沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞生长及其趋化效应的影响 被引量：4

1

作者 郝磊 田洪 +4 位作者 牟长河 张玉波 周虎传 宋川 刘磊 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期34-41,共8页

目的构建大鼠趋化因子CX3C的配体1(chemokine CX3C ligand 1,CX3CL1)基因慢病毒RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体,观测其沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,b MSCs)生长及其趋化效应的... 目的构建大鼠趋化因子CX3C的配体1(chemokine CX3C ligand 1,CX3CL1)基因慢病毒RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体,观测其沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,b MSCs)生长及其趋化效应的影响。方法首先分离、培养大鼠骨髓b MSCs,并予以流式细胞术检测鉴定。针对CX3CL1基因mRNA序列,筛选3个小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点并予以合成。把合成的siRNA导入b MSCs,Western blot检测其对靶基因编码蛋白的抑制效应,以此明确最佳siRNA。设计与合成针对最佳siRNA序列的短发夹RNA(short hair RNA,shRNA),连入CD513B-1慢病毒载体,构建CD513B-1/CX3CL1 shRNA慢病毒,并行测序鉴定。测序正确者用293T细胞包装成具有高效感染力的CD513B-1/CX3CL1 shRNA重组慢病毒,该重组病毒用于感染b MSCs。分离培养大鼠脾巨噬细胞,将其与被感染的b MSCs共培养。倒置显微镜下观测被感染b MSCs的绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;CCK-8检测被感染b MSCs的生长变化;Real-time PCR检测被感染b MSCs的CX3CL1与核抗原PCNA基因的表达变化;Western blot检测被感染b MSCs的CX3CL1和PCNA蛋白,与被感染的b MSCs共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF和IL-8的表达变化。结果大鼠b MSCs得以分离、培养和鉴定。筛检得CX3CL1基因的最佳干扰序列:CTCTATGAGCAATTATTTA;测序证实,成功构建重组慢病毒载体CD513B-1/CX3CL1 shRNA。荧光观察表明,被CD513B-1/CX3CL1shRNA病毒感染的b MSCs明显表达GFP。CCK-8检测结果显示,与对照细胞比较,沉默CX3CL1的b MSCs的生长减慢,48 h开始更为明显(P<0.01);Real-time PCR、Western blot检测结果证实,CX3CL1基因的shRNA慢病毒能有效沉默b MSCs的CX3CL1,并下调其核抗原基因PCNA及其蛋白的表达,沉默CX3CL1的b MSCs能下调与其共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF、IL-8的表达。结论成功构建CX3CL1基因RNAi重组慢病毒载体。该病毒载体能有效沉默b MSCs的CX3CL1基因,使b MSCs的生长减慢并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达。沉默CX3CL1的b MSCs能下调与其共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF、IL-8的表达。 展开更多

关键词 趋化因子cx3c的配体1基因 短发夹RNA 骨髓间充质干细胞 慢病毒 趋化效应

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不可复性牙髓炎患者血清可溶性B7-H3、CX3趋化因子受体1水平变化及其临床意义 被引量：7

2

作者 袁媛园 潘露 周绍兰 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期2221-2224,共4页

目的检测不可复性牙髓炎患者可溶性B7-H3(sB7-H3)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)水平变化,探讨二者在预后中的评估价值。方法选取104例不可复性牙髓炎患者为病例组,其中急性牙髓炎52例、慢性牙髓炎52例,根据治疗结果分为预后好组83例和预... 目的检测不可复性牙髓炎患者可溶性B7-H3(sB7-H3)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)水平变化,探讨二者在预后中的评估价值。方法选取104例不可复性牙髓炎患者为病例组,其中急性牙髓炎52例、慢性牙髓炎52例,根据治疗结果分为预后好组83例和预后差组21例;选同期体检健康者101例为健康组。采用酶联免疫吸附法检测血清sB7-H3、CX3CR1水平。结果病例组血清sB7-H3、CX3CR1水平高于健康组(P<0.05)。急性牙髓炎患者血清sB7-H3、CX3CR1水平高于慢性牙髓炎患者(P<0.05)。预后差组治疗前后血清sB7-H3、CX3CR1水平高于预后好组(P<0.05);血清sB7-H3、CX3CR1水平不同时间、组间及交互作用比较,差异有统计学意义(P<0.05)。预后差组病情为急性的患者比例高于预后好组(P<0.05)。sB7-H3、CX3CR1是不可复性牙髓炎患者预后差的独立影响因素(P<0.05)。结论不可复性牙髓炎患者血清sB7-H3、CX3CR1水平升高,二者可能成为评估不可复性牙髓炎病情及治疗效果的重要指标。 展开更多

