目的探讨垂体瘤转化基因(PTTG)在垂体细胞衰老和垂体瘤中表达规律。方法构建F344大鼠D-半乳糖诱导衰老模型和雌激素诱导泌乳素腺瘤模型。观察大鼠的衰老表型及成瘤情况,对大鼠垂体进行病理学检测,分子生物学方法检测垂体PTTG、P53、P21...目的探讨垂体瘤转化基因(PTTG)在垂体细胞衰老和垂体瘤中表达规律。方法构建F344大鼠D-半乳糖诱导衰老模型和雌激素诱导泌乳素腺瘤模型。观察大鼠的衰老表型及成瘤情况,对大鼠垂体进行病理学检测,分子生物学方法检测垂体PTTG、P53、P21、P16蛋白表达。结果 1D-半乳糖成功诱导大鼠出现明显衰老特征,雌激素诱导大鼠成功生成泌乳素腺瘤;2衰老大鼠垂体胞质内有空泡和异染色质生成,肿瘤大鼠垂体PRL免疫组化为强阳性;3RT-PCR显示雌激素诱导组PTTG m RNA表达为(12.99±1.86),D-半乳糖诱导衰老组PTTG表达为(2.10±0.23),差异有高度统计学意义(P<0.01);D-半乳糖诱导衰老组P53、P16、P21 m RNA表达为(113.51±23.87)、(29.26±4.44)、(67.21±10.08),在雌激素诱导垂体瘤组中表达为(83.26±8.06)、(9.83±2.13)、(28.19±2.01),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4Western-blot条带积分灰度值显示D-半乳糖诱导衰老组PTTG、P21、P16蛋白表达为(0.198±0.032)、(1.239±0.051)、(1.673±0.055),雌激素诱导垂体瘤中表达为(1.002±0.041)、(0.202±0.055)、(0.409±0.059),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PTTG基因过表达导致衰老绕过,垂体瘤形成。PTTG表达减弱,诱导衰老。P16、P21是垂体细胞衰老重要的调控因子。展开更多
用PCR法合成人胰岛素基因,克隆到pUC18载体上,经测序证实其碱基序列与人胰岛素基因的序列完全一致。本实验还构建了银耳表达载体,由限制性内切酶介导(Restriction enzy me-mediated DNA Integration,REMI)转化银耳芽孢。随机挑取21个抗...用PCR法合成人胰岛素基因,克隆到pUC18载体上,经测序证实其碱基序列与人胰岛素基因的序列完全一致。本实验还构建了银耳表达载体,由限制性内切酶介导(Restriction enzy me-mediated DNA Integration,REMI)转化银耳芽孢。随机挑取21个抗性菌落,转管繁殖2代后检测其GUS活性,实验结果:18个菌株阳性,3个菌株阴性。从这21个菌株中选取10个菌株,提取染色体DNA,用人胰岛素基因、GUS基因和Tnos序列的特异引物进行PCR,结果表明,这10菌株都能扩增出相应长度的特异片段,证明了它们是人胰岛素基因转化子。展开更多
文摘目的探讨垂体瘤转化基因(PTTG)在垂体细胞衰老和垂体瘤中表达规律。方法构建F344大鼠D-半乳糖诱导衰老模型和雌激素诱导泌乳素腺瘤模型。观察大鼠的衰老表型及成瘤情况,对大鼠垂体进行病理学检测,分子生物学方法检测垂体PTTG、P53、P21、P16蛋白表达。结果 1D-半乳糖成功诱导大鼠出现明显衰老特征,雌激素诱导大鼠成功生成泌乳素腺瘤;2衰老大鼠垂体胞质内有空泡和异染色质生成,肿瘤大鼠垂体PRL免疫组化为强阳性;3RT-PCR显示雌激素诱导组PTTG m RNA表达为(12.99±1.86),D-半乳糖诱导衰老组PTTG表达为(2.10±0.23),差异有高度统计学意义(P<0.01);D-半乳糖诱导衰老组P53、P16、P21 m RNA表达为(113.51±23.87)、(29.26±4.44)、(67.21±10.08),在雌激素诱导垂体瘤组中表达为(83.26±8.06)、(9.83±2.13)、(28.19±2.01),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4Western-blot条带积分灰度值显示D-半乳糖诱导衰老组PTTG、P21、P16蛋白表达为(0.198±0.032)、(1.239±0.051)、(1.673±0.055),雌激素诱导垂体瘤中表达为(1.002±0.041)、(0.202±0.055)、(0.409±0.059),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PTTG基因过表达导致衰老绕过,垂体瘤形成。PTTG表达减弱,诱导衰老。P16、P21是垂体细胞衰老重要的调控因子。
文摘用PCR法合成人胰岛素基因,克隆到pUC18载体上,经测序证实其碱基序列与人胰岛素基因的序列完全一致。本实验还构建了银耳表达载体,由限制性内切酶介导(Restriction enzy me-mediated DNA Integration,REMI)转化银耳芽孢。随机挑取21个抗性菌落,转管繁殖2代后检测其GUS活性,实验结果:18个菌株阳性,3个菌株阴性。从这21个菌株中选取10个菌株,提取染色体DNA,用人胰岛素基因、GUS基因和Tnos序列的特异引物进行PCR,结果表明,这10菌株都能扩增出相应长度的特异片段,证明了它们是人胰岛素基因转化子。
