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超声波辅助农杆菌介导转化大豆未成熟胚的研究 被引量:7
1
作者 钱雪艳 郭东全 +4 位作者 杨向东 薛键 邢国杰 张原宇 赵桂兰 《安徽农业科学》 CAS 2012年第2期658-661,共4页
[目的]进一步提高栽培大豆的遗传转化效率。[方法]以吉林省大豆主栽品种吉育67、吉育89未成熟子叶为外植体,对超声辅助农杆菌介导大豆遗传转化过程中处理液浓度、超声强度和时间等参数进行了优化。[结果]在农杆菌菌液浓度OD600为0.4,超... [目的]进一步提高栽培大豆的遗传转化效率。[方法]以吉林省大豆主栽品种吉育67、吉育89未成熟子叶为外植体,对超声辅助农杆菌介导大豆遗传转化过程中处理液浓度、超声强度和时间等参数进行了优化。[结果]在农杆菌菌液浓度OD600为0.4,超声功率中,转化率约为4.35%。[结论]为进一步开展以大豆未成熟子叶为外植体的高效遗传转化及相关应用研究提供了参考。 展开更多
关键词 超声波辅助农杆菌转化 未成熟胚子叶 遗传转化 大豆
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超声波辅助处理对发根农杆菌介导的苦豆子遗传转化的影响 被引量:21
2
作者 赵东利 陈红波 +2 位作者 聂秀菀 王新宇 郑国锠 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第3期468-472,共5页
以发根农杆菌转化苦豆子的子叶和下胚轴外植体,结果表明,辅助以超声波处理有助于转化率的提高,当超声波(功率120W,震荡频率50kHz)处理25min时,转化率达到最高峰(子叶为83.7%,下胚轴为39.1%),分别高于对照(14.4%和9.8%)69.3%和29.3... 以发根农杆菌转化苦豆子的子叶和下胚轴外植体,结果表明,辅助以超声波处理有助于转化率的提高,当超声波(功率120W,震荡频率50kHz)处理25min时,转化率达到最高峰(子叶为83.7%,下胚轴为39.1%),分别高于对照(14.4%和9.8%)69.3%和29.3%。在此条件下,进一步添加AS100μmol/L,可使转化率再进一步提高9.9%和7.6%。 展开更多
关键词 苦豆子 超声波处理 发根杆菌 遗传转化 乙酰丁香酮 药用植物
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超声波辅助农杆菌介导法转化鱼腥草的初步研究 被引量:10
3
作者 张莹 董燕 +3 位作者 易良杰 王培训 易浪 刁玲武 《江西农业学报》 CAS 2010年第4期9-11,共3页
应用超声波直接转化法、农杆菌介导转化法、恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s 4种方法对鱼腥草进行转基因研究,结果显示:上述4种转化法对gus基因最大瞬时表达率依... 应用超声波直接转化法、农杆菌介导转化法、恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s 4种方法对鱼腥草进行转基因研究,结果显示:上述4种转化法对gus基因最大瞬时表达率依次为47%、60%、80%和75%。结论:用恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s两种转化法gus基因的瞬时表达率最高,说明超声波辅助农杆菌介导遗传转化方法是一种高效的鱼腥草转基因方法,它实现了外源基因在植物中的高效表达。 展开更多
关键词 超声波辅助杆菌介导 鱼腥草 遗传转化 GUS瞬时表达
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超声波辅助对农杆菌介导新红星苹果遗传转化中gus基因瞬间表达的影响 被引量:7
4
作者 刘莉莉 刘丹 +1 位作者 丛郁 章镇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第2期213-215,共3页
关键词 苹果 超声波辅助杆菌介导 遗传转化
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超声波辅助的发根农杆菌对黄瓜的遗传转化 被引量:18
5
作者 姚春娜 王亚馥 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期77-81,共5页
由于超声波处理可在外植体上产生许多微小伤口 ,从而提高农杆菌与外植体之间的接触面积 ,提高农杆菌对外植体的转化频率 .用野生型发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes) A4 菌株感染黄瓜 (Cucumis sativus L.)无菌苗的子叶和下胚轴 ,... 由于超声波处理可在外植体上产生许多微小伤口 ,从而提高农杆菌与外植体之间的接触面积 ,提高农杆菌对外植体的转化频率 .用野生型发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes) A4 菌株感染黄瓜 (Cucumis sativus L.)无菌苗的子叶和下胚轴 ,建立了黄瓜的发根遗传转化体系 .同时 ,对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮的添加与否等影响因素进行了研究 .结果表明 ,采用外植体在添加 0 .5 m g/ L NAA和 2 mg/ L 6 - BA的 MS培养基上预培养 4 d,超声波处理 2 s,共培养 3d,在预培养共培养期间子叶上表皮向下可以取得最佳的转化效果 ,发根诱导率为 94 .7% .乙酰丁香酮对发根诱导频率影响不明显 .冠瘿碱检测表明 。 展开更多
关键词 发根杆菌 黄瓜 超声波 转化 发根 SAAT 遗传
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超声波辅助对农杆菌介导“美人指”葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响 被引量:5
