两步超速离心法快速分离大量血浆极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白 被引量：92

1

作者 王淳本 宗义强 +3 位作者 吴万生 冯友梅 邓耀祖 冯宗忱 《同济医科大学学报》 CSCD 北大核心 1995年第3期169-171,共3页

本法先使血浆中的脂蛋白快速富集浓缩，再将脂蛋白各组份分离纯化。即具备序列漂浮法分离样品量大的长处，又具有密度梯度法离心时间短的优点。使用ＢＥＣＫＭＡＮＬ８－８０Ｍ型超速离心机，Ｔｙｐｅ７０Ｔｉ转头，分离２８０ｍｌ血浆... 本法先使血浆中的脂蛋白快速富集浓缩，再将脂蛋白各组份分离纯化。即具备序列漂浮法分离样品量大的长处，又具有密度梯度法离心时间短的优点。使用ＢＥＣＫＭＡＮＬ８－８０Ｍ型超速离心机，Ｔｙｐｅ７０Ｔｉ转头，分离２８０ｍｌ血浆只需超速离心５ｈ。所得极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及低密度脂蛋白（ＬＤＬ）经琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺电泳（ＰＡＧＥ）及载脂蛋白ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）鉴定纯度良好。本文为超速离心分离制备大量血浆ＶＬＤＬ、ＬＤＬ提供了一种快速、经济的新方法。 展开更多

关键词 超速离心法 脂蛋白类 低密度脂蛋白

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过滤对超速离心法提取外泌体的影响 被引量：2

2

作者 李榕 陈静 +5 位作者 李传云 周童 陈欢 陈德喜 乔跃兵 李伟华 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第6期1007-1013,共7页

目的明确过滤对超速离心法提取外泌体数量及纯度的影响,为当前外泌体的提取方法提供一定参考。方法收集健康人血浆和肺癌PC-9/IR细胞培养上清,分为未过滤组(unfiltration group,NC)和过滤组(filtration group,GL),过滤组采用0.22μm过... 目的明确过滤对超速离心法提取外泌体数量及纯度的影响,为当前外泌体的提取方法提供一定参考。方法收集健康人血浆和肺癌PC-9/IR细胞培养上清,分为未过滤组(unfiltration group,NC)和过滤组(filtration group,GL),过滤组采用0.22μm过滤器过滤。超速离心法提取外泌体,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测过滤前后纳米颗粒(外泌体)数量及粒径大小变化,Aminis成像流式检测过滤前后CD9^(+)外泌体(CD9^(+)exosomes,CD9^(+)Exo)和CD63^(+)外泌体(CD63^(+)exosomes,CD63^(+)Exo)数量及百分比。结果NTA结果显示,与NC组相比,血浆过滤后外泌体数量下降4.7倍,培养上清过滤后外泌体数量下降2.5倍。Aminis成像流式结果显示,血浆中CD9^(+)Exo和CD63^(+)Exo的数量过滤后分别下降了5倍和2.6倍,培养上清中CD9^(+)Exo和CD63^(+)Exo的数量过滤后分别下降了3倍和2.3倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。同时,Aminis成像流式结果显示,过滤后颗粒中CD9^(+)Exo和CD63^(+)Exo的百分比没有提高,差异无统计学意义。结论过滤降低了超速离心法提取外泌体的数量,并未提高外泌体的纯度。 展开更多

关键词 外泌体 超速离心法 过滤

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差速超速离心法与试剂盒法提取娟姗牛乳源性外泌体的分析比较 被引量：3

3

作者 范士杰 马露 卜登攀 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期5441-5447,共7页