关键词 不可复性牙髓炎 可溶性B7-H3 cx3c趋化因子受体1 预后

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基于胶质细胞GR/CX3CR1双信号探讨柴金解郁安神片含药血清减轻体外抑郁模型大鼠ACC神经元突触损伤的机制 被引量：3

3

作者 刘检 杨蕙 +2 位作者 赵洪庆 孟盼 王宇红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期997-1007,共11页

目的:基于胶质细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)/CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)双信号探讨柴金解郁安神片(CJJY)含药血清对体外抑郁模型中大鼠前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)神经元... 目的:基于胶质细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)/CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)双信号探讨柴金解郁安神片(CJJY)含药血清对体外抑郁模型中大鼠前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)神经元突触损伤的保护机制。方法:原代培养SD大鼠ACC脑区星形胶质细胞、小胶质细胞和神经元,并分别进行鉴定;采用200μmol/L皮质酮(corticosterone,CORT)联合1 mg/L脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立模拟抑郁环境的体外细胞模型,实验设正常组、模型组(CORT+LPS)、GR阻断剂(GR-)组(CORT+LPS+RU486)、GR激动剂(GR+)组(CORT+LPS+dexamethasone)、CX3CR1阻断剂(CX3-)组(CORT+LPS+AZD8797)、CX3CR1激动剂(CX3+)组(CORT+LPS+fractalkine)、CJJY组(CORT+LPS+CJJY含药血清)、CJJY联合GR激动剂(CJJY/GR+)组(CORT+LPS+CJJY含药血清+dexamethasone)组和CJJY联合CX3CR1激动剂(CJJY/CX3+)组(CORT+LPS+CJJY含药血清+fractalkine);高内涵细胞成像分析技术观察星形胶质细胞、小胶质细胞和ACC神经元形态学变化;ELISA法检测细胞上清液中促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)、CORT、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和谷氨酸(glutamate,Glu)水平;免疫荧光染色检测星形胶质细胞中GR和囊泡谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,VGluT1)表达水平,以及小胶质细胞中CX3CR1和腺苷A2A受体(adenosine A2A receptor,A2AR)表达水平;Nissl染色和β-tubulin染色观察神经元突触损伤情况。结果:CJJY含药血清能减轻体外抑郁模型中大鼠星形胶质细胞损伤,抑制小胶质细胞激活,同时抑制细胞上清液中ACTH、CRH、CORT、TNF-α、IL-1β、IL-6和Glu水平异常增高(P<0.05或P<0.01),有效调控GR、VGluT1、CX3CR1和A2AR表达异常(P<0.05或P<0.01),并减轻大鼠ACC神经元树突和树突棘损伤。结论:CJJY含药血清通过调控胶质细胞GR/CX3CR1双信号而减轻体外抑郁模型中大鼠ACC神经元突触损伤。 展开更多