6
作者 周蓓蓓 陈月红 +1 位作者 章镇 陶建敏 《江西农业学报》 CAS 2010年第4期6-8,共3页
通过超声波辅助农杆菌介导法,优化"美人指"葡萄遗传转化体系。利用GUS瞬时表达的方法研究了不同功率、时间条件下的超声波处理,外植体类型以及AS浓度对"美人指"葡萄遗传转化效率的影响。结果表明:外植体茎段在含75m... 通过超声波辅助农杆菌介导法,优化"美人指"葡萄遗传转化体系。利用GUS瞬时表达的方法研究了不同功率、时间条件下的超声波处理,外植体类型以及AS浓度对"美人指"葡萄遗传转化效率的影响。结果表明:外植体茎段在含75mg/L AS农杆菌悬浮液中侵染4 min,并在此期间,用功率为90 W的超声波处理14 s,获得最佳GUS瞬时表达率42.8%。 展开更多
关键词 葡萄 超声波辅助杆菌介导 遗传转化
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葡萄砧木5BB超声波辅助农杆菌介导法遗传转化的条件 被引量:2
7
作者 李金凤 陶建敏 +2 位作者 糜林 李国平 章镇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期1190-1192,共3页
关键词 葡萄砧木 5BB 超声波 杆菌介导法 遗传转化
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超声波辅助农杆菌介导八棱海棠转rolC基因 被引量:8
8
作者 丛郁 王三红 +2 位作者 王红霞 姚泉洪 章镇 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期659-663,共5页
应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D... 应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D600nm为0.6且含有75 mg/L As的农杆菌悬浮液中侵染2 min后,用功率为100 W的超声波处理30 s,再浸泡2.5 min,然后放到再生培养基上共培养3 d,能获得最佳的gus基因瞬间表达率。最佳处理条件下转化683枚八棱海棠叶片,共得到138个抗性愈伤组织和15株抗性苗,转化率为2.2%。GUS染色、PCR及Southern blotting检测结果显示,有12个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。 展开更多
关键词 八棱海棠 超声波辅助农杆菌转化 ROLC基因
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超声波辅助处理农杆菌介导大豆胚尖转化转基因植株的获得和分子鉴定 被引量:1
9
作者 孙式静 杨素欣 冯献忠 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期808-814,共7页
以大豆Williams 82成熟胚尖为试验材料,建立了超声波辅助处理的大豆胚尖农杆菌转化体系,研究了不同超声波处理时间对报告基因Uid A(GUS)瞬间表达的影响和不同草铵膦浓度对大豆转化效率的影响。结果表明:在超声波处理2 min时,报告基因... 以大豆Williams 82成熟胚尖为试验材料,建立了超声波辅助处理的大豆胚尖农杆菌转化体系,研究了不同超声波处理时间对报告基因Uid A(GUS)瞬间表达的影响和不同草铵膦浓度对大豆转化效率的影响。结果表明:在超声波处理2 min时,报告基因GUS的瞬时表达效率达到最高;在0.3-0.6 mg·L^-1草铵膦梯度筛选浓度下,阳性转基因植株的数量最多。对于所获得的转基因株系进行了PCR检测和除草剂Basta涂抹抗性检测;实时荧光定量PCR检测显示转基因植株的目的基因的表达量达到野生型的1.7-42倍,Southern杂交检测表明外源基因已经整合到大豆基因组中。 展开更多
关键词 大豆 胚尖 杆菌转化 超声波辅助处理
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负压和超声波处理对农杆菌介导的花生遗传转化效率的影响 被引量:13
10
作者 邹湘辉 庄东红 +2 位作者 胡忠 李庆云 曹军 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期12-16,共5页
为了提高根癌农杆菌介导的花生遗传转化效率,研究了不同强度的负压和超声波处理时间对外植体芽诱导率的影响以及对花生遗传转化的作用。结果表明,较低强度(抽拉30次)的负压处理和短时间(2min)的超声波处理对花生遗传转化有促进作用,虽... 为了提高根癌农杆菌介导的花生遗传转化效率,研究了不同强度的负压和超声波处理时间对外植体芽诱导率的影响以及对花生遗传转化的作用。结果表明,较低强度(抽拉30次)的负压处理和短时间(2min)的超声波处理对花生遗传转化有促进作用,虽然超声波处理延长了芽再生时间,但是有助于提高花生外植体芽点诱导率。 展开更多
关键词 负压 超声波 根癌杆菌 遗传转化 花生 外植体
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超声波处理对根癌农杆菌介导转化金钗石斛影响的初步研究 被引量:3
11
作者 杨翠芹 秦耀国 刘伟 《四川农业大学学报》 CSCD 2006年第4期455-458,共4页
以金钗石斛的类原球茎体(PLBs)为受体材料,研究了侵染前材料不同创伤处理对农杆菌介导转化频率的影响。结果表明:25KHz超声波40~80W处理5~10min或100W处理5min对PLBs死亡率无不良影响;1/2MS液体培养基适宜作为超声溶液;80~100W超声... 以金钗石斛的类原球茎体(PLBs)为受体材料,研究了侵染前材料不同创伤处理对农杆菌介导转化频率的影响。结果表明:25KHz超声波40~80W处理5~10min或100W处理5min对PLBs死亡率无不良影响;1/2MS液体培养基适宜作为超声溶液;80~100W超声波处理5min的PLBs在转化后GUS染色每100mg鲜重材料上的蓝色斑点数由常规方法处