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基于高分辨质谱的超滤辅助样品制备方法的优化
1
作者
张莹
孙旋
孟令杰
《质谱学报》
北大核心
2025年第4期493-502,共10页
超滤辅助样品制备(filter-aided sample preparation,FASP)法广泛用于蛋白质样品前处理,但该方法使用的超滤膜会非特异性吸附蛋白质而造成样品损失。本研究提出了一种优化后的FASP制样方法,通过对超滤膜表面接枝两性氨基酸的化学修饰方...
超滤辅助样品制备(filter-aided sample preparation,FASP)法广泛用于蛋白质样品前处理,但该方法使用的超滤膜会非特异性吸附蛋白质而造成样品损失。本研究提出了一种优化后的FASP制样方法,通过对超滤膜表面接枝两性氨基酸的化学修饰方法,提高超滤膜表面亲水性,以降低蛋白质损失。利用优化的FASP方法制备人宫颈癌细胞(HeLa)蛋白样品,并进行LC-MS/MS检测,比较了FASP方法、改进后FASP方法、溶液内酶解法鉴定到的肽段和蛋白质数量。结果表明,改进后的FASP方法鉴定到的蛋白质和肽段数目均有所提高,分别增加了7%~9%、30%~40%。同时,确定了改进后FASP方法的最佳蛋白柱载量为20μg。
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关键词
超滤辅助样品制备
(FASP)
蛋白质
样品
前处理
亲水改性
高分辨质谱
蛋白质组学
在线阅读
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职称材料
利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型
被引量：
5
2
作者
马成
潘一廷
+3 位作者
张琪
王继峰
钱小红
应万涛
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第11期1057-1063,共7页
蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不...
蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率。本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型。在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8%)。本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段。
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关键词
超滤辅助样品制备
亲水相互作用色谱
反相色谱
N-糖基化蛋白
N-糖
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职称材料
题名
基于高分辨质谱的超滤辅助样品制备方法的优化
1
作者
张莹
孙旋
孟令杰
机构
西安交通大学大型仪器设备共享实验中心
西安交通大学化学学院
出处
《质谱学报》
北大核心
2025年第4期493-502,共10页
文摘
超滤辅助样品制备(filter-aided sample preparation,FASP)法广泛用于蛋白质样品前处理,但该方法使用的超滤膜会非特异性吸附蛋白质而造成样品损失。本研究提出了一种优化后的FASP制样方法,通过对超滤膜表面接枝两性氨基酸的化学修饰方法,提高超滤膜表面亲水性,以降低蛋白质损失。利用优化的FASP方法制备人宫颈癌细胞(HeLa)蛋白样品,并进行LC-MS/MS检测,比较了FASP方法、改进后FASP方法、溶液内酶解法鉴定到的肽段和蛋白质数量。结果表明,改进后的FASP方法鉴定到的蛋白质和肽段数目均有所提高,分别增加了7%~9%、30%~40%。同时,确定了改进后FASP方法的最佳蛋白柱载量为20μg。
关键词
超滤辅助样品制备
(FASP)
蛋白质
样品
前处理
亲水改性
高分辨质谱
蛋白质组学
Keywords
filter-aided sample preparation(FASP)
protein preparation
hydrophilic modification
high resolution mass spectrometry
proteomics
分类号
O657.63 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型
被引量：
5
2
作者
马成
潘一廷
张琪
王继峰
钱小红
应万涛
机构
北京理工大学生命学院
蛋白质组学国家重点实验室
新加坡南洋理工大学生命学院
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第11期1057-1063,共7页
基金
国家重点基础研究“973”项目(2011CB910603)
国家高技术研究发展计划项目(2012AA020203)
北京市科技新星计划项目(Z121107002512014)
文摘
蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率。本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型。在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8%)。本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段。
关键词
超滤辅助样品制备
亲水相互作用色谱
反相色谱
N-糖基化蛋白
N-糖
Keywords
filter-aided sample preparation （FASP）
hydrophilic interaction liquid chromatography （HILIC）
reversed-phase liquid chromatography （RPLC）
N-linked glycoprotein
N-glycan
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于高分辨质谱的超滤辅助样品制备方法的优化
张莹
孙旋
孟令杰
《质谱学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型
马成
潘一廷
张琪
王继峰
钱小红
应万涛
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
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职称材料
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0
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