关键词 抑郁症 柴金解郁安神片 前扣带皮层 神经元 突触损伤 糖皮质激素受体 cx3c趋化因子受体1

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趋化因子CX_3C在动脉粥样硬化发生中的作用

4

作者 陈瑞珍 熊思东 杨英珍 《中国心血管杂志》 2001年第6期346-347,共2页

趋化因子是新近发现的一类蛋白质,它对粒细胞和单核细胞具有正向趋化作用。炎症在动脉粥样硬化中的作用也日见报道。然而,二者间有否必然的联系,目前尚未知晓。本文就趋化因子的结构特点、生物学特性以及其在动脉粥样硬化发生中的作用... 趋化因子是新近发现的一类蛋白质,它对粒细胞和单核细胞具有正向趋化作用。炎症在动脉粥样硬化中的作用也日见报道。然而,二者间有否必然的联系,目前尚未知晓。本文就趋化因子的结构特点、生物学特性以及其在动脉粥样硬化发生中的作用作一综述。 展开更多

关键词 趋化因子 cx3c1 动脉粥样硬化 蛋白质 生物学特性

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转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞向Fractalkine趋化能力的影响

5

作者 郭晓书 李法琦 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1280-1286,共7页

目的:研究在Transwell共培养体系中,转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向趋化因子Fractalkine(FKN)趋化能力的影响。方法:采用差速贴壁法分离纯化小鼠MSCs,体外培养、传代扩增,流式细胞术检测细胞表... 目的:研究在Transwell共培养体系中,转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向趋化因子Fractalkine(FKN)趋化能力的影响。方法:采用差速贴壁法分离纯化小鼠MSCs,体外培养、传代扩增,流式细胞术检测细胞表面抗原标志和细胞周期;将携带有趋化因子受体CX3CR1基因及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒(LV-CX3CR1-EGFP)及空载体病毒(LV-CON-EGFP)转染小鼠MSCs细胞,RT-PCR法分别检测空白对照组、实验组、阴性对照组细胞中CX3CR1 mRNA表达情况,Western blot印记法检测CX3CR1蛋白的表达水平,并通过Transwell共培养体系观察不同转染组细胞向趋化因子FKN的迁移情况。结果:成功获得了细胞形态均一,生长状态良好的MSCs;细胞CD29、CD44、CD34有阳性表达;阴性对照组和空白对照组小鼠MSCs不表达CX3CR1基因;构建的慢病毒过表达载体pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP能成功转染至小鼠MSCs中,并使转染后的MSCs表达CX3CR1 mRNA及蛋白。在Transwell共培养体系中,转染CX3CR1基因的小鼠MSCs向趋化因子FKN趋化能力明显强于各对照组(P=0.000),其中阴性对照组浸润至下室的细胞数为:(13.80±2.17)个每高倍镜视野(n=5)。实验组浸润至下室的细胞数为:(35.80±3.34)个每高倍镜视野(n=5)。FKN抗体阻断组浸润至下室的细胞数为(14.80±1.92)个每高倍镜视野(n=5)。结论:转染CX3CR1基因能有效增加小鼠MSCs向趋化因子FKN趋化的能力。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 趋化因子FRAcTALKINE 趋化因子受体cx3cR1 慢病毒载体 基因转染 细胞迁移

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脊髓CX_3CR_1在骨癌痛大鼠吗啡耐受形成中的作用 被引量：2

6

作者 张亚军 田玉科 +3 位作者 杨承祥 王汉兵 刘希江 张涛 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期450-454,共5页

