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超声波辅助农杆菌介导法转化鱼腥草的初步研究 被引量:10
1
作者 张莹 董燕 +3 位作者 易良杰 王培训 易浪 刁玲武 《江西农业学报》 CAS 2010年第4期9-11,共3页
应用超声波直接转化法、农杆菌介导转化法、恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s 4种方法对鱼腥草进行转基因研究,结果显示:上述4种转化法对gus基因最大瞬时表达率依... 应用超声波直接转化法、农杆菌介导转化法、恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s 4种方法对鱼腥草进行转基因研究,结果显示:上述4种转化法对gus基因最大瞬时表达率依次为47%、60%、80%和75%。结论:用恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s两种转化法gus基因的瞬时表达率最高,说明超声波辅助农杆菌介导遗传转化方法是一种高效的鱼腥草转基因方法,它实现了外源基因在植物中的高效表达。 展开更多
关键词 超声波辅助杆菌介导 鱼腥草 遗传转化 GUS瞬时表达
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葡萄砧木5BB超声波辅助农杆菌介导法遗传转化的条件 被引量:2
2
作者 李金凤 陶建敏 +2 位作者 糜林 李国平 章镇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期1190-1192,共3页
关键词 葡萄砧木 5BB 超声波 杆菌介导 遗传转化
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超声波辅助处理对发根农杆菌介导的苦豆子遗传转化的影响 被引量:21
3
作者 赵东利 陈红波 +2 位作者 聂秀菀 王新宇 郑国锠 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第3期468-472,共5页
以发根农杆菌转化苦豆子的子叶和下胚轴外植体,结果表明,辅助以超声波处理有助于转化率的提高,当超声波(功率120W,震荡频率50kHz)处理25min时,转化率达到最高峰(子叶为83.7%,下胚轴为39.1%),分别高于对照(14.4%和9.8%)69.3%和29.3... 以发根农杆菌转化苦豆子的子叶和下胚轴外植体,结果表明,辅助以超声波处理有助于转化率的提高,当超声波(功率120W,震荡频率50kHz)处理25min时,转化率达到最高峰(子叶为83.7%,下胚轴为39.1%),分别高于对照(14.4%和9.8%)69.3%和29.3%。在此条件下,进一步添加AS100μmol/L,可使转化率再进一步提高9.9%和7.6%。 展开更多
关键词 苦豆子 超声波处理 发根杆菌 遗传转化 乙酰丁香酮 药用植物
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超声波辅助对农杆菌介导新红星苹果遗传转化中gus基因瞬间表达的影响 被引量:7
4
作者 刘莉莉 刘丹 +1 位作者 丛郁 章镇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第2期213-215,共3页
关键词 苹果 超声波辅助杆菌介导 遗传转化
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超声波辅助的发根农杆菌对黄瓜的遗传转化 被引量:18
5
作者 姚春娜 王亚馥 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期77-81,共5页
由于超声波处理可在外植体上产生许多微小伤口 ,从而提高农杆菌与外植体之间的接触面积 ,提高农杆菌对外植体的转化频率 .用野生型发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes) A4 菌株感染黄瓜 (Cucumis sativus L.)无菌苗的子叶和下胚轴 ,... 由于超声波处理可在外植体上产生许多微小伤口 ,从而提高农杆菌与外植体之间的接触面积 ,提高农杆菌对外植体的转化频率 .用野生型发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes) A4 菌株感染黄瓜 (Cucumis sativus L.)无菌苗的子叶和下胚轴 ,建立了黄瓜的发根遗传转化体系 .同时 ,对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮的添加与否等影响因素进行了研究 .结果表明 ,采用外植体在添加 0 .5 m g/ L NAA和 2 mg/ L 6 - BA的 MS培养基上预培养 4 d,超声波处理 2 s,共培养 3d,在预培养共培养期间子叶上表皮向下可以取得最佳的转化效果 ,发根诱导率为 94 .7% .乙酰丁香酮对发根诱导频率影响不明显 .冠瘿碱检测表明 。 展开更多
