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PEDV E蛋白的跨膜结构域对其细胞定位的影响研究
1
作者 郭德轩 郑亮 +4 位作者 张宁 郑小会 吴志军 曹宏伟 张华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2022年第4期87-92,共6页
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为猪流行性腹泻的病原体,感染上该病毒的仔猪出现脱水、腹泻和呕吐,给世界养猪业造成了经济损失。PEDV囊膜蛋白E在病毒包膜形成、病毒离子形成、病毒出芽和释放过程中发挥至关... 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为猪流行性腹泻的病原体,感染上该病毒的仔猪出现脱水、腹泻和呕吐,给世界养猪业造成了经济损失。PEDV囊膜蛋白E在病毒包膜形成、病毒离子形成、病毒出芽和释放过程中发挥至关重要的作用。根据软件预测可知,PEDV E蛋白是一种有一个跨膜域的跨膜蛋白。研究将PEDV E蛋白设计好的截短基因(E-T1、E-T2和E-T3)连接至pCMV-myc真核表达载体中,经PCR和双酶切鉴定结果表明已构建成功。最后,将重组质粒pCMV-myc-E、E蛋白截短基因质粒Myc-E-T1、Myc-E-T2和Myc-E-T3转染HEK-293T细胞和IPEC-J2细胞,通过间接免疫荧光技术观察其E蛋白以及截短基因的细胞分布情况,并探究是否与内质网发生共定位。研究结果发现,E蛋白以及E-T1、ET2分布在细胞质并定位在内质网,而E-T3则分布在整个细胞且没有与内质网共定位。说明了E-T1、E-T2可能行使着与E蛋白类似的功能,而E-T3则没有。研究为进一步探讨PEDV的E蛋白功能和分子生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 E蛋白 跨膜结构域 内质网 细胞定位
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人源γ-分泌酶的三维结构
2
作者 Peng Z Zhu Y +3 位作者 Wang Q 韩鸿雁 许春伟 李晓兵 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1236-1236,共1页
人源γ-分泌酶与阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）发病直接相关,其组成复杂,由早老素-1（PS1）、PEN-2、APH-1和nicastrin四个亚基组成。AD属于膜嵌入式蛋白酶,通过底物切割控制着许多重要的细胞功能。异常切割淀粉样前体蛋白AP... 人源γ-分泌酶与阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）发病直接相关,其组成复杂,由早老素-1（PS1）、PEN-2、APH-1和nicastrin四个亚基组成。AD属于膜嵌入式蛋白酶,通过底物切割控制着许多重要的细胞功能。异常切割淀粉样前体蛋白APP产生过量的淀粉样蛋白（Aβ）。Aβ易在脑部发生沉积,从而诱发AD。本组通过低温电子显微镜单颗粒分析, 展开更多
关键词 Γ-分泌酶 淀粉样前体蛋白 阿尔茨海默病 三维结构 颗粒分析 胞外结构域 作用机制 跨膜结构域 羧肽酶
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CMTM4调节宫颈癌髓源性抑制细胞分化和免疫效应
3
作者 王海燕 刘建辉 +4 位作者 阿小英 王佳倞 穆庆芬 周静 杨安琪 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1742-1750,共9页