目的观察骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓背角CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）蛋白表达的变化,探讨CX3CR1在骨癌痛大鼠吗啡耐受形成中的作用及其与小胶质细胞之间的关系。方法成年雌性SD大鼠48只,随机分为4组（n=12）：对照组（C组）、假手术组（... 目的观察骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓背角CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）蛋白表达的变化,探讨CX3CR1在骨癌痛大鼠吗啡耐受形成中的作用及其与小胶质细胞之间的关系。方法成年雌性SD大鼠48只,随机分为4组（n=12）：对照组（C组）、假手术组（S组）、骨癌痛-吗啡耐受组（BM组）、BM＋米诺环素组（BM＋m组）。C组不作任何处理;S组大鼠仅手术暴露右侧胫骨上段;BM组大鼠右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker 256乳腺癌细胞10μL（4×105个细胞/mL）制作骨癌痛模型,第9天开始鞘内给予20μg/kg吗啡,2次/d,连续7 d;BM＋m组在BM组处理方法的基础上,手术后第16天再连续3 d鞘内注射米诺环素250μg/kg。分别于术前,术后第3、6、9、12、15、18天测定大鼠机械缩足阈值（MWT）和机械缩足持续时间（MWD）,各组于术后18 d处死大鼠,取脊髓L4~6节段组织,采用Western blot法测定CX3CR1蛋白表达,免疫组化法检测小胶质细胞标记物OX-42水平。结果 BM组大鼠在鞘内给予吗啡第7天（即术后第15天）形成较稳定的吗啡耐受,表现为MWT值下降,明显低于C组和S组（均P〈0.01）,而MWD上升,明显高于C组和S组（均P〈0.01）,术后第18天两指标与BM＋m组比较差异也有统计学意义（均P〈0.05）。BM组大鼠吗啡耐受形成后脊髓背角CX3CR1蛋白和OX-42表达明显高于C组和S组（均P〈0.01）,而BM＋m组注射米诺环素后脊髓CX3CR1蛋白和OX-42表达低于BM组（均P〈0.05）。结论脊髓CX3CR1可能在骨癌痛大鼠慢性吗啡耐受的形成中发挥重要作用,小胶质细胞活化使脊髓CX3CR1蛋白表达上调。 展开更多

关键词 骨癌痛 吗啡耐受 cx3c趋化因子受体1 OX-42

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CX3CR1通过调控巨噬细胞极化影响肾间质纤维化 被引量：2

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作者 许林勇 朱艳萍 +3 位作者 蔡浩正 刘曙 曹清泰 庄权 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期957-966,共10页

目的:CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)与CX3C趋化因子配体1(CX3C chemokine ligand 1,CX3CL1)结合后促使巨噬细胞等炎症细胞向受损部位迁移,巨噬细胞极化与肾间质纤维化相关。本研究旨在探讨CX3CR1是否通过调控巨... 目的:CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)与CX3C趋化因子配体1(CX3C chemokine ligand 1,CX3CL1)结合后促使巨噬细胞等炎症细胞向受损部位迁移,巨噬细胞极化与肾间质纤维化相关。本研究旨在探讨CX3CR1是否通过调控巨噬细胞极化来影响肾间质纤维化的进展。方法:建立C57/B6小鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾间质纤维化模型,并将其分为CX3CR1抑制剂组与模型组,分别连续5 d腹腔注射CX3CR1抑制剂AZD8797或生理盐水,于建模后第7天取小鼠建模侧肾脏。分别采用苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和Masson染色观察肾间质炎症细胞浸润和胶原纤维沉积情况。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、CX3CR1的mRNA表达和CX3CR1蛋白质表达情况。采用全基因组测序鉴别2组肾组织的差异表达基因并用RT-PCR验证精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)的差异表达。采用流式细胞术检测2组肾组织M2型巨噬细胞占比。结果:CX3CR1抑制剂组小鼠肾间质炎症细胞浸润明显减少,胶原纤维沉积明显减轻。CX3CR1抑制剂组小鼠肾组织中CX3CR1 mRNA及蛋白质水平、α-SMA和FN mRNA水平均明显低于模型组(均P<0.05)。全基因组测序显示2组肾组织中差异表达前5位的基因依次为Ugt1a6b、Serpina1c、Arg-1、Retnla和Nup62,RT-PCR证实CX3CR1抑制剂组Arg-1 mRNA水平明显高于模型组(P<0.001)。流式细胞术结果显示CX3CR1抑制剂组小鼠肾脏中Arg1+CD206+M2型巨噬细胞占比明显高于模型组(P<0.01)。结论:抑制CX3CR1的表达可有效缓解小鼠肾间质纤维化,其机制可能与巨噬细胞向M2型极化及Arg-1的表达上调有关。 展开更多

