转基因抗除草剂大豆ZH10-6转化体特异性定量检测体系的建立 被引量：1

1

作者 白蓝 贾军伟 +3 位作者 陈一帆 章寅 潘爱虎 吴潇 《上海农业学报》 2024年第3期1-7,共7页

以新型转基因抗除草剂大豆ZH10-6外源插入片段的旁侧序列为靶标,建立了转化体特异性实时荧光PCR和单通道微滴式数字PCR精准定量检测体系,并邀请8家农业农村部检测中心对检测方法的准确性进行验证。结果表明:该转化体特异性实时荧光定量... 以新型转基因抗除草剂大豆ZH10-6外源插入片段的旁侧序列为靶标,建立了转化体特异性实时荧光PCR和单通道微滴式数字PCR精准定量检测体系,并邀请8家农业农村部检测中心对检测方法的准确性进行验证。结果表明:该转化体特异性实时荧光定量检测方法具有良好的特异性、重复性及广泛的适用性,定量极限达到50 copies∕μL,检测极限达到5 copies∕μL。该检测方法有望作为检测标准用于转基因抗除草剂大豆ZH10-6的定量检测,为该大豆品系的商业化应用及转基因标识等监管提供技术支撑。 展开更多

关键词 抗除草剂大豆ZH10-6 转化体特异性 定量检测 实时荧光PCR 微滴式数字PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体特异性定性PCR检测方法的建立及其标准化 被引量：1

2

作者 肖芳 李允静 +5 位作者 武玉花 李俊 高鸿飞 翟杉杉 吴刚 梁晋刚 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1148-1156,共9页

抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5已经批准获得我国进口用作加工原料的安全证书,含有外源HaHB4基因和bar标记基因。本研究根据抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体5′端和3′端插入位点旁侧序列信息,设计19对引物,结合罗萨里... 抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5已经批准获得我国进口用作加工原料的安全证书,含有外源HaHB4基因和bar标记基因。本研究根据抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体5′端和3′端插入位点旁侧序列信息,设计19对引物,结合罗萨里奥农业生物技术学院公司的1对引物,针对20对引物组合利用定性PCR技术进行引物特异性筛选,结果显示5′端的14号引物特异性良好,优化后获得最佳反应体系和反应程序;经测试,该引物特异性好、稳定性高,检出限达0.1%,扩增片段大小248 bp。经8家有资质实验室对本方法的特异性、检出限、重复性和再现性进行验证,各项参数均达到国家标准要求。本研究成功建立了抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体定性PCR检测方法,为IND-ØØ41Ø-5转化体在国内的安全监管提供技术支撑。 展开更多

关键词 转基因 抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5 转化体特异性 定性PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片检测方法的研制 被引量：10

3

作者 路兴波 武海斌 +3 位作者 王敏 李宝笃 杨崇良 孙红炜 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1432-1438,共7页

根据7种转基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603的重组DNA结构,利用Primerpremier5.0引物设计软件分别设计转化体特异性引物,优化PCR反应条件,对引物特异性及灵敏度进行验证。结果表明,所设计引物特异性强,灵敏度... 根据7种转基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603的重组DNA结构,利用Primerpremier5.0引物设计软件分别设计转化体特异性引物,优化PCR反应条件,对引物特异性及灵敏度进行验证。结果表明,所设计引物特异性强,灵敏度达0.1%。在植物基因组与外源基因的连接区域,利用PrimerPremier5.0和Oligo6.0软件分别设计和筛选7种转基因玉米40merOligo转化体特异性探针,制备转基因玉米的寡核苷酸芯片,并对芯片检测的特异性、重复性及检测灵敏度进行检验。证明所设计探针特异性强,灵敏度达0.01%。与PCR检测方法相比,基因芯片检测法灵敏度高、特异性强,可有效检测及鉴定多种转基因玉米,大大提高检测的准确率和效率。 展开更多

