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车前草花叶病毒外壳蛋白基因实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用
1
作者
李鑫
李扬
+2 位作者
李辉
李可
王秀芬
《生物安全学报(中英文)》
北大核心
2025年第3期212-220,共9页
【目的】建立一套适用于百合车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)快筛的实时荧光RT-PCR检测方法。【方法】以PlAMV为检测目标,在NCBI网站上Blast检索数据库中的PlAMV以及相同寄主上常见的16种病毒的特异性基因外壳蛋...
【目的】建立一套适用于百合车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)快筛的实时荧光RT-PCR检测方法。【方法】以PlAMV为检测目标,在NCBI网站上Blast检索数据库中的PlAMV以及相同寄主上常见的16种病毒的特异性基因外壳蛋白(coat protein,CP)序列信息,根据序列碱基替换的饱和性分析、系统发育树分析以及遗传距离分析结果,确定PlAMV的特异性基因,以CP基因为靶标,设计特异性强的引物和探针,建立特异性实时荧光检测方法,验证引物特异性,测试反应的灵敏度,并对21份疑似感染PlAMV的百合样品测试检测效果。【结果】确定CP基因作为PlAMV检测的特异性基因,设计2组特异性引物和探针,利用疑似感染PlAMV的百合样品进行检测效果验证,建立了2套快筛的PlAMV实时荧光RT-PCR检测体系,检出限达到1 pg·μL^(-1),2组引物和探针均检测出21份阳性样品,检出率均为100%,2组引物和探针的扩增效率相近。【结论】建立的实时荧光RT-PCR反应体系可特异性定量检测PlAMV,并可应用于口岸样品进行快速、准确的筛查,为加强对PlAMV的分析与管控,制定全面系统的控制措施提供了技术支持。
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关键词
车前草花叶病毒
外壳蛋白
实时荧光
RT-PCR
生物信息学
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职称材料
百合车前草花叶病毒的脱毒组培技术
被引量：
1
2
作者
吴青青
胡小京
+3 位作者
崔嵬
石乐娟
马红叶
班甜甜
《农技服务》
2019年第5期41-43,共3页
为百合种苗快速繁殖提供参考,以带有车前草花叶病毒的罗宾娜为材料,采用组培苗与栽培种球2种形式,通过茎尖培养与热处理+茎尖培养2种脱毒方式处理,以获得最佳组培苗的处理方式。结果表明:以MS+6-BA1.0毫克/升+NAA0.5毫克/升+2,4-D0.1毫...
为百合种苗快速繁殖提供参考,以带有车前草花叶病毒的罗宾娜为材料,采用组培苗与栽培种球2种形式,通过茎尖培养与热处理+茎尖培养2种脱毒方式处理,以获得最佳组培苗的处理方式。结果表明:以MS+6-BA1.0毫克/升+NAA0.5毫克/升+2,4-D0.1毫克/升+蔗糖30克/升+琼脂7克/升+活性炭1克/升,酸碱度5.8为茎尖培养基,能获得百合脱毒的再生植株。
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关键词
百合
茎尖培养
病毒
病
车前草花叶病毒
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职称材料
车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
6
3
作者
苏学思
张玉宝
+3 位作者
王若愚
王亚军
唐国亮
金卫杰
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第1期104-111,共8页
为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21(D...