关键词 肾间质纤维化 cx3c趋化因子受体1 巨噬细胞极化 精氨酸酶-1

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CX3CR1参与NF-κB在脊髓水平调控大鼠炎性痛的研究

8

作者 彭蓓 郭曲练 +2 位作者 王萍 潘韫丹 邹望远 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1167-1173,共7页

目的:观察鞘内注射核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对单关节炎(monoarthritis,MA)模型大鼠痛阈值和脊髓中CX3C趋化因子受体-1(CX3C chemokine receptor1,CX3CR1)表... 目的:观察鞘内注射核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对单关节炎(monoarthritis,MA)模型大鼠痛阈值和脊髓中CX3C趋化因子受体-1(CX3C chemokine receptor1,CX3CR1)表达的影响。方法:48只成年雄性Sprague-Dawley大鼠鞘内置管成功后,随机分为4组,即sham组(假手术组)、MA组(单关节炎组)、PDTC预处理组及PDTC后处理组,每组大鼠均为12只。鞘内置管5d后制作MA模型。Sham组:左侧踝关节腔内注射50μL生理盐水,鞘内注射10μL生理盐水;MA组:左侧踝关节腔内注射50μL完全弗氏佐剂(complete Freund'sadjuvant,CFA),鞘内注射10μL生理盐水;PDTC预处理组:鞘内注射10μL PDTC(100μmol/L),30min后左侧踝关节腔内注射50μL CFA;PDTC后处理组:左侧踝关节腔内注射50μL CFA,30min后鞘内注射10μL PDTC(100μmol/L)。于术前及术后不同时间点测定痛阈值,用免疫组织化学法观察L5脊髓节段小胶质细胞的表达情况,并在鞘内注射后第1,3,5,7天取L4-L5脊髓膨大节段检测NF-κB mRNA和CX3CR1mRNA的表达。结果:与MA组相比,sham组、PDTC预处理组及PDTC后处理组的大鼠同侧后肢各时间点痛阈值明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与MA组相比,PDTC预处理组及PDTC后处理组大鼠的L5脊髓节段的小胶质细胞数量明显减少,脊髓中CX3CR1mRNA和NF-κB mRNA的表达均明显减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:鞘内注射NF-κB抑制剂PDTC可以缓解CFA所致MA模型大鼠的痛觉异常。其机制可能与NF-κB信号通路通过调节CX3CR1的表达而参与炎性痛的发生、发展有关。 展开更多

关键词 单关节模型 吡咯烷二硫氨基甲酸 核因子-ΚB cx3c趋化因子受体1

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miR⁃143⁃3p通过调控CX3CL1/CX3CR1信号通路对脂多糖诱导肺泡上皮细胞损伤的影响 被引量：4

9

作者 荆忻 邵萍 李学莉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第21期2649-2656,共8页

