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25羟维生素D_3对正常气道上皮细胞通透性的影响及可能机制 被引量:12
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作者 周晓婷 赵海金 蔡绍曦 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1187-1189,共3页
目的探讨25羟维生素D3对人正常气道上皮细胞通透性及ZO-1表达的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验分组为:对照组,不同浓度25羟维生素D3处理组。各处理因素... 目的探讨25羟维生素D3对人正常气道上皮细胞通透性及ZO-1表达的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验分组为:对照组,不同浓度25羟维生素D3处理组。各处理因素作用细胞总时间为24h。跨上皮电阻测量仪测量标准化单细胞层跨上皮电阻(TER),比较各组TER差别。进一步用实时定量PCR观测各处理组紧密连接蛋白ZO-1mRNA表达的变化。结果与对照组相比,25羟维生素D3处理组TER(P<0.05)显著增高,但各浓度的25羟维生素D3对ZO-1表达无明显影响(P>0.05)。结论 25羟维生素D3可以使气道上皮通透性减低,但这种效应并非通过上调气道上皮ZO-1表达实现的。 展开更多
关键词 气道上细胞 25羟维生素D3 胞浆ZO-1 跨上皮电阻 通透性
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Peyer’s结淋巴细胞对上皮屏障功能的影响 被引量:2
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作者 陈洁 高杰英 +3 位作者 曾丽玲 徐鹏辉 钟耀华 陈小章 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期744-746,756,共4页
目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1... 目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1和ZO 2mRNA的表达。结果 :①Caco 2细胞单层与PPL共培养的第 2天 ,无论是混合共培养还是上下共培养组的TER均与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;②同时上下共培养或混合共培养组在第 8天TER仍保持较高水平 ,与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;③在上下共培养和混合共培养组中 ,半定量RT PCR检测ZO 1mRNA的表达也均明显高于对照。结论 :Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)可以较好地维持上皮屏障功能。 展开更多
关键词 共培养 Peyer's结淋巴细胞 CACO-2 跨上皮电阻
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C-8神经酰胺对肺泡Ⅱ型上皮细胞通透性及紧密连接蛋白的影响
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作者 汪影 杨进 +4 位作者 刘辉 毕继蕊 卫园园 操基玉 陆友金 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第2期195-199,共5页
目的研究外源性C-8神经酰胺对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)单层通透性的影响,探讨其作用机制。方法将体外分离培养的AECⅡ通过差速贴壁法纯化,在Transwell上构建单层,待细胞融合后给予不同浓度的C-8神经酰胺(0、25、50、100μmol/L)继续培养... 目的研究外源性C-8神经酰胺对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)单层通透性的影响,探讨其作用机制。方法将体外分离培养的AECⅡ通过差速贴壁法纯化,在Transwell上构建单层,待细胞融合后给予不同浓度的C-8神经酰胺(0、25、50、100μmol/L)继续培养24 h,应用伏欧计测定跨上皮电阻值(TEER)及辣根过氧化物酶(HRP)标记法检测吸光度(OD)值;分别提取细胞总蛋白及总RNA,采用Western blot和实时定量聚合酶链式反应方法检测不同浓度的C-8神经酰胺对AECⅡ紧密连接蛋白ZO-1和Occludin蛋白水平和mRNA水平表达的影响。结果不同浓度的C-8神经酰胺刺激融合的AECⅡ单层24 h后,各组间TEER值、OD值差异均有统计学意义(F=38.780、19.780,P<0.001)。C-8神经酰胺作用后,ZO-1、Occludin蛋白(F=71.150,P<0.01;F=7.703,P=0.002)及mRNA(F=4.887,P=0.014;F=3.637,P=0.048)表达量明显降低。结论 C-8神经酰胺可能通过下调紧密连接蛋白的表达增加肺泡Ⅱ型上皮细胞通透性。 展开更多
关键词 神经酰胺 紧密连接 肺上细胞 跨上皮电阻
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鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清对脂多糖诱导的Caco-2细胞单层屏障损伤的保护作用及其机制研究 被引量:1
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作者 董奇奇 张怡琳 游春苹 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第24期191-200,共10页