关键词 转基因玉米 转化体特异性 寡核苷酸芯片 Oligo探针 灵敏度

在线阅读 下载PDF 职称材料

GTS40-3-2大豆转化体特异性的定性PCR检测 被引量：1

4

作者 张富丽 宋君 +6 位作者 刘勇 尹全 王东 常丽娟 刘文娟 雷绍荣 游米沙 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期1585-1591,共7页

为了建立转基因大豆GTS40-3-2转化体特异性定性PCR检测方法,本研究根据已公布的转基因大豆GTS40-3-2的旁侧序列信息,用Primer 5.0软件在左右边界的结合位点处设计了5对引物组合,选取扩增片段为370 bp最佳引物组合后,优化了反应体系中引... 为了建立转基因大豆GTS40-3-2转化体特异性定性PCR检测方法,本研究根据已公布的转基因大豆GTS40-3-2的旁侧序列信息,用Primer 5.0软件在左右边界的结合位点处设计了5对引物组合,选取扩增片段为370 bp最佳引物组合后,优化了反应体系中引物浓度和退火温度。以Lectin为内标基因,验证检测引物的特异性及灵敏度,建立了转基因大豆GTS40-3-2转化体特异性定性PCR检测方法。结果表明,该方法成本低、效率高,具有特异性强、灵敏度高、重复性好的优点,已通过全国六家实验室的循环验证,能特异地检测大豆样品中GTS40-3-2转化体,最低限可达0.05%。研究表明,该方法满足我国转基因生物安全管理过程中对GTS40-3-2大豆的检测需求,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 转化体特异性 转基因 大豆 PCR检测 耐除草剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

转基因大豆CAL16转化体特异性定量检测方法的建立

5

作者 王沛然 陆佳雨 +5 位作者 许学 吴爽 李晨 胡笑林 潘伟芹 汪秀峰 《中国油料作物学报》 2025年第4期1036-1050,共15页

以杭州瑞丰生物科技有限公司研发的转Cry1Ab/Vip3Da基因抗虫大豆,即转基因大豆CAL16为材料,建立CAL16转化体特异性定量PCR检测方法,旨在给我国CAL16及其衍生品系的生物育种产业化提供技术支撑。根据5′端和3′端旁侧序列设计引物探针组... 以杭州瑞丰生物科技有限公司研发的转Cry1Ab/Vip3Da基因抗虫大豆,即转基因大豆CAL16为材料,建立CAL16转化体特异性定量PCR检测方法,旨在给我国CAL16及其衍生品系的生物育种产业化提供技术支撑。根据5′端和3′端旁侧序列设计引物探针组合,筛选出5′端一对最佳引物组合,PCR产物片段大小为112 bp。经特异性测试、标准曲线的建立、正确度和精密度测试、检出限和定量限测试、稳健性测试、微滴式数字PCR验证,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。检出限达到0.025%,相当于10个拷贝的CAL16特异性片段;定量限达到0.1%,约为40个拷贝。实验室间循环验证显示:该方法符合国家标准方法各项要求,可满足检测需求。最终对CAL16定量方法进行不确定度评定,确保量值科学可靠,满足定量标识的需求。 展开更多