关键词 发根杆菌 黄瓜 超声波 转化 发根 SAAT 遗传
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超声波辅助农杆菌介导转化大豆未成熟胚的研究 被引量:7
6
作者 钱雪艳 郭东全 +4 位作者 杨向东 薛键 邢国杰 张原宇 赵桂兰 《安徽农业科学》 CAS 2012年第2期658-661,共4页
[目的]进一步提高栽培大豆的遗传转化效率。[方法]以吉林省大豆主栽品种吉育67、吉育89未成熟子叶为外植体,对超声辅助农杆菌介导大豆遗传转化过程中处理液浓度、超声强度和时间等参数进行了优化。[结果]在农杆菌菌液浓度OD600为0.4,超... [目的]进一步提高栽培大豆的遗传转化效率。[方法]以吉林省大豆主栽品种吉育67、吉育89未成熟子叶为外植体,对超声辅助农杆菌介导大豆遗传转化过程中处理液浓度、超声强度和时间等参数进行了优化。[结果]在农杆菌菌液浓度OD600为0.4,超声功率中,转化率约为4.35%。[结论]为进一步开展以大豆未成熟子叶为外植体的高效遗传转化及相关应用研究提供了参考。 展开更多
关键词 超声波辅助杆菌转化 未成熟胚子叶 遗传转化 大豆
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超声波辅助对农杆菌介导“美人指”葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响 被引量:5
7
作者 周蓓蓓 陈月红 +1 位作者 章镇 陶建敏 《江西农业学报》 CAS 2010年第4期6-8,共3页
通过超声波辅助农杆菌介导法,优化"美人指"葡萄遗传转化体系。利用GUS瞬时表达的方法研究了不同功率、时间条件下的超声波处理,外植体类型以及AS浓度对"美人指"葡萄遗传转化效率的影响。结果表明:外植体茎段在含75m... 通过超声波辅助农杆菌介导法,优化"美人指"葡萄遗传转化体系。利用GUS瞬时表达的方法研究了不同功率、时间条件下的超声波处理,外植体类型以及AS浓度对"美人指"葡萄遗传转化效率的影响。结果表明:外植体茎段在含75mg/L AS农杆菌悬浮液中侵染4 min,并在此期间,用功率为90 W的超声波处理14 s,获得最佳GUS瞬时表达率42.8%。 展开更多
关键词 葡萄 超声波辅助杆菌介导 遗传转化
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超声波辅助处理农杆菌介导大豆胚尖转化转基因植株的获得和分子鉴定 被引量:1
8
作者 孙式静 杨素欣 冯献忠 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期808-814,共7页
以大豆Williams 82成熟胚尖为试验材料,建立了超声波辅助处理的大豆胚尖农杆菌转化体系,研究了不同超声波处理时间对报告基因Uid A(GUS)瞬间表达的影响和不同草铵膦浓度对大豆转化效率的影响。结果表明:在超声波处理2 min时,报告基因... 以大豆Williams 82成熟胚尖为试验材料,建立了超声波辅助处理的大豆胚尖农杆菌转化体系,研究了不同超声波处理时间对报告基因Uid A(GUS)瞬间表达的影响和不同草铵膦浓度对大豆转化效率的影响。结果表明:在超声波处理2 min时,报告基因GUS的瞬时表达效率达到最高;在0.3-0.6 mg·L^-1草铵膦梯度筛选浓度下,阳性转基因植株的数量最多。对于所获得的转基因株系进行了PCR检测和除草剂Basta涂抹抗性检测;实时荧光定量PCR检测显示转基因植株的目的基因的表达量达到野生型的1.7-42倍,Southern杂交检测表明外源基因已经整合到大豆基因组中。 展开更多
关键词 大豆 胚尖 杆菌转化 超声波辅助处理
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负压和超声波处理对农杆菌介导的花生遗传转化效率的影响 被引量:13
9
作者 邹湘辉 庄东红 +2 位作者 胡忠 李庆云 曹军 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期12-16,共5页
为了提高根癌农杆菌介导的花生遗传转化效率,研究了不同强度的负压和超声波处理时间对外植体芽诱导率的影响以及对花生遗传转化的作用。结果表明,较低强度(抽拉30次)的负压处理和短时间(2min)的超声波处理对花生遗传转化有促进作用,虽... 为了提高根癌农杆菌介导的花生遗传转化效率,研究了不同强度的负压和超声波处理时间对外植体芽诱导率的影响以及对花生遗传转化的作用。结果表明,较低强度(抽拉30次)的负压处理和短时间(2min)的超声波处理对花生遗传转化有促进作用,虽然超声波处理延长了芽再生时间,但是有助于提高花生外植体芽点诱导率。 展开更多
关键词 负压 超声波 根癌杆菌 遗传转化 花生 外植体