本试验旨在探究不同方法提取娟姗牛乳源性外泌体的优缺点。采用差速超速离心法和试剂盒法2种提取方法对娟姗牛乳源性外泌体进行提取,通过透射电镜(TEM)、Bradford蛋白定量、免疫印迹(WB)和粒径分析(NTA)方法对2种提取方法得到的外泌体... 本试验旨在探究不同方法提取娟姗牛乳源性外泌体的优缺点。采用差速超速离心法和试剂盒法2种提取方法对娟姗牛乳源性外泌体进行提取,通过透射电镜(TEM)、Bradford蛋白定量、免疫印迹(WB)和粒径分析(NTA)方法对2种提取方法得到的外泌体进行比较鉴定,并采用细胞毒性试验对试剂盒法提取的外泌体进行细胞毒性评估。结果显示:2种提取方法均获得了茶托样结构的囊泡,但TEM视野下试剂盒法提取的外泌体较差速超速离心法多。试剂盒法提取的外泌体蛋白浓度显著高于差速超速离心法(P<0.05)。2种提取方法均能够检测到外泌体的标志性蛋白凋亡连接基因2相互作用蛋白X(ALIX)和四次跨膜蛋白(CD81);差速超速离心法提取的外泌体CD81蛋白丰度极低,且并未鉴定出标志性蛋白肿瘤敏感基因101蛋白(TSG101),但试剂盒法检测到了TSG101。2种提取方法得到的外泌体粒径分布均符合外泌体的正常粒径大小(30~150 nm)。进一步通过细胞毒性试验发现,试剂盒法提取的外泌体对细胞的增殖分化几乎没有影响。因此,基于本试验条件下,试剂盒法更适用于提取娟姗牛乳源性外泌体。 展开更多

关键词 外泌体 娟姗牛乳 差速超速离心法 试剂盒法

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差异超速离心法对不同种属间充质干细胞外泌体分离的可靠性研究

4

作者 赵仁礼 赖国华 +4 位作者 吴家昌 吴铭杰 庄伟达 欧阳钧 桑宏勋 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第3期292-296,共5页

目的分离培养大鼠及小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过差异超速离心法分离纯化外泌体并鉴定其形态及生物学性质,分析此方法对外泌体分离的可靠性。方法将培养3-5代的骨髓间充质干细胞进行成骨、成脂、成软骨诱导分化并进行染色,同时鉴... 目的分离培养大鼠及小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过差异超速离心法分离纯化外泌体并鉴定其形态及生物学性质,分析此方法对外泌体分离的可靠性。方法将培养3-5代的骨髓间充质干细胞进行成骨、成脂、成软骨诱导分化并进行染色,同时鉴定细胞表面标志物;通过透射电镜、纳米颗粒示踪分析及Western Blot鉴定分离纯化的外泌体。结果通过对成骨、成脂、成软骨分化后染色,大鼠及小鼠BMSCs具备干细胞特有的多向分化潜能。流式检测结果显示大鼠和小鼠BMSCs表达干细胞标志性表面抗原;透射电镜下,小鼠及大鼠BMSCs外泌体呈典型双层膜的杯托结构;平均粒径大小为107 nm和152 nm;Western Blot结果显示其表达外泌体标志性蛋白。结论我们能成功分离培养大鼠及小鼠的骨髓间充质干细胞;同时,差异超速离心法能够可靠地分离纯化出大鼠及小鼠骨髓间充质干细胞来源的外泌体。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 外泌体 差异超速离心法

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分析超速离心-沉降速率法研究蛋白质-蛋白质相互作用

5

作者 常卿 褚文丹 +3 位作者 芦亚菲 杨姊 曲娜 李文奇 《生物学杂志》 北大核心 2025年第5期111-116,共6页

分析超速离心-沉降速率法(AUC-SV)是一种用于确定溶液中分子大小和形状的经典生物物理技术,可以根据分子之间在相互作用过程中形成的复合物的数量、大小、化学计量学和亲和力来描述它们之间的相互作用。通过AUC-SV建立免疫相关的重要标... 分析超速离心-沉降速率法(AUC-SV)是一种用于确定溶液中分子大小和形状的经典生物物理技术,可以根据分子之间在相互作用过程中形成的复合物的数量、大小、化学计量学和亲和力来描述它们之间的相互作用。通过AUC-SV建立免疫相关的重要标记分子免疫球蛋白Fc区受体IIb(CD32b)和人IgG1抗体的Fc之间的受体和配体相互作用分析的方法,并与表面等离子共振(SPR)技术和微量热泳动(MST)技术等体外相互作用分析方法进行平行比较,进一步验证了SV-AUC研究蛋白质-蛋白质相互作用的方法可靠性。 展开更多

关键词 分析超速离心-沉降速率法 蛋白质-蛋白质相互作用 免疫球蛋白Fc区受体IIb 抗体Fc片段

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一次性密度梯度超速离心分离人血清脂蛋白及无脂血清 被引量：9

6

作者 何菊英 刘松青 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期46-46,共1页

关键词 血清 脂蛋白 VLDL LDL HDL 无脂血清 角度转头 一次性密度梯度超速离心法

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血清高密度脂蛋白的超速离心、氧化修饰及DiI标志 被引量：4