关键词 转基因大豆 CAL16 转化体特异性 定量检测 不确定度

在线阅读 下载PDF 职称材料

转基因玉米WYN17132转化体特异性实时荧光PCR检测方法的建立与应用

6

作者 咸若彤 缪青梅 +7 位作者 彭城 陈笑芸 杨蕾 徐晓丽 魏巍 徐俊锋 李玥莹 汪小福 《浙江农业学报》 2025年第7期1397-1406,共10页

WYN17132是我国自主研发的转am79-epsps基因耐草甘膦转基因玉米品种,已获得全国生产应用安全证书,但目前缺少相应的检测方法。为进一步落实我国转基因产品监测工作,本研究建立了针对该转化体特异性的实时荧光PCR检测方法。以转基因玉米W... WYN17132是我国自主研发的转am79-epsps基因耐草甘膦转基因玉米品种,已获得全国生产应用安全证书,但目前缺少相应的检测方法。为进一步落实我国转基因产品监测工作,本研究建立了针对该转化体特异性的实时荧光PCR检测方法。以转基因玉米WYN17132的外源插入序列与玉米基因组连接区域的侧翼序列为靶序列,设计多组特异性引物探针,筛选最佳引物探针组合,并系统评价该方法的特异性、检出限(LOD)和再现性。通过筛选,确定17132RB-qF3/qR3/qP3为最佳引物探针组合,该组合扩增片段为132 bp。本研究建立的WYN17132转化体特异性实时荧光PCR检测方法特异性良好,仅对目标转化体产生特异性扩增;方法灵敏度高,检出限可达0.05%;再现性稳定,适用性强。该检测方法能满足转基因玉米WYN17132的检测需求,为我国转基因玉米的监测监管和标识溯源提供了技术支撑。 展开更多

关键词 转基因玉米WYN17132 转化体特异性 实时荧光PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

大豆转化体E8A7027外源T-DNA分析及特异性检测体系建立

7

作者 闫伟 马月 +5 位作者 谢彦博 董立明 龙丽坤 李葱葱 张玲 李飞武 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期579-585,共7页

为进一步分析转AgGlpF基因耐盐转基因大豆E8A7027转化体的分子特征信息并对其进行特异性检测,本研究分离该转化体的旁侧序列并建立其特异性PCR检测体系。基于基因组重测序技术并结合Sanger测序技术,将基因组重测序分析获得的序列信息与... 为进一步分析转AgGlpF基因耐盐转基因大豆E8A7027转化体的分子特征信息并对其进行特异性检测,本研究分离该转化体的旁侧序列并建立其特异性PCR检测体系。基于基因组重测序技术并结合Sanger测序技术,将基因组重测序分析获得的序列信息与参考大豆基因组进行对比,确定E8A7027转化体的T-DNA区在大豆基因组上的插入位点及其5′端和3′端的旁侧序列。根据旁侧序列设计PCR检测引物,并对检测体系的特异性、灵敏度进行实验室内验证。结果显示:转基因大豆E8A7027的整合位点为Chr09染色体的33886331位点,整合方式为单拷贝插入,受体基因组DNA在插入位点缺失了1段58 bp序列,分别获得E8A7027大豆的5′端旁侧序列910 bp和3′端旁侧序列802 bp。根据这两个旁侧序列设计引物建立的PCR检测方法,能够特异性地将E8A7027大豆转化体与其他转基因作物和非转基因大豆区分开,方法的检测灵敏度为0.05%。研究结果可为E8A7027转化体的安全评价和监管检测提供技术支撑。 展开更多

关键词 转基因大豆 高通量测序 旁侧序列 微滴式数字PCR 转化体特异性检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

转基因玉米MIR162转化事件特异性检测方法及其标准化 被引量：9

8

作者 张广远 孙红炜 +3 位作者 李凡 杨淑珂 路兴波 赵蕾 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1141-1147,共7页

转基因玉米MIR162是美国先正达公司开发的新型抗鳞翅目昆虫的转基因玉米品种。本研究目的在于建立该品系转化事件特异性定性、定量检测方法并形成定性检测国家标准。定性PCR体系经实验室内部比对及实验室间循环验证结果表明,该体系特异... 转基因玉米MIR162是美国先正达公司开发的新型抗鳞翅目昆虫的转基因玉米品种。本研究目的在于建立该品系转化事件特异性定性、定量检测方法并形成定性检测国家标准。定性PCR体系经实验室内部比对及实验室间循环验证结果表明,该体系特异性强,灵敏度较高(0.1%),具有良好的重复性和再现性。TaqMan探针实时荧光PCR检测结果表明,所设计的探针特异性强,检测低限(LOD)在0.01%以下;定量标准曲线R2均为0.999,扩增效率为98.622%和99.602%,SD范围为0.014～0.209,RSD的范围为0.049%～0.879%,稳定性好;对转基因含量为1.0%、0.5%、0.1%的样品定量结果相对偏差在8.0%以内,结果较为准确。本研究建立的方法完全可用于含转基因玉米MIR162成分样品的检测。 展开更多