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超声波辅助农杆菌介导八棱海棠转rolC基因 被引量:8
10
作者 丛郁 王三红 +2 位作者 王红霞 姚泉洪 章镇 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期659-663,共5页
应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D... 应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D600nm为0.6且含有75 mg/L As的农杆菌悬浮液中侵染2 min后,用功率为100 W的超声波处理30 s,再浸泡2.5 min,然后放到再生培养基上共培养3 d,能获得最佳的gus基因瞬间表达率。最佳处理条件下转化683枚八棱海棠叶片,共得到138个抗性愈伤组织和15株抗性苗,转化率为2.2%。GUS染色、PCR及Southern blotting检测结果显示,有12个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。 展开更多
关键词 八棱海棠 超声波辅助杆菌转化 ROLC基因
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超声波处理对根癌农杆菌介导转化金钗石斛影响的初步研究 被引量:3
11
作者 杨翠芹 秦耀国 刘伟 《四川农业大学学报》 CSCD 2006年第4期455-458,共4页
以金钗石斛的类原球茎体(PLBs)为受体材料,研究了侵染前材料不同创伤处理对农杆菌介导转化频率的影响。结果表明:25KHz超声波40~80W处理5~10min或100W处理5min对PLBs死亡率无不良影响;1/2MS液体培养基适宜作为超声溶液;80~100W超声... 以金钗石斛的类原球茎体(PLBs)为受体材料,研究了侵染前材料不同创伤处理对农杆菌介导转化频率的影响。结果表明:25KHz超声波40~80W处理5~10min或100W处理5min对PLBs死亡率无不良影响;1/2MS液体培养基适宜作为超声溶液;80~100W超声波处理5min的PLBs在转化后GUS染色每100mg鲜重材料上的蓝色斑点数由常规方法处理的0~0.54提高到6.05~7.90,GUS基因瞬时表达频率得到提高;筛选两个月后多数PLBs的GUS基因仍能稳定表达。说明超声波处理能提高农杆菌介导转化金钗石斛PLBs的频率。 展开更多
关键词 金钗石斛 杆菌 转化 超声波
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结缕草农杆菌介导遗传转化中辅助处理方法的改良
12
作者 胡繁荣 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第1期78-82,共5页
以结缕草愈伤组织为试材,利用农杆菌介导法时包括辐照、愈伤组织状态、共培养条件及负压处理等辅助处理方法对愈伤组织瞬间表达频率的影响进行研究。结果表明:2Gy的辐照剂量利于提高瞬间表达频率;1~2个月的愈伤组织适于转化;全光照的... 以结缕草愈伤组织为试材,利用农杆菌介导法时包括辐照、愈伤组织状态、共培养条件及负压处理等辅助处理方法对愈伤组织瞬间表达频率的影响进行研究。结果表明:2Gy的辐照剂量利于提高瞬间表达频率;1~2个月的愈伤组织适于转化;全光照的共培养条件下瞬间表达频率高于16/8h光照培养和暗培养条件下瞬间表达频率;农杆菌与愈伤组织混合培养时给予适当的负压条件可提高愈伤组织瞬间表达频率和存活率。 展开更多
关键词 结缕草 愈伤组织 杆菌介导 遗传 转化 培养条件 负压处理 辐照剂量 存活率 光照
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建立青菜(Brassica chinensis)农杆菌介导法基因转化体系 被引量:25
13
作者 蔡小宁 佘建明 +3 位作者 朱祯 朱卫民 袁希汉 苏小俊 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 1997年第2期110-114,共5页
以青菜地方品种矮脚黄、苏州青的子叶、子叶柄、真叶为外植体,在改良MS培养基上离体培养获得再生植株。在不定芽诱导培养基中添加2~20mg/LAgNO3可显著提高子叶不定芽诱导频率;添加0.1mg/LNAA和1~2mg/... 以青菜地方品种矮脚黄、苏州青的子叶、子叶柄、真叶为外植体,在改良MS培养基上离体培养获得再生植株。在不定芽诱导培养基中添加2~20mg/LAgNO3可显著提高子叶不定芽诱导频率;添加0.1mg/LNAA和1~2mg/LCPPU既可提高不定芽诱导频率,又可获得较多数量的不定芽。用含CpTI基因和NPTII基因的农杆菌感染子叶,获得了具有卡那霉素抗性的再生植株。培养基中添加羧苄青霉素促进子叶再生不定芽,头孢霉素和卡那霉素则抑制子叶再生。卡那霉素敏感性测定结果表明,当培养基中含卡那霉素10mg/L时。 展开更多
关键词 青菜 子叶 杆菌介导 基因转化体系 再生植株