7

作者 周立尧 陈爱华 宋旭东 《实用医学杂志》 CAS 2007年第7期937-940,共4页

目的:探讨一种方便快捷地从血浆中分离高密度脂蛋白(HDL)及氧化修饰、荧光标记的方法。方法:采用一次性密度梯度超速离心法,经超速离心分离后获得HDL(10℃,50000r/min,5h),并用Cu2+进行氧化修饰(37℃,50μmol/L,24h)及DiI进行荧光标记(3... 目的:探讨一种方便快捷地从血浆中分离高密度脂蛋白(HDL)及氧化修饰、荧光标记的方法。方法:采用一次性密度梯度超速离心法,经超速离心分离后获得HDL(10℃,50000r/min,5h),并用Cu2+进行氧化修饰(37℃,50μmol/L,24h)及DiI进行荧光标记(37℃,15mg/mL,15h)。结果:5h内成功分离出脂蛋白,并氧化、标记了HDL;琼脂糖凝胶电泳、Bradford蛋白质定量及MDA测定证实其为纯度和浓度较高的HDL及氧化HDL(OX-HDL);标记的HDL(DiI-HDL)结合到体外培养的ECV-304细胞,表明DiI-HDL保持了正常脂蛋白的配体功能。结论:本方法缩短了超速离心时间并降低了标记成本,效果理想,可成功应用于脂蛋白受体的研究。 展开更多

关键词 脂蛋白类 HDL 超速离心法 氧化 DII

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奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价 被引量：4

8

作者 赵莹 王靖雷 +6 位作者 王萌 王立斌 张倩 李志杰 马鑫 余四九 潘阳阳 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期1265-1276,共12页

乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度... 乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度离心法的基础上,通过增加离心速度、改变乙酸或凝乳酶用量、调整蔗糖密度梯度、减少离心步骤进行逐一优化。通过透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、蛋白浓度检测、免疫印迹鉴定比较乳源外泌体形态结构、粒径大小、蛋白浓度、粒子浓度、特异性标记蛋白的差异,筛选出最优提取方法。结果显示:4种优化后提取方法均可分离获得具有典型“茶托”形状,介于30~200 nm的细胞外囊泡,但优化后的乙酸法提取乳源外泌体最多,视野密度高达80%以上,粒径大小为(151.0±47.2)nm,粒子浓度为6.2×10^(12)个/mL,均高于其他优化方法;优化后的乙酸法提取乳源外泌体的特异性标记蛋白[肿瘤易感基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)、CD81和CD9]均表达量较高,其他3种优化方法提取到的乳源外泌体特异性标记蛋白发生不同程度降解,且提取乳源外泌体所得样品蛋白浓度均显著高于优化的乙酸法(P<0.05)。结果表明,优化后奶牛乳源外泌体乙酸提取法具有方法简单、耗时短、纯度高、特异性标记蛋白稳定等优点,该方法为外泌体需求量大的试验、医疗、工业生产等奠定一定基础。 展开更多

关键词 乳源外泌体 差速超速离心法 乙酸 凝乳酶 提取鉴定

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ExoQuick提取人血清外泌体方法改良及比较 被引量：14

9

作者 王仁峰 耿振 +5 位作者 李朝阳 鲍会静 李雪 周迪苏 宋士伟 刘运德 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第15期2458-2462,共5页

目的:优化经Exo Quick提取人血清中外泌体(exosome)的方法以获得高质量exosome,并与超速离心法进行比较。方法:分别采用Exo Quick试剂盒及其改良方法、超速离心法提取人血清exosome。利用透射电镜进行形态学观察;2,2-联喹啉-4,4-二甲酸... 目的:优化经Exo Quick提取人血清中外泌体(exosome)的方法以获得高质量exosome,并与超速离心法进行比较。方法:分别采用Exo Quick试剂盒及其改良方法、超速离心法提取人血清exosome。利用透射电镜进行形态学观察;2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法进行蛋白定量;Western blot检测exosome表面标志物CD63;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达差异。结果:3种方法均可提取到血清exosome,电镜下观察到圆形或椭圆形膜性囊泡结构;Exo Quick试剂盒法及其改进方法提取所得样本浓度显著高于传统超速离心法(P<0.05);SDS-PAGE显示3种方法提取样本蛋白表达强度及丰度存在差异;Western blot表明3种方法提取exosome均表达其表面特异性标志物CD63,且含同浓度蛋白的情况下,Exo Quick试剂盒法及改良法其CD63含量明显高于传统超速离心法。结论:3种方法均能提取血清中exosome,Exo Quick试剂盒法及改良方法提取exosome效率更高,同时改进方法能够有效地去除提取样品中的杂蛋白。 展开更多