关键词 转化体特异性 MIR162 定性PCR TaqMan探针实时荧光PCR 标准化

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种用于鉴定18种转基因大豆转化体的多靶标质粒的构建与应用 被引量：9

9

作者 史宗勇 陈子言 +10 位作者 祁琛 王成 赵梦晓 李夏莹 王文斌 袁建琴 许冬梅 乔永刚 刘建东 张秀杰 高建华 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期280-290,共11页

本文拟构建一种可满足我国转基因大豆转化体鉴定需求的多靶标质粒(multiple target plasmid,MTP)分子。根据相应的国家农业检测标准,选定我国已经批准进口的14种独立转化体和尚未批准但具有重要应用前景的4种重要转化体,将这18种转化体... 本文拟构建一种可满足我国转基因大豆转化体鉴定需求的多靶标质粒(multiple target plasmid,MTP)分子。根据相应的国家农业检测标准,选定我国已经批准进口的14种独立转化体和尚未批准但具有重要应用前景的4种重要转化体,将这18种转化体的特征序列以及大豆内标准基因Lectin的检测序列合理排列后,接入pUC18质粒,构建一种多靶标质粒pDDID-1905。在插入序列之间,分布着多种位点单一的限制性内切酶识别序列,可用于后期对该质粒的修订和更新。对pDDID-1905质粒中包含的19种靶标序列进行聚合酶链式反应检测,以验证该质粒的实用性。结果显示,所有靶标序列均被成功扩增,其大小与预期一致。总之,本文构建的适用于18种转基因大豆转化体鉴定的阳性质粒分子pDDID-1905,是目前包含大豆转化体特征序列最多的多靶标质粒,其构建和应用将极大地简化烦琐的阳性物质准备工作。 展开更多

关键词 转基因大豆 质粒 阳性物质 转化体特异性检测 转化体特征序列

在线阅读 下载PDF 职称材料

第二代抗草甘膦大豆PCR检测方法研究 被引量：13

10

作者 李飞武 李葱葱 +5 位作者 邢珍娟 刘娜 康岭生 宋新元 邵改革 张明 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期296-300,共5页

为建立转基因大豆Roundup RReady2YieldTM(RR2Y)转化体特异性定性PCR检测方法,以lectin基因作为内参照基因,根据RR2Y外源插入片段5’端与植物基因组连接区序列设计特异性引物,从RR2Y中特异性地扩增出223bp的预期产物。对该方法进行重现... 为建立转基因大豆Roundup RReady2YieldTM(RR2Y)转化体特异性定性PCR检测方法,以lectin基因作为内参照基因,根据RR2Y外源插入片段5’端与植物基因组连接区序列设计特异性引物,从RR2Y中特异性地扩增出223bp的预期产物。对该方法进行重现性、特异性、灵敏度、稳定性和可重复性测试,结果显示:该方法能够特异性检测出RR2Y转化体;将100%RR2Y基因组DNA用A3244基因组DNA进行梯度稀释,以100ngDNA为模板,该方法的检测灵敏度达到0.05%,约为40个起始模板拷贝;以RR2YDNA含量为10%、1%、0.1%的样品为模板,进行稳定性和可重复性,假阴性率为0。结果表明:此方法适用于RR2Y的转化体特异性定性PCR检测。 展开更多

关键词 转基因生物 ROUNDUP RReady2YieldTM 转化体特异性PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