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利用农杆菌介导法转化泗棉3号的研究 被引量:12
14
作者 吴慎杰 李飞飞 +3 位作者 陈天子 张洁 郭旺珍 张天真 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期632-638,共7页
泗棉3号农艺性状优良,是20世纪90年代长江流域棉区的主栽品种,利用基因工程导入外源基因进行直接改良,可以迅速获得新的品种或育种材料。以陆地棉泗棉3号的下胚轴为外植体,建立了高效的转化体系,得到了大量的转基因植株。泗棉3号的出愈... 泗棉3号农艺性状优良,是20世纪90年代长江流域棉区的主栽品种,利用基因工程导入外源基因进行直接改良,可以迅速获得新的品种或育种材料。以陆地棉泗棉3号的下胚轴为外植体,建立了高效的转化体系,得到了大量的转基因植株。泗棉3号的出愈率和分化率显著高于模式品种Coker312,同时它出现分化中心的主要形态不同于Coker312,其胚性愈伤组织主要来源于两类初生愈伤组织。对泗棉3号的胚性愈伤组织进行GUS检测,以及对再生植株叶片进行PCR检测后,阳性植株嫁接于温室。在温室用2063.98μmolL-1的卡那霉素点涂叶片检测nptII基因的表达和取叶片进行gus基因的组织化学检测,同时通过Southernblot分析检测,证明目的基因成功地整合到泗棉3号基因组中。 展开更多
关键词 泗棉3号 杆菌介导转化 再生
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农杆菌介导法与基因枪轰击法结合在植物遗传转化上的应用 被引量:16
15
作者 耿立召 刘传亮 李付广 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期205-210,共6页
根癌农杆菌介导法 Agrobacterium-mediatedtransformation 和基因枪轰击法 particlebombardmenttransformation 是植物遗传转化的主要方法.两种方法各有优缺点,农杆菌介导法是一种天然的植物遗传转化系统,外源基因在转基因植物中的拷贝... 根癌农杆菌介导法 Agrobacterium-mediatedtransformation 和基因枪轰击法 particlebombardmenttransformation 是植物遗传转化的主要方法.两种方法各有优缺点,农杆菌介导法是一种天然的植物遗传转化系统,外源基因在转基因植物中的拷贝数低,遗传稳定性好;基因枪转化法不受材料基因型的限制.通过结合两种方法的优点,发展了3种农杆菌介导和基因枪轰击法相结合的遗传转化方法,分别为农杆枪法、基因枪轰击/农杆菌感染法、金粉或钨粉包裹菌体细胞作为微弹轰击法.对3种结合转化方法的技术途径、原理、转化受体及研究进展等方面进行了综述. 展开更多
关键词 杆菌介导 基因枪轰击 杆枪 遗传转化
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应用农杆菌介导法的多年生黑麦草遗传转化研究 被引量:7
16
作者 刘萍 张振霞 +4 位作者 苏乔 袁剑刚 席嘉宾 辛国荣 杨中艺 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期126-128,共3页
以草坪型多年生黑麦草LoliumperenneL.成熟种子为外植体,经过愈伤组织诱导和植株再生研究,建立了该草种的遗传转化体系,并成功地应用农杆菌介导法将克隆自辽宁碱蓬的甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)转移进多年生黑麦草,获得的转基因株系Gsc_LP... 以草坪型多年生黑麦草LoliumperenneL.成熟种子为外植体,经过愈伤组织诱导和植株再生研究,建立了该草种的遗传转化体系,并成功地应用农杆菌介导法将克隆自辽宁碱蓬的甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)转移进多年生黑麦草,获得的转基因株系Gsc_LP5通过PCR检测证明了目的基因的存在,通过叶片离体检测法证明了作为检测基因随同质粒一同转入的抗潮霉素基因的表达,通过盆栽耐盐试验证明了转基因植株具有较强的耐盐能力。 展开更多
关键词 多年生黑麦草Lolium perenne L. 愈伤组织诱导 植株再生 遗传转化 杆菌介导
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农杆菌介导的水稻双载体共转化法中部分影响因素的研究 被引量:14
17
作者 陆美芳 刘巧泉 +1 位作者 于恒秀 顾铭洪 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第5期55-62,共8页