为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了大量纯化的CP融合蛋白,将其作为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体。序列分析结果表明,PlAMV cp基因片段大小为621 bp,编码207个氨基酸;与已注册的PlAMV分离物相比,核苷酸序列相似性为74.7%~100%,氨基酸序列相似性达到83.6%~100%;不同植物PlAMV的分离物序列差异明显,病毒种群分布呈现寄主差异。SDS-PAGE结果表明,CP蛋白在E.coli BL21(DE3)中大量表达,蛋白相对分子质量为24 ku。Western blot结果显示,抗体能够特异结合天然PlAMV病毒蛋白,可用于检测感病材料中PlAMV蛋白的表达量。本研究可以为PlAMV的血清学检测技术开发和致病机理研究提供一定的参考。
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关键词
百合
车前草花叶病毒
衣壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
车前草花叶病毒外壳蛋白基因实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用
1
作者
李鑫
李扬
李辉
李可
王秀芬
机构
大连海关技术中心
东港海关综合技术服务中心
大连医科大学
出处
《生物安全学报(中英文)》
北大核心
2025年第3期212-220,共9页
基金
国家重点研发计划项目(2021YFD1400100、2021YFD1400101)。
文摘
【目的】建立一套适用于百合车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)快筛的实时荧光RT-PCR检测方法。【方法】以PlAMV为检测目标,在NCBI网站上Blast检索数据库中的PlAMV以及相同寄主上常见的16种病毒的特异性基因外壳蛋白(coat protein,CP)序列信息,根据序列碱基替换的饱和性分析、系统发育树分析以及遗传距离分析结果,确定PlAMV的特异性基因,以CP基因为靶标,设计特异性强的引物和探针,建立特异性实时荧光检测方法,验证引物特异性,测试反应的灵敏度,并对21份疑似感染PlAMV的百合样品测试检测效果。【结果】确定CP基因作为PlAMV检测的特异性基因,设计2组特异性引物和探针,利用疑似感染PlAMV的百合样品进行检测效果验证,建立了2套快筛的PlAMV实时荧光RT-PCR检测体系,检出限达到1 pg·μL^(-1),2组引物和探针均检测出21份阳性样品,检出率均为100%,2组引物和探针的扩增效率相近。【结论】建立的实时荧光RT-PCR反应体系可特异性定量检测PlAMV,并可应用于口岸样品进行快速、准确的筛查,为加强对PlAMV的分析与管控,制定全面系统的控制措施提供了技术支持。
关键词
车前草花叶病毒
外壳蛋白
实时荧光
RT-PCR
生物信息学
Keywords
Plantago asiatica mosaic virus
coat protein
real-time fluorescence
RT-PCR
bioinformatics
分类号
S435.661 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
百合车前草花叶病毒的脱毒组培技术
被引量：
1
2
作者
吴青青
胡小京
崔嵬
石乐娟
马红叶
班甜甜
机构
贵州省农业科学院园艺研究所/贵州省园艺工程技术研究中心
贵州大学农学院
出处
《农技服务》
2019年第5期41-43,共3页
基金
贵州省科技厅项目[黔科合NY字(2010)3088号],[黔科合支撑(2017)2527],[黔科合NY(2015)3012-1],[黔科合成转字(2014)5027号],[黔科合成转字(2015)5321-2号],[黔科合平台人才(2016)5628]
贵州省农业科学院项目[黔农科院CR合字(2014)号],[院地农科合字(2015)],[黔农科院青年基金(2017)08号]
文摘
为百合种苗快速繁殖提供参考,以带有车前草花叶病毒的罗宾娜为材料,采用组培苗与栽培种球2种形式,通过茎尖培养与热处理+茎尖培养2种脱毒方式处理,以获得最佳组培苗的处理方式。结果表明:以MS+6-BA1.0毫克/升+NAA0.5毫克/升+2,4-D0.1毫克/升+蔗糖30克/升+琼脂7克/升+活性炭1克/升,酸碱度5.8为茎尖培养基,能获得百合脱毒的再生植株。
关键词
百合
茎尖培养
病毒
病
车前草花叶病毒
分类号
S435.72 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
6
3
作者
苏学思
张玉宝
王若愚
王亚军
唐国亮
金卫杰
机构
中国科学院西北生态环境资源研究院皋兰生态与农业综合试验站
中国科学院大学
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第1期104-111,共8页
基金
陇原青年创新创业人才(团队)项目(2020-339)
兰州市人才创新创业项目(2019-HLJC-9)
兰州市城关区科技计划(2019-6-2)。
文摘
为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了大量纯化的CP融合蛋白,将其作为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体。序列分析结果表明,PlAMV cp基因片段大小为621 bp,编码207个氨基酸;与已注册的PlAMV分离物相比,核苷酸序列相似性为74.7%~100%,氨基酸序列相似性达到83.6%~100%;不同植物PlAMV的分离物序列差异明显,病毒种群分布呈现寄主差异。SDS-PAGE结果表明,CP蛋白在E.coli BL21(DE3)中大量表达,蛋白相对分子质量为24 ku。Western blot结果显示,抗体能够特异结合天然PlAMV病毒蛋白,可用于检测感病材料中PlAMV蛋白的表达量。本研究可以为PlAMV的血清学检测技术开发和致病机理研究提供一定的参考。
关键词
百合
车前草花叶病毒
衣壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
Keywords
lily
Plantago asiatica mosaic virus
capsid protein
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S432.41 [农业科学—植物病理学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
车前草花叶病毒外壳蛋白基因实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用
李鑫
李扬
李辉
李可
王秀芬
《生物安全学报(中英文)》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
百合车前草花叶病毒的脱毒组培技术
吴青青
胡小京
崔嵬
石乐娟
马红叶
班甜甜
《农技服务》
2019
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
苏学思
张玉宝
王若愚
王亚军
唐国亮
金卫杰
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021
6
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职称材料
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