目的探讨miR⁃143⁃3p通过调控趋化因子(C⁃X3⁃C基元)配体1/趋化因子(C⁃X3⁃C基元)受体1(CX3CL1/CX3CR1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导肺泡上皮细胞损伤的影响。方法收集急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)患者及健康体检者外周血血清,... 目的探讨miR⁃143⁃3p通过调控趋化因子(C⁃X3⁃C基元)配体1/趋化因子(C⁃X3⁃C基元)受体1(CX3CL1/CX3CR1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导肺泡上皮细胞损伤的影响。方法收集急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)患者及健康体检者外周血血清,标记为ALI/ARDS组和Normal组。双荧光素酶实验证实miR⁃143⁃3p与CX3CL1的靶向关系。体外培养人肺泡上皮细胞A549,并将细胞分成Con⁃trol组、LPS组、LPS+NC mimic组(转染NC mimic)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic组(转染miR⁃143⁃3p mimic)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic+pcDNA组(共转染miR⁃143⁃3p mimic和pcDNA)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic+pc⁃CX3CL1组(共转染miR⁃143⁃3p mimic和pc⁃CX3CL1)。qRT⁃PCR检测miR⁃143⁃3p和CX3CL1、CX3CR1 mRNA表达水平;Western blot检测CX3CL1、CX3CR1蛋白表达;MTT和流式细胞术检测细胞活力和凋亡;ELISA分析肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃1β(IL⁃1β)、白介素⁃6(IL⁃6)、血管内皮生长因子(VEGF)和降钙素原(PCT)水平。结果与Normal组相比,ALI/ARDS组患者外周血中miR⁃143⁃3p表达(0.52±0.05)降低,CX3CL1、CX3CR1的mRNA(1.79±0.08)、(1.65±0.06)和蛋白(1.03±0.15)、(0.98±0.12)表达升高(P<0.05)。与Control组比较,LPS组A549细胞中miR⁃143⁃3p表达减小,细胞活力降低,凋亡率[(23.56±0.85)%]及TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、VEGF、PCT含量增加(P<0.05)。miR⁃143⁃3p过表达后,细胞活力升高,凋亡率[(13.74±0.69)%]及TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、VEGF、PCT含量降低(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR⁃143⁃3p直接负调控CX3CL1表达。CX3CL1过表达可明显逆转miR⁃143⁃3p过表达对LPS诱导的A549细胞损伤的影响和对CX3CR1 mRNA和蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论miR⁃143⁃3p通过抑制CX3CL1/CX3CR1信号通路,减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。 展开更多

关键词 miR⁃143⁃3p 趋化因子(c⁃X3⁃c基元)配体1 趋化因子(c⁃X3⁃c基元)受体1 脂多糖 肺泡上皮细胞

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CX3CL1/fractalkine通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞凋亡 被引量：2

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作者 巩奇明 姜艳 +1 位作者 潘秀虹 尤燕舞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期110-115,共6页

目的 研究CX3C趋化因子配体1(CX3CL1/FKN)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞凋亡的机制。方法 用含红色荧光蛋白的过表达或敲低FKN的慢病毒质粒感染以及LPS处理小鼠RAW264.7巨噬细胞;使用流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡,Western... 目的 研究CX3C趋化因子配体1(CX3CL1/FKN)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞凋亡的机制。方法 用含红色荧光蛋白的过表达或敲低FKN的慢病毒质粒感染以及LPS处理小鼠RAW264.7巨噬细胞;使用流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡,Western blot法检测RAW264.7细胞FKN、 Wnt4、β联蛋白(β-catenin)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 c-caspase-9、 B细胞淋巴瘤因子2相关X蛋白(BAX)和细胞色素C(CytC)的蛋白水平,免疫荧光细胞化学染色检测c-caspase-3和c-caspase-9在RAW264.7细胞的表达和定位。结果 与空白对照组相比,LPS组的细胞凋亡率,FKN、 Wnt4、β-catenin、 c-caspase-3、 c-caspase-9、 BAX和CytC蛋白含量明显升高;与LPS组相比,FKN过表达联合LPS组细胞凋亡率明显下降,FKN、 Wnt4、β-catenin蛋白含量增加,而c-caspase-3、 c-caspase-9、 BAX和CytC蛋白含量降低,c-caspase-3和c-caspase-9在细胞质中的定位减弱;FKN敲低联合LPS组则结果相反。结论 CX3CL1/FKN激活Wnt/β-catenin信号通路减少线粒体凋亡途径关键蛋白的表达减轻LPS诱导的RAW264.7细胞凋亡。 展开更多

关键词 cx3c趋化因子配体1(cx3cL1/FKN) 巨噬细胞 细胞凋亡 Wnt β联蛋白(β-catenin)

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CX3CL1、CXCL10及CXCL5在慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者中的表达及其预后评估价值 被引量：8

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作者 李玄丹 李材忠 +1 位作者 唐咏婕 蔡潇阳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第20期2523-2527,2533,共6页