关键词 外泌体 超速离心法 ExoQuick试剂盒法 方法改良

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大鼠皮质双向电泳样品制备方法的优化 被引量：5

10

作者 张永杰 徐雅飞 +1 位作者 王群 王建枝 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期121-123,共3页

目的优化大鼠皮质双向电泳样品制备方法,初步建立双向电泳条件,提高电泳分辨率和重复性。方法分别应用三氯乙酸/丙酮沉淀法、超速离心法及改良超速离心法制备电泳样品,并比较各处理方法对电泳的影响。改良超速离心法即将混合了匀浆液Ⅱ... 目的优化大鼠皮质双向电泳样品制备方法,初步建立双向电泳条件,提高电泳分辨率和重复性。方法分别应用三氯乙酸/丙酮沉淀法、超速离心法及改良超速离心法制备电泳样品,并比较各处理方法对电泳的影响。改良超速离心法即将混合了匀浆液Ⅱ的匀浆物4℃放置过夜后再进行后续处理。结果改良超速离心法所制备的电泳样品,不仅可以减少蛋白的降解,还可以增加蛋白的溶解性,从而获得分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。结论改良超速离心法更适于制备来源于中枢神经系统双向电泳样品。 展开更多

关键词 皮质 双向电泳 三氯乙酸/丙酮沉淀法 超速离心法

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新城疫病毒纯化方法的比较研究 被引量：3

11

作者 余祖华 丁轲 朱巧艳 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第9期135-138,共4页

为了比较研究红细胞吸附释放法、PEG-6000沉淀法和超速离心法对新城疫病毒的纯化效果,将含有NDV的鸡胚尿囊液分别用上述3种方法处理,并测定血凝（HA）效价。结果表明,红细胞吸附释放法中采用50%的醛化红细胞纯化病毒效果最佳;PEG-6000... 为了比较研究红细胞吸附释放法、PEG-6000沉淀法和超速离心法对新城疫病毒的纯化效果,将含有NDV的鸡胚尿囊液分别用上述3种方法处理,并测定血凝（HA）效价。结果表明,红细胞吸附释放法中采用50%的醛化红细胞纯化病毒效果最佳;PEG-6000沉淀法中,用9%的PEG-6000加1%NaCl处理病毒后再沉淀2-4 h效果最佳;采用超速离心法纯化的病毒主要分布在40%和50%蔗糖区带之间。3种方法比较,以超速离心法效果最好,红细胞吸附释放法和PEG-6000沉淀法纯化效果差异不大。 展开更多

关键词 新城疫病毒 纯化 红细胞吸附释放法 PEG沉淀法 超速离心法

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SPA亲和层析法提纯HBsAg的初步研究

12

作者 彭宣宪 张中健 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1989年第4期56-57,共2页

自六十年代中期Blumberg发现HBsAg以来,乙型肝炎的研究取得了许多重大进展。检测HBsAg的方法越来越敏感。然而不管是建立新的敏感检测方法,还是进一步研究HBsAg的生物学特性,都需要纯化的HBsAg。目前提纯HBsAg常用琼脂糖亲和层析法和超... 自六十年代中期Blumberg发现HBsAg以来,乙型肝炎的研究取得了许多重大进展。检测HBsAg的方法越来越敏感。然而不管是建立新的敏感检测方法,还是进一步研究HBsAg的生物学特性,都需要纯化的HBsAg。目前提纯HBsAg常用琼脂糖亲和层析法和超速离心法。两者均要求较高的设备和技术条件,前者还需接触剧毒药品溴化氰,在中小实验室不易推广使用。本文介绍一种采用SPA作载体的改良亲和层析法,从血清中分离提纯HBsAg。该法经济简便,较易掌握,效果理想,重复性好, 展开更多

关键词 亲和层析法 SPA 乙型肝炎 琼脂糖亲和层析 超速离心法 溴化氰 生物学特性 抗原活性 抗体特异性 携带者

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非小细胞肺癌源性外泌体提取方法探讨 被引量：1

13

作者 晏芾 于韶荣 +3 位作者 曹海霞 井昶雯 马蓉 冯继锋 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期726-729,共4页