CMTM4蛋白异常表达与肿瘤发生、发展及预后相关,其在宫颈癌中的作用和机制尚不明确。本研究旨在探讨CMTM4在宫颈癌中的表达水平及其对MDSCs分化和免疫细胞功能的调节作用和分子机制。首先,利用免疫组化染色和Western印迹检测CMTM4在宫... CMTM4蛋白异常表达与肿瘤发生、发展及预后相关,其在宫颈癌中的作用和机制尚不明确。本研究旨在探讨CMTM4在宫颈癌中的表达水平及其对MDSCs分化和免疫细胞功能的调节作用和分子机制。首先,利用免疫组化染色和Western印迹检测CMTM4在宫颈癌肿瘤和癌旁组织中的表达水平。结果显示,CMTM4在宫颈癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。通过流式细胞术检测宫颈癌患者肿瘤样本中MDSCs的分化,使用CD45、CD11b和Ly6G标记M-MDSCs,使用CD45、CD11b和Ly6C标记G-MDSCs。发现宫颈癌患者血液中M-MDSCs和G-MDSCs的百分比显著高于健康志愿者组(P<0.01)。此外,流式分析发现,CMTM4高表达提高宫颈癌患者血液中CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞比例(P<0.01),促进Th1和Th17细胞的活化比例(P<0.05),抑制Th2和Treg细胞的活化比例(P<0.05或P<0.01)。通过流式分析肿瘤组织中CD8+PD-1+T细胞和CD8+PD-L1+T细胞的百分比。结果显示,CMTM4高表达抑制肿瘤组织中CD8+PD-1+T细胞和CD8+PD-L1+T细胞的百分比(P<0.05)。体外研究表明,CMTM4过表达的HeLa细胞显著抑制MDSCs生成(P<0.01),PD-1过表达的HeLa细胞进一步促进了MDSCs生成(P<0.05)。此外,使用ELISA检测Th1、Th2、Th17和Treg细胞因子的水平。发现CMTM4过表达的HeLa细胞可降低T细胞的IL-10分泌水平(P<0.01),而增加IFN-γ和TNF-α的分泌水平(P<0.01),其均被PD-1过表达逆转(P<0.05或P<0.01)。综上,本研究表明,CMTM4在宫颈癌中的低表达导致MDSCs的异常分化和肿瘤的免疫逃逸,CMTM4通过调节PD-1/PD-L1通路,从而影响肿瘤T细胞的活化。因此,CMTM4可能成为治疗宫颈癌的潜在靶点。 展开更多
关键词 CKLF样MARVEL跨膜结构域4 宫颈癌 髓源性抑制细胞分化 免疫逃逸
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马铃薯Y病毒属病毒6K2蛋白叶绿体定位的机制解析
4
作者 赵金鹏 向小华 +4 位作者 张喜峰 杜林林 孙炳剑 汪敏 孙航军 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期985-992,共8页
【目的】明确影响马铃薯Y病毒属病毒6K2蛋白叶绿体定位的结构域。【方法】6K2蛋白分为N端结构域、中间跨膜结构域与C端结构域,分别将6K2蛋白N段结构域、跨膜结构域、C段结构域缺失突变,构建6K2^(PVYΔN)、6K2^(PVYΔC)、6K2^(PVYΔNΔC)... 【目的】明确影响马铃薯Y病毒属病毒6K2蛋白叶绿体定位的结构域。【方法】6K2蛋白分为N端结构域、中间跨膜结构域与C端结构域,分别将6K2蛋白N段结构域、跨膜结构域、C段结构域缺失突变,构建6K2^(PVYΔN)、6K2^(PVYΔC)、6K2^(PVYΔNΔC)、6K2^(TuMVΔN)、6K2^(TuMVΔC)、6K2^(TuMVΔNΔC)突变体。将6K2PVY与6K2^(TuMV)跨膜区的GxxxG基序分别突变,构建6K2PVY GV、6K2^(TuMV)GV突变体,通过激光共聚焦显微镜观察不同6K2-RFP突变体亚细胞定位。将PVY与TuMV编码的6K2蛋白不同结构域重组,构建6K2^(PPT)、6K2^(PTT)、6K2^(TPT)、6K2^(TTP)、6K2^(TPP)、6K2^(PTP)重组蛋白,观察不同6K2-RFP重组蛋白的亚细胞定位。【结果】6K2^(TuMV),突变体6K2^(TuMVΔN)、6K2^(TuMVΔC)、6K2^(TuMVΔN)ΔC、6K2^(PVYΔC)、6K2^(PVYΔNΔC),重组蛋白6K2^(PPT)、6K2^(PTT)、6K2TPT定位于叶绿体。6K2PVY,突变体6K2^(PVYΔN),重组蛋白6K2^(TTP)、6K2^(TPP)、6K2^(PTP)不定位于叶绿体。【结论】马铃薯Y病毒属病毒6K2蛋白的跨膜结构域决定其叶绿体定位,而6K2^(PVY)的C端结构域干扰其叶绿体定位,6K2^(PVY)与6K2^(TuMV)的C端结构域的差异导致了其不同亚细胞定位。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒属 6K2蛋白 叶绿体 跨膜结构域 亚细胞定位