目的:探讨CX3趋化因子配体1(CX3CL1)、CX趋化因子配体10(CXCL10)及CXCL5在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者中的表达及其预后评估价值。方法:选取2018年1月至2021年6月儋州市人民医院收治的226例慢性阻塞性肺疾病患者(COPD组)和6... 目的:探讨CX3趋化因子配体1(CX3CL1)、CX趋化因子配体10(CXCL10)及CXCL5在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者中的表达及其预后评估价值。方法:选取2018年1月至2021年6月儋州市人民医院收治的226例慢性阻塞性肺疾病患者(COPD组)和60例健康志愿者(对照组),根据COPD患者病情严重程度分为稳定期COPD组(124例)和AECOPD组(102例),并根据AECOPD患者发病入院后28 d的死亡情况,将其分为存活组(64例)和死亡组(38例)。比较各组血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5表达水平。应用多因素Logistic回归分析影响AECOPD预后的危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CX3CL1、CXCL10及CXCL5对AECOPD患者预后评估的价值。Pearson相关分析探究AECOPD患者血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5间的相关性。结果:AECOPD组血清CX3CL1[(370.52±102.16)pg/ml vs(274.18±84.35)pg/ml、(108.52±27.36)pg/ml]、CXCL10[(115.73±34.60)pg/ml vs(73.26±25.17)pg/ml、(21.45±8.10)pg/ml]及CXCL5[(226.48±75.20)pg/ml vs(153.62±58.74)pg/ml、(87.20±31.15)pg/ml]水平均明显高于COPD组和对照组(P<0.001)。死亡组血清CX3CL1[(426.73±126.35)pg/ml vs(327.18±96.70)pg/ml]、CXCL10[(139.42±41.15)pg/ml vs(95.84±30.16)pg/ml]及CXCL5[(270.83±81.46)pg/ml vs(191.25±67.30)pg/ml]水平均明显高于存活组(P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示病程[OR(95%CI)=2.103(1.361~4.217)]、CX3CL1[OR(95%CI)=3.195(2.116~9.215)]、CXCL10[OR(95%CI)=2.328(1.480~5.942)]及CXCL5[OR(95%CI)=2.719(1.895~8.416)]是影响AECOPD预后的危险因素。ROC曲线显示CX3CL1、CXCL10及CXCL5三项联合评估AECOPD患者预后的曲线下面积为0.937(95%CI:0.874~0.986),敏感度为96.8%,特异度为84.5%。相关分析显示,AECOPD患者血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平均呈正相关(P<0.001)。结论:血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平在AECOPD患者中明显升高,三项联合检测对AECOPD患者预后评估具有较好的价值。 展开更多

关键词 慢性阻塞性肺疾病急性加重期 cx3趋化因子配体1 cx趋化因子配体10 cx趋化因子配体5 预后评估

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沉默CX3CR1对炎性痛小鼠痛阈的影响

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作者 王爱桃 姚尚龙 +2 位作者 武庆平 徐建军 任志坚 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期275-278,共4页

目的探讨沉默CX3CR1后炎性痛小鼠的痛阈变化。方法雄性C57BL6小鼠20只,体重30～40g,采用随机数字表法,将其随机均分为两组:沉默CX3CR1组(S组)和阴性对照组(C组)。两组均采用右侧跖底皮下注射完全氟氏佐剂50μl的方法制备小鼠炎性痛模型... 目的探讨沉默CX3CR1后炎性痛小鼠的痛阈变化。方法雄性C57BL6小鼠20只,体重30～40g,采用随机数字表法,将其随机均分为两组:沉默CX3CR1组(S组)和阴性对照组(C组)。两组均采用右侧跖底皮下注射完全氟氏佐剂50μl的方法制备小鼠炎性痛模型。S组于造模后12h鞘内注射PEI/CX3CR1-siRNA,C组鞘内注射PEI/NC-siRNA。分别于造模前(基础值)、造模后1、3、5和7d时测定右侧机械缩足阈值(MWT)、热刺激缩足潜伏期(TWL)和跖底厚度;造模后7d处死小鼠观察脊髓fractalkine及其CX3CR1的表达以及炎性介质白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放情况。结果与C组比较,S组在造模后1d起右侧MWT、TWL升高,右侧跖底厚度降低,造模后7dCX3CR1的表达降低,IL-1β、TNF-α含量减少(P<0.05)。结论 fractalkine/CX3CR1和炎性疼痛关系密切,沉默CX3CR1基因可以有效缓解炎性痛小鼠的热痛敏和机械痛敏状态。 展开更多

