RNA1249-5p为TGF-β3的靶点,调节mmu-circRNA01690表达水平后,检测转化生长因子-β3(transforming growth factor-β, TGF-β3)的表达和细胞增殖情况。结果:当辐照剂量<6 Gy时,不同辐照剂量处理的骨髓间充质干细胞,mmu-circ RNA016901表达差异显著,具有统计学意义(P<0.05),荧光素酶报告基因检测和免疫共沉淀实验证实mmu-circ RNA016901可特异性结合mi RNA1249-5p,过表达mmu-circ RNA016901可以负性调节mi RNA1249-5p,可导致TGF-β3表达明显升高,且促进细胞增殖。结论:mmu-circRNA016901通过miRNA1249-5p影响TGF-β3的表达,从而参与调节骨髓间充质干细胞放射损伤机制。 展开更多
关键词 mmu-circRNA_016901 miRNA1249-5p 转化生长因子-β3 辐照 骨髓间充质干细胞
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C57BL/6J小鼠腭发育过程中电信号的时空变化规律 被引量:2
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作者 段世均 董书侠 +1 位作者 郑谦 伍俊 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期755-760,共6页
目的:探讨C57BL/6J小鼠腭发育过程中生物电信号的时空变化规律,以及膜电位变化对腭发育的影响。方法:在E12.5、E13.5、E14.5、E15.5断颈处死孕鼠获取腭胚突,使用DiBAC4(3)进行染色,观察腭发育过程中电信号的变化。然后进行体外培养,10μ... 目的:探讨C57BL/6J小鼠腭发育过程中生物电信号的时空变化规律,以及膜电位变化对腭发育的影响。方法:在E12.5、E13.5、E14.5、E15.5断颈处死孕鼠获取腭胚突,使用DiBAC4(3)进行染色,观察腭发育过程中电信号的变化。然后进行体外培养,10μmol/L HMR1098连续培养24、48、72 h后,观察腭融合的形态改变,通过免疫荧光染色检测TGF-β3的表达。结果:腭胚突的口腔上皮、鼻腔上皮、中嵴上皮在腭发育的4个时期中均存在电信号;中嵴上皮的电信号强度随着腭形成逐渐减弱,上抬期最强,至融合期最终消失。除上抬期外,口腔上皮的电信号强度始终强于鼻腔上皮。HMR1098处理组的腭胚突仍能接触融合,但其形态较其余两组细长、尖锐;处理24 h后,腭胚突TGF-β3的表达明显高于其余两组,随着处理时间的延长,TGF-β3表达逐渐减弱直至消失。结论:腭发育过程中存在电信号的时空变化,内源性电场的改变可以影响腭的发育。 展开更多
关键词 内源性电场 腭发育 DiBAC4(3) HRM1098 转化生长因子-β3
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