以T-DNA区分别只含有潮霉素选择标记基因(HPT)和GUS报告基因的双元载体pCAMBIA1300和pCAMBIA0301用于农杆菌介导的水稻共转化试验。根据经农杆菌浸染并共培养3d后水稻愈伤组织中的GUS瞬间表达情况及其稳定共转化率,测定了不同农杆菌菌... 以T-DNA区分别只含有潮霉素选择标记基因(HPT)和GUS报告基因的双元载体pCAMBIA1300和pCAMBIA0301用于农杆菌介导的水稻共转化试验。根据经农杆菌浸染并共培养3d后水稻愈伤组织中的GUS瞬间表达情况及其稳定共转化率,测定了不同农杆菌菌株搭配及其不同浓度配比对共转化效率的影响。结果表明,在两种农杆菌菌液浓度比为1:1的情况下,农杆菌EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA0301组合共转化水稻的效率要高于其他菌株的组合;在以农杆菌EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA0301进行共转化时,两种菌液浓度比为1:2时共转化效率最高。 展开更多
关键词 水稻 转化 T-DNA区 GUS瞬间表达 水稻愈伤组织 杆菌介导 转化 双元载体 GUS报告基因 中部 选择标记基因 转化效率 T-DNA
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农杆菌介导萌动种胚转化法将抗草甘膦基因导入蓖麻 被引量:3
18
作者 杨俊芳 王亚 +4 位作者 张欢欢 王亦学 郝耀山 郭志强 王宏伟 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期267-272,共6页
为简化和提高转化效率,以蓖麻品种汾蓖10号为材料,采用非组培的农杆菌介导萌动种胚转化法,获得抗草甘膦植株T0。方法是在生长点附近针刺3针,超声波(强度800W)处理后,与农杆菌共培养16h。在随机选取的800株转化处理植株中,检测到5株PCR... 为简化和提高转化效率,以蓖麻品种汾蓖10号为材料,采用非组培的农杆菌介导萌动种胚转化法,获得抗草甘膦植株T0。方法是在生长点附近针刺3针,超声波(强度800W)处理后,与农杆菌共培养16h。在随机选取的800株转化处理植株中,检测到5株PCR阳性植株,平均转化率为6.3‰;在喷施除草剂后存活的26株转化处理植株中,经PCR和Southern blot检测,获得了3株阳性抗草甘膦T0植株。本方法操作简单,成本低,避免了冗长繁琐的组织培养过程,为蓖麻遗传转化研究提供了新的思路和方法。 展开更多
关键词 蓖麻 杆菌介导的遗传转化 萌动胚 共培养 超声波
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通过改良农杆菌介导的floral-dip法和花粉管通道法转化紫薇 被引量:5
19
作者 陈彦 孙宽莹 张涛 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期250-255,共6页
以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,分别用改良农杆菌介导的花序浸渍法(floral-dip)和花粉管通道法转化紫薇(Lagerstroemia indica),统计果实数、结实率、成苗率,然后用紫外灯照射28d左右的幼苗筛选转化株。结果表明:花粉管通道法转化... 以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,分别用改良农杆菌介导的花序浸渍法(floral-dip)和花粉管通道法转化紫薇(Lagerstroemia indica),统计果实数、结实率、成苗率,然后用紫外灯照射28d左右的幼苗筛选转化株。结果表明:花粉管通道法转化紫薇的结实率、成苗率均明显高于floral-dip法;用手携式紫外灯(365nm)照射进行活体鉴定,floral-dip法转化率比花粉管通道转基因法转化率高0.06%,但未达到显著水平;而花粉管通道法的结实率比floral-dip法的高11.87%~26.74%,更利于获得转化植株。说明通过花粉管通道法进行转化更适合于紫薇转基因新品种的培育。 展开更多
关键词 紫薇 改良杆菌介导的floral—dip 花粉管通道 转化
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棉花农杆菌介导法转化机理及研究进展 被引量:4
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作者 吴霞 焦改丽 +5 位作者 吴家和 范小平 孟晋红 罗小丽 上官小霞 李燕娥 《山西农业科学》 2001年第1期27-30,共4页
在农杆菌中Ti质粒上的若干重要区域共同作用下 ,将经改造的含有目的基因的T -DNA片断导入植物基因组中 ,并得以表达。采用农杆菌介导法 ,山西省农业科学院棉花研究所已将多个外源基因导入棉花中 ,获得转化品种与品系。
关键词 棉花 杆菌介导 转化机理 TI质粒 转化载体
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