目的 :比较3种提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清中外泌体(Exosomes)的方法 ,为获得高质量的Exosomes提供参考。方法:分别采取超速离心法、进口Exo Quick-TC提取法、国产Ribo提取法提取A549细胞培养上清中的Exosomes。利用透射电镜进行... 目的 :比较3种提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清中外泌体(Exosomes)的方法 ,为获得高质量的Exosomes提供参考。方法:分别采取超速离心法、进口Exo Quick-TC提取法、国产Ribo提取法提取A549细胞培养上清中的Exosomes。利用透射电镜进行形态学观察,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠法进行蛋白定量,Western blot检测Exosomes表面标志物CD63表达。结果:3种方法均可提取到Exosomes,电镜下可观察到圆形膜性囊泡结构。进口Exo Quick-TC提取法及国产Ribo提取法提取样本浓度显著高于超速离心法(P<0.05);3种方法提取样本均有Exosomes特异性标志蛋白CD63表达,超速离心法CD63表达最高。结论:超速离心法、进口Exo Quick-TC提取法、国产Ribo提取法均可成功分离Exosomes,超速离心法获得的Exosomes纯度较高,应用试剂盒方法获得的Exosomes浓度高。 展开更多

关键词 外泌体 超速离心法 Exoquick提取法 Ribo提取法

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去外泌体血清制备方法筛选及对成骨细胞与破骨细胞生物活性的影响 被引量：1

14

作者 司誉豪 马勇 尹恒 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2023年第5期449-455,共7页

目的研究制备去外泌体血清的超速离心方法,并评估对成骨细胞与破骨细胞生物活性的影响,为研究成骨、破骨细胞来源外泌体相关研究提供理论参考。方法用NTA技术比较目前3种主流超速离心法以及商品化去外泌体血清的纳米颗粒去除效果,筛选... 目的研究制备去外泌体血清的超速离心方法,并评估对成骨细胞与破骨细胞生物活性的影响,为研究成骨、破骨细胞来源外泌体相关研究提供理论参考。方法用NTA技术比较目前3种主流超速离心法以及商品化去外泌体血清的纳米颗粒去除效果,筛选最佳方法,并用Western blot验证。然后将最佳去外泌体血清作为Exo-free组,普通胎牛血清作为对照组分别培养原代成骨细胞与破骨细胞,利用ALP染色法、茜素红染色法观察成骨细胞成熟与矿化,EdU法检测成骨细胞增殖活性,流式细胞仪分析凋亡情况;应用TRAP评估破骨细胞诱导情况,并记录骨吸收陷窝数量分析骨吸收功能。结果NTA显示方法一(纯胎牛血清,100000×g,4℃,离心18 h)所得去外泌体血清效果最佳,纳米颗粒清除率达99.31%,优于商品化血清及其他两种方法,差异具有显著统计学意义(P<0.01);Western blot结果表明方法一所得血清中外泌体标志蛋白CD9、CD63、TSG101表达均明显下降。Exo-free组成骨细胞ALP染色阳性面积、矿化结节面积和增殖活性均略低于对照组,而早期与晚期凋亡率略高于对照组,但上述差异均无显著统计学意义(P>0.05);Exo-free组与对照组骨髓单核细胞均在第5天呈现出明显融合迹象,且两组TRAP染色阳性面积及骨吸收陷窝数量不存在显著统计学差异(P>0.05)。结论方法一超速离心法(纯胎牛血清,100000×g,4℃,离心18 h)可高效去除血清外泌体,降低后续实验干扰,且去外泌体血清对成骨、破骨细胞生物活性无明显影响。 展开更多

关键词 成骨细胞 破骨细胞 外泌体 超速离心法 骨质疏松症

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鸡新城疫病毒不同浓缩方法的比较 被引量：1

15

作者 孙玉霜 蒙晓蕾 +1 位作者 张立新 刘长辉 《上海畜牧兽医通讯》 2008年第1期23-23,共1页

关键词 鸡新城疫病毒 浓缩方法 病毒分子生物学 密度梯度离心 疾病诊断 设备要求 超速离心法 生物制品

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骨质疏松小鼠骨组织基质囊泡对血管钙化的影响研究 被引量：1