关键词 基因沉默 cx3c趋化因子受体1 炎性痛

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BMSCs脑内移植改善AD小鼠学习记忆功能的分子机制研究 被引量：3

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作者 范冲竹 李安 +6 位作者 黄翠芹 甘丹卉 李勤 赵佳仪 王珍 朱丽红 陆大祥 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1921-1931,共11页

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)脑内移植对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及病理改变的影响,并对其分子机制进行探讨。方法:将C57/BL6野生型(WT)小鼠和C57/BL6 APP/PS1转基因(Tg)小鼠随机分为4组:WT/PBS组、WT/BMSCs组、Tg/PBS组... 目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)脑内移植对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及病理改变的影响,并对其分子机制进行探讨。方法:将C57/BL6野生型(WT)小鼠和C57/BL6 APP/PS1转基因(Tg)小鼠随机分为4组:WT/PBS组、WT/BMSCs组、Tg/PBS组及Tg/BMSCs组,侧脑室注射法将PBS或BMSCs注入小鼠脑内。术后第3天起进行持续8 d的Morris水迷宫实验以检测小鼠认知能力。术后第10天取材,组织免疫荧光染色检测小鼠脑内小胶质细胞的激活;real-time PCR检测CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、IL-1β、TNF-α、Nurr1、YM1、胰岛素降解酶(IDE)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA表达;ELISA检测脑组织匀浆CX3CL1和Aβ42的含量;Western blot检测突触后致密蛋白95(PSD95)、突触小泡蛋白(SYP)、p85和p110蛋白表达以及Akt磷酸化水平的变化。结果:术后第10天,在APP/PS1小鼠海马区附近观察到移植的BMSCs。水迷宫实验结果显示,与WT/PBS组小鼠相比,Tg/PBS组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),BMSCs移植治疗后APP/PS1小鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05);与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组CX3CL1在海马区的mRNA水平(P<0.01)及皮质区的蛋白水平(P<0.05)明显增加;BMSCs移植可以促进WT和Tg小鼠脑内小胶质细胞的激活,同时M2型小胶质细胞表面标志物YM1的mRNA表达上调(P<0.05)。Tg/PBS组与WT/PBS组相比,皮质区和海马区TNF-α的mRNA表达明显升高(P<0.05),皮质区Nurr1的mRNA表达降低(P<0.01);而与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组皮质区的TNF-α(P<0.01)mRNA表达降低,CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显上调(P<0.05),海马区TNF-α和IL-1β的mRNA明显下调(P<0.05),CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显增加(P<0.05)。此外,Tg/BMSCs组的PSD95、p85和p110蛋白表达及Akt的磷酸化水平均较Tg/PBS组明显增加(P<0.05)。与Tg/PBS组比,BMSCs移植降低了APP/PS1小鼠脑内Aβ42蛋白的水平(P<0.05),增加了海马区Aβ清除相关酶IDE和MMP9的表达(P<0.05)。结论:BMSCs移植可以调控神经炎症因子分泌,促进神经保护因子和突触蛋白的表达,从而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,其分子机制可能是BMSCs移植上调CX3CL1后激活了PI3K/Akt通路。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 cx3c趋化因子配体1 阿尔茨海默病 神经炎症 神经保护

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