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转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白基因克隆、表达、抗体制备及应用
被引量：
1
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作者
杨琴
曹军皓
+1 位作者
丁进亚
黄前川
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1282-1285,共4页
目的:克隆转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,表达纯化TccP,制备其多克隆抗体并研究该抗体在EHEC O157∶H7黏附宿主细胞模型中的应用。方法:从EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组中克隆得到tccP基因,构建重组表达质粒pET28a-Tcc...
目的:克隆转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,表达纯化TccP,制备其多克隆抗体并研究该抗体在EHEC O157∶H7黏附宿主细胞模型中的应用。方法:从EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组中克隆得到tccP基因,构建重组表达质粒pET28a-TccP。将此质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。经纯化分离后,免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体,并用ELISA法和Western blot法对其进行鉴定。使用兔抗TccP多克隆抗体对EHEC O57∶H7黏附宿主细胞模型中的TccP分子进行定位研究。结果:获得了TccP cDNA,与GenBank报道的序列一致,并成功构建了高效原核表达质粒pET28a-TccP;Western blot结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了相对分子质量(Mr)约37 000的目的蛋白。表达产物N端氨基酸序列测序结果与GenBank公布的基因序列推定的氨基酸序列完全一致。所制备的兔抗TccP多克隆抗体经Western blot法测定可与Mr37 000目的蛋白发生特异性结合反应;免疫荧光检测发现TccP聚集在EHEC O157∶H7黏附处细胞膜的下方。结论:成功构建了pET28a-TccP载体,获得了高纯度的重组TccP及其特异性多克隆抗体。
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关键词
肠出血性大肠杆菌O157∶H7
转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白
基因表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白基因克隆、表达、抗体制备及应用
被引量：
1
1
作者
杨琴
曹军皓
丁进亚
黄前川
机构
广州军区武汉总医院检验科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1282-1285,共4页
基金
国家自然科学基金(30670107)
文摘
目的:克隆转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,表达纯化TccP,制备其多克隆抗体并研究该抗体在EHEC O157∶H7黏附宿主细胞模型中的应用。方法:从EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组中克隆得到tccP基因,构建重组表达质粒pET28a-TccP。将此质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。经纯化分离后,免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体,并用ELISA法和Western blot法对其进行鉴定。使用兔抗TccP多克隆抗体对EHEC O57∶H7黏附宿主细胞模型中的TccP分子进行定位研究。结果:获得了TccP cDNA,与GenBank报道的序列一致,并成功构建了高效原核表达质粒pET28a-TccP;Western blot结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了相对分子质量(Mr)约37 000的目的蛋白。表达产物N端氨基酸序列测序结果与GenBank公布的基因序列推定的氨基酸序列完全一致。所制备的兔抗TccP多克隆抗体经Western blot法测定可与Mr37 000目的蛋白发生特异性结合反应;免疫荧光检测发现TccP聚集在EHEC O157∶H7黏附处细胞膜的下方。结论:成功构建了pET28a-TccP载体,获得了高纯度的重组TccP及其特异性多克隆抗体。
关键词
肠出血性大肠杆菌O157∶H7
转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白
基因表达
多克隆抗体
Keywords
EHEC （ Enterohaemorrhagic Escherichia coli） O157 ： H7
translocated intimin receptorcytoskeleton coupling protein
gene expression
polyclonal antibody
分类号
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白基因克隆、表达、抗体制备及应用
杨琴
曹军皓
丁进亚
黄前川
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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