16

作者 任洁 谢静 +1 位作者 沈阳 刘肖珩 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期354-354,共1页

目的血管钙化是一种与骨骼生理矿化相似的生物过程,血管平滑肌细胞(SMCs)分化为“钙化”成骨表型,分泌钙化的基质囊泡(MVs)。流行病学证据表明,骨质疏松患者发生血管钙化的风险显著增高。体内骨骼和血管通过骨-血管轴相关联,骨源性细胞... 目的血管钙化是一种与骨骼生理矿化相似的生物过程,血管平滑肌细胞(SMCs)分化为“钙化”成骨表型,分泌钙化的基质囊泡(MVs)。流行病学证据表明,骨质疏松患者发生血管钙化的风险显著增高。体内骨骼和血管通过骨-血管轴相关联,骨源性细胞可通过分泌生化因子等胞间媒介影响血管健康。本课题组前期发现骨质疏松(OVX)发生后,血液中游离的MVs增加,可能会通过血液循环参与机体内异位矿化。因此,拟探究骨质疏松骨组织MVs对VC的影响。方法通过双侧去卵巢手术构建OVX小鼠模型,茜素红染色检测血管钙盐沉积;超速离心法分离提取正常和骨质疏松小鼠成骨细胞MVs(CT-MVs和OVX-MVs),NTA比较数量变化,蛋白质组学分析比较内容物差异;CT-MVs和OVX-MVs分别与SMCs共培养,q PCR和WB检测SMCs成骨分化标志物;最后,Apo E-/-小鼠尾静脉注射CT-MVs和OVX-MVs,茜素红和Von Kossa染色检测VC。结果(1)OVX小鼠骨质流失增加,伴随血管钙盐沉积加重;(2)OVX-MVs数量增多且高表达BGN等成骨分化相关蛋白;(3)OVX-MVs促进SMCs成骨分化,SMCs标志物α-SMA显著下调,成骨标志物Runx2、ALP显著上调;(4)OVX-MVs促进血管钙化。结论骨质疏松发生后,成骨细胞MVs数量增加且高表达成骨分化相关蛋白,促进SMCs成骨分化,加速血管钙化进程。 展开更多

关键词 流行病学证据 骨质疏松患者 血管钙化 成骨分化 血管平滑肌细胞 骨组织 血液循环 超速离心法

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跑台运动小鼠骨组织外泌体微小RNA表达谱及其生物信息学分析

17

作者 于浩洋 祝英文 +3 位作者 李亚楠 韩健 韩标 郭勇 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期612-612,共1页

目的对小鼠进行跑台锻炼,提取其骨组织外泌体,进行外泌体微小RNA(mi RNA)测序,筛选差异表达mi RNA,并进行生物信息学分析。方法利用跑台使小鼠进行跑步锻炼后,检测骨组织的生化指标,micro-CT及荧光标记法检测骨生长情况。超速离心法提... 目的对小鼠进行跑台锻炼,提取其骨组织外泌体,进行外泌体微小RNA(mi RNA)测序,筛选差异表达mi RNA,并进行生物信息学分析。方法利用跑台使小鼠进行跑步锻炼后,检测骨组织的生化指标,micro-CT及荧光标记法检测骨生长情况。超速离心法提取骨组织中的外泌体,对外泌体mi RNA进行高通量测序,筛选差异表达的mi RNA,根据差异表达mi RNA的靶基因,进行GO分析和KEGG分析,并以定量PCR验证成骨分化mi RNA。结果跑台锻炼提高骨组织的Ⅰ型胶原和骨钙素m RNA的表达,促进骨形成;成功提取小鼠骨组织外泌体,跑台锻炼小鼠骨组织外泌体中差异表达的mi RNA的靶基因参与成骨、轴突生成、神经发育、肌肉发育、细胞生长调节和染色质修饰等生物功能,并参与MAPK、PI3K-AKT、黏着斑和破骨分化等信号通路;荧光定量PCR检测,发现骨组织外泌体中mi R-2137显著上调,mi R-29b-3p和mi R-615-5p显著下调。结论跑台锻炼小鼠骨组织外泌体中的mi RNA参与成骨分化和骨形成等多种生理活动,本研究为探讨力学刺激下骨组织外泌体mi RNA通过旁分泌途径影响成骨和其他生理活动奠定基础。 展开更多

关键词 骨组织 成骨分化 Ⅰ型胶原 神经发育 外泌体 超速离心法 肌肉发育 跑台运动

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1、2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白分析 被引量：3