转基因大豆MON89788检测质粒标准分子的构建与应用 被引量：7

11

作者 李飞武 邵改革 +3 位作者 邢珍娟 李葱葱 夏蔚 张明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第23期12330-12333,共4页

[目的]构建适用于转基因大豆MON89788检测的质粒标准分子。[方法]利用定性PCR和连接、转化等分子克隆技术,将大豆内标准基因lectin、MON89788的3′端特异性序列和5′端特异性序列依次克隆到pMD18-T载体上,获得质粒标准分子pMD-LM3M5,并... [目的]构建适用于转基因大豆MON89788检测的质粒标准分子。[方法]利用定性PCR和连接、转化等分子克隆技术,将大豆内标准基因lectin、MON89788的3′端特异性序列和5′端特异性序列依次克隆到pMD18-T载体上,获得质粒标准分子pMD-LM3M5,并进行适用性验证。[结果]获得了3700bp的质粒标准分子,其中重组DNA片段1029bp。该质粒标准分子的定性PCR检测灵敏度达到10copy。[结论]该研究构建的质粒标准分子pMD-LM3M5能替代MON89788基体标准品,用于MON89788大豆及其产品的定性PCR检测。 展开更多

关键词 转基因生物 质粒标准分子 MON89788大豆 转化体特异性检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

转基因大豆GTS40-3-2成分现场可视化检测方法的建立 被引量：4

12

作者 王永 兰青阔 +4 位作者 朱珠 赵新 陈锐 郭永泽 程奕 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期570-573,共4页

转基因大豆GTS40-3-2转化体是种植面积最广的转基因大豆品种,根据GTS40-3-2转化体特异性序列设计引物,应用可视化环介导等温扩增技术,对其进行快速扩增及可视化判断;同时建立转基因成分人工污染的食品模型,比较了LAMP法与定性PCR方法检... 转基因大豆GTS40-3-2转化体是种植面积最广的转基因大豆品种,根据GTS40-3-2转化体特异性序列设计引物,应用可视化环介导等温扩增技术,对其进行快速扩增及可视化判断;同时建立转基因成分人工污染的食品模型,比较了LAMP法与定性PCR方法检测的敏感性。结果表明:该方法仅对GTS40-3-2转化体产生特异性扩增,灵敏度高达0.001%。所建立的GTS40-3-2转化体特异性现场可视化筛查方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于转基因大豆GTS40-3-2成分污染的现场可视化检测。 展开更多

关键词 转基因大豆GTS40-3-2 转化体特异性 环状等温扩增技术 现场可视化检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

耐除草剂玉米MON87427定性PCR检测方法的建立

13

作者 吴博泽 刘璇 +4 位作者 郭俊佩 许冬梅 袁建琴 高建华 史宗勇 《山西农业科学》 2020年第5期654-657,668,共5页

MON87427转化体是美国孟山都公司研发的转基因耐除草剂玉米,已经被包括我国在内的18个国家授权应用。对该转化体的快速检测是实现对其日常监管的基本前提。为了建立MON87427特异性的检测方法,研究针对其特征DNA序列筛选了最佳引物组合,... MON87427转化体是美国孟山都公司研发的转基因耐除草剂玉米,已经被包括我国在内的18个国家授权应用。对该转化体的快速检测是实现对其日常监管的基本前提。为了建立MON87427特异性的检测方法,研究针对其特征DNA序列筛选了最佳引物组合,并对其PCR反应过程进行优化,以初步建立转基因玉米MON87427转化体定性PCR检测方法。结果表明,经特异性测试,引物组合FA/RC能特异性检出MON87427玉米,对其他主要作物或转化体无效;该方法的检测灵敏度可达0.05%。研究建立的新方法可以满足我国现行转基因作物监管检测技术要求,适用于对MON87427转化体特异的定性PCR检测。 展开更多

关键词 转基因玉米 耐除草剂 转化体特异性检测 聚合酶链式反应

在线阅读 下载PDF 职称材料