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烟草卵细胞特异表达基因的克隆与分析
5
作者 罗岸 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期360-365,共6页
构建烟草卵细胞和合子的cDNA文库,通过抑制性差减杂交和镜像选择进行卵细胞特异表达基因的筛选。筛选结果得到一个卵细胞特异表达的,与胱天蛋白酶基因类似(CASP-like)的基因NtEE1。生物信息学分析表明,NtEE1蛋白由194个氨基酸组成,含有... 构建烟草卵细胞和合子的cDNA文库,通过抑制性差减杂交和镜像选择进行卵细胞特异表达基因的筛选。筛选结果得到一个卵细胞特异表达的,与胱天蛋白酶基因类似(CASP-like)的基因NtEE1。生物信息学分析表明,NtEE1蛋白由194个氨基酸组成,含有4个跨膜结构域。NtEE1-GFP融合蛋白的亚细胞定位也显示,该蛋白可能存在于质膜和核膜上。同时扩增拟南芥actin11基因的启动子序列驱动核定位GFP的表达,并对烟草进行异位转基因,结果发现,actin11在烟草卵细胞中具有较强的启动子活性。这些研究结果可以为通过RNAi和过表达来研究NtEE1基因在烟草卵细胞发育和在精、卵细胞相互作用中可能的功能提供理论基础。 展开更多
关键词 卵细胞 跨膜结构域 烟草 配子相互作用
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喜盐鸢尾Na^+/H^+逆转运蛋白基因IhNHX1的克隆及序列分析 被引量：2
6
作者 赵沿海 原海燕 +1 位作者 顾春笋 黄苏珍 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期11-18,共8页
采用同源克隆和RACE法克隆获得喜盐鸢尾(Iris halophila Pall.)Na+/H+逆转运蛋白基因IhNHX1的全长序列,该基因序列的全长为1 946 bp,包含1个长度为1 611 bp的开放阅读框(ORF),编码537个氨基酸。序列对比及系统树分析结果表明:IhNHX1基... 采用同源克隆和RACE法克隆获得喜盐鸢尾(Iris halophila Pall.)Na+/H+逆转运蛋白基因IhNHX1的全长序列,该基因序列的全长为1 946 bp,包含1个长度为1 611 bp的开放阅读框(ORF),编码537个氨基酸。序列对比及系统树分析结果表明:IhNHX1基因编码的氨基酸序列与另外11种植物NHX1基因编码的氨基酸序列的一致性高达96.2%,相同序列占61.7%,表明该氨基酸序列保守性较高;在系统树上喜盐鸢尾与其他植物的分支长均大于1.2,表明它们的亲缘关系均较远;IhNHX1基因编码的氨基酸序列含有2个保守结构域,即氨氯吡嗪结合位点和CaM结合结构域,分别是NHX1蛋白的标志性结合位点和重要调节区域。该蛋白质的二级结构和跨膜结构域分析结果表明:在IhNHX1基因编码的蛋白质的二级结构中,α螺旋占48.60%、不规则卷曲占32.03%、延伸链占14.71%、氢键转角占4.66%;该蛋白质含有10个跨膜结构域。此外,对5'RACE方法中5'端正向引物的优化设计步骤进行了归纳,以提高PCR扩增的特异性。 展开更多
关键词 喜盐鸢尾 Na+ H+逆转运蛋白基因IhNHX1 基因克隆 序列分析 系统树 跨膜结构域
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禾谷炭疽菌中候选G蛋白偶联受体蛋白的找寻 被引量：3
7
作者 喻红稠 韩长志 《科学技术与工程》 北大核心 2022年第1期103-109,共7页
G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)是生物中一类具有典型七跨膜结构域的重要细胞表面受体,对细胞信号转导过程具有重要作用。禾谷炭疽菌严重危害着玉米、高粱等禾本科植物的产业发展,然而,对于该菌中GPCR蛋白数量及功能... G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)是生物中一类具有典型七跨膜结构域的重要细胞表面受体,对细胞信号转导过程具有重要作用。禾谷炭疽菌严重危害着玉米、高粱等禾本科植物的产业发展,然而,对于该菌中GPCR蛋白数量及功能尚未有系统性报道。基于典型GPCR蛋白序列所具有的七跨膜保守结构域特征,通过TMHMM、Philius和TOPCONS 3种常用软件进行在线分析,明确全部蛋白的预测功能与蛋白数量、跨膜结构域数量与蛋白数量、氨基酸序列长度与蛋白数量之间的关系。结果表明,禾谷炭疽菌中含有243个具有七跨膜结构域蛋白(涉及含有7个跨膜结构域但不含有信号肽序列蛋白或者含有信号肽序列的具有8个跨膜结构域的蛋白),进一步通过SMART保守结构域分析,可知该菌中存在220个候选GPCR蛋白。该研究为进一步开展禾谷炭疽菌候选GPCR蛋白的理化性质解析提供了重要的数据支撑,也为进一步明确GPCR蛋白及其功能的研究奠定重要的理论基础。 展开更多
关键词 禾谷炭疽菌 七跨膜结构域 候选GPCR 生物信息学
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内质网滞留蛋白1功能的研究进展
8
作者 章璐 刘晓亮 赵彦艳 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第10期934-939,945,共7页
内质网滞留蛋白1(RER1)是位于顺式高尔基体和内质网-高尔基体中间体的一个分子量为23×103的内质网滞留蛋白。作为蛋白质早期分泌途径的重要质量控制因子之一,RER1识别底物跨膜结构域的内质网滞留信号,通过外被蛋白质复合体Ⅰ将底... 内质网滞留蛋白1(RER1)是位于顺式高尔基体和内质网-高尔基体中间体的一个分子量为23×103的内质网滞留蛋白。作为蛋白质早期分泌途径的重要质量控制因子之一,RER1识别底物跨膜结构域的内质网滞留信号,通过外被蛋白质复合体Ⅰ将底物从高尔基体逆向转运至内质网。近20年来,RER1的底物陆续在酵母和哺乳动物细胞中被发现。这些底物通常是膜蛋白,包括永久性或暂时性内质网滞留蛋白和多聚复合物的未组装亚基。目前研究表明,RER1通过底物的内质网滞留信号,调节底物的正确定位和充分组装,影响其细胞膜表达水平或引发内质网应激,参与某些疾病的发病机制。本文总结、分析了RER1的功能、底物及其相关疾病,为RER1的未来研究方向提供参考。 展开更多
关键词 内质网滞留蛋白1 跨膜结构域 内质网滞留 蛋白质质量控制
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植物Tetraspanins蛋白的研究进展
9
作者 赵倩倩 王雨欣 《安徽农业科学》 CAS 2016年第14期146-148,共3页
Tetraspanins（TETs）是一大类进化性保守的、具有4次跨膜结构域的蛋白超家族，广泛分布于所有多细胞生物体中。对植物 TETs蛋白的结构特征、系统进化，以及模式植物拟南芥的 TETs 蛋白超家族（AtTET1～17）和番茄 Tetraspanin3蛋白的... Tetraspanins（TETs）是一大类进化性保守的、具有4次跨膜结构域的蛋白超家族，广泛分布于所有多细胞生物体中。对植物 TETs蛋白的结构特征、系统进化，以及模式植物拟南芥的 TETs 蛋白超家族（AtTET1～17）和番茄 Tetraspanin3蛋白的生物功能进行综述，旨在为今后更好地研究植物 TETs 蛋白超家族提供参考。 展开更多
关键词 4 次跨膜结构域 AtTET1 ~17 TETRASPANIN 3 AtTET1-17 Tetraspanin3
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