该研究利用脂多糖诱导Caco-2细胞单层屏障模型损伤,在体外探究鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清液对肠道屏障的保护作用。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测KF7发酵乳上清液对细胞活力的影响;使用电阻仪和异硫氰酸荧光素-右旋糖苷检测... 该研究利用脂多糖诱导Caco-2细胞单层屏障模型损伤,在体外探究鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清液对肠道屏障的保护作用。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测KF7发酵乳上清液对细胞活力的影响;使用电阻仪和异硫氰酸荧光素-右旋糖苷检测肠上皮屏障结构的完整性和通透性;利用荧光探针以及比色法检测细胞内活性氧和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量;采用qRT-PCR分析紧密连接蛋白、促炎细胞因子、抗炎细胞因子以及氧化应激标志物和炎症反应相关通路的基因表达情况。结果发现,1%~5%的鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清液对Caco-2细胞活力无损伤,且能够保护Caco-2细胞单层屏障,降低脂多糖诱导的炎症反应(下调TNF-α、IL-1β、IL-6的基因表达,上调IL-10的基因表达)和氧化应激(降低MDA含量),上调细胞间紧密连接蛋白相关基因(Claudin-1和Occludin)的表达,改善细胞单层跨上皮电阻并降低细胞单层的通透性,从而恢复Caco-2细胞单层屏障完整性。在机制方面,鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清液可能通过促进Nrf2/NQO1信号通路拮抗氧化应激,通过抑制TLR/MyD88/NF-κB信号通路及下游肌球蛋白轻链激酶的基因表达来降低炎症反应和肠上皮细胞间通透性。该研究结果可为鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳制品作为一种有前途的保护肠道健康的功能性益生菌膳食补充剂提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 鼠李糖乳酪杆菌KF7 CACO-2细胞 跨上皮电阻 肠上屏障 氧化应激 炎症反应
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9种中药提取物细胞毒性及其与人结肠腺癌细胞系单层细胞旁通透性的相关性研究 被引量:4
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作者 蔡润兰 代勇 +3 位作者 王敏 高源 徐世军 齐云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1418-1421,共4页
目的了解9种中药提取物对Caco-2细胞毒性与对其细胞单层细胞-细胞间通透性的相关性。方法用MTT法测定9种中药提取物24 h及48 h的细胞毒,并计算IC50值。采用TranswellTM培养板构建Caco-2细胞单层,细胞电阻仪测定受试物对其TEER值的影响,... 目的了解9种中药提取物对Caco-2细胞毒性与对其细胞单层细胞-细胞间通透性的相关性。方法用MTT法测定9种中药提取物24 h及48 h的细胞毒,并计算IC50值。采用TranswellTM培养板构建Caco-2细胞单层,细胞电阻仪测定受试物对其TEER值的影响,找到影响细胞单层紧密连接的临界剂量,以此剂量与细胞毒参数行相关分析。结果 24、48 h细胞毒参数(IC50)与临界剂量(最大无毒剂量、最小有毒剂量)相关系数均>0.84,相关性检验P值均<0.01。最大无毒剂量与IC50的比值列阵显示,《小品方》甘草饮最小,三七醇提物最大。结论 9种中药提取物对Caco-2细胞毒与该细胞单层细胞旁通透性高度相关,采用细胞毒参数来预估中药提取物在Caco-2单层细胞模型供侧起始最大浓度具可行性。 展开更多
关键词 体外细胞毒 细胞旁通透性 CACO-2细胞 MTT活性测定 跨上皮电阻 相关性
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Calu-3细胞气液界面培养及暴露研究的初探 被引量:3
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作者 李银霞 盛云华 +1 位作者 胡玥 唐黎明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1914-1919,共6页
目的探索Calu-3细胞气液界面(air-liquid interface,ALI)培养条件,及其在暴露系统中暴露洁净空气的耐受性。方法在Calu-3细胞3阶段培养:培养瓶扩增、液液培养至长满Transwell膜、ALI培养后,通过细胞跨上皮电阻(trans-epithelium electri... 目的探索Calu-3细胞气液界面(air-liquid interface,ALI)培养条件,及其在暴露系统中暴露洁净空气的耐受性。方法在Calu-3细胞3阶段培养:培养瓶扩增、液液培养至长满Transwell膜、ALI培养后,通过细胞跨上皮电阻(trans-epithelium electrical resistant,TEER)的测定和紧密连接蛋白ZO-1的表达来确定细胞屏障状态;利用气液界面暴露系统将Calu-3细胞暴露在洁净空气中,暴露1、2、3、4、5、6 h,以培养箱培养的细胞作为对照,检测暴露后Calu-3细胞的活性、TEER的变化,确定基于ALI培养的Calu-3细胞在体外暴露系统中的单次最长暴露时间。结果Calu-3细胞液液培养(8±1)d长满Transwell膜,屏障形成,转为ALI培养,在ALI培养的1~18 d内屏障完整,状态稳定,可以用于暴露实验;Calu-3细胞的活性在洁净空气暴露6 h之后明显下降(P<0.01),TEER在洁净空气暴露4、5、6 h之后明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论ALI培养1~18 d的Calu-3细胞可以用于气液界面暴露实验;综合细胞活性和TEER的变化,Calu-3细胞在暴露系统中暴露洁净空气的单次最长暴露时间为3 h。 展开更多
关键词 气液界面暴露系统 气液界面培养 Calu-3细胞 紧密连接 细胞跨上皮电阻 暴露时间
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