18

作者 程龙飞 施少华 +3 位作者 李文杨 傅光华 彭春香 黄瑜 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第2期260-262,共3页

采用超声波裂解和超速离心法提取30株鸭疫里默氏菌(Ra,1型和2型各15株)的外膜蛋白(OMP),经SDSPAGE凝胶电泳分析,以上2个血清型Ra的OMP均由13个蛋白多肽组成,其分子质量大小为20-100ku,相同血清型的电泳图谱相似,不同血清型的电泳图谱差... 采用超声波裂解和超速离心法提取30株鸭疫里默氏菌(Ra,1型和2型各15株)的外膜蛋白(OMP),经SDSPAGE凝胶电泳分析,以上2个血清型Ra的OMP均由13个蛋白多肽组成,其分子质量大小为20-100ku,相同血清型的电泳图谱相似,不同血清型的电泳图谱差异较大.经软件分析,1型RaOMP的主要条带有5条,其分子质量分别为95.0、87.7、73.2、55.4、49.8ku,占OMP总量的60.1%;2型RaOMP的主要条带有4条,其分子质量分别为95.5、53.1、50.0、22.4ku,占OMP总量的62.6%.2个血清型菌株有10个蛋白多肽的分子质量大小相似,但含量不同,另有3个蛋白多肽的分子质量差异明显. 展开更多

关键词 鸭疫里默氏菌 蛋白分析 2型 SDS-PAGE 分子质量 凝胶电泳分析 电泳图谱 蛋白多肽 超速离心法 OMP 血清型 外膜蛋白 多肽组成 软件分析 质量差异 超声波 Ra 1型 相似 条带

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新型姜黄素脂质体的制备和初步稳定性考察 被引量：5

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作者 孙晶 季宇彬 +1 位作者 韩美华 王向涛 《世界科学技术-中医药现代化》 2008年第4期66-72,共7页

目的:制备包封率高、粒径小、稳定性好的新型姜黄素脂质体,并对其稳定性进行考察。方法:采用薄膜超声法制备新型姜黄素脂质体,以透射电镜(TEM)观察其形态,动态光散射(DIS)考察粒径分布,用超速离心法测定包封率,并考察其对温度、乙醇、... 目的:制备包封率高、粒径小、稳定性好的新型姜黄素脂质体,并对其稳定性进行考察。方法:采用薄膜超声法制备新型姜黄素脂质体,以透射电镜(TEM)观察其形态,动态光散射(DIS)考察粒径分布,用超速离心法测定包封率,并考察其对温度、乙醇、酸碱的耐受性。结果:新型姜黄素脂质体粒径小,平均粒径97.08nm(多分散系数PDI为0.173),包封率为(99.37±0.89)%;稳定性试验证明新型姜黄素脂质体能够耐受热压灭菌(115℃,67kPa,30min)、最终浓度为40%的乙醇和最终浓度为1M的盐酸。结论:和传统脂质体相比,新型脂质体提高了姜黄素的包封率和稳定性,可以使药物更好地发挥作用。 展开更多

关键词 新型姜黄素脂质体 包封率 超速离心法 稳定性

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香菇多糖的分子量测定 被引量：2

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作者 骆传环 黄荣清 +2 位作者 肖炳坤 梁晓东 赵焱 《科学技术与工程》 2006年第8期1058-1059,共2页

对能够提高免疫功能的香菇多糖测定其平均分子量。用分析型超速离心机沉降法5次测定,求出香菇多糖溶液的沉降系数S,再换用扩散泵,5次测定,求出该溶液的扩散系数D。通过公式MW=RTS/[D(1-ρυ)]求出分子量。式中MW为重均分子量,R为气体常... 对能够提高免疫功能的香菇多糖测定其平均分子量。用分析型超速离心机沉降法5次测定,求出香菇多糖溶液的沉降系数S,再换用扩散泵,5次测定,求出该溶液的扩散系数D。通过公式MW=RTS/[D(1-ρυ)]求出分子量。式中MW为重均分子量,R为气体常数,T为绝对温度,υ为偏微比容,ρ为溶剂密度,计算出香菇多糖的重均分子量为36000道尔顿。为新药申报中有关质量研究,质量标准制定等项目资料,提供必要的方法和数据。 展开更多

关键词 香菇多糖 分子量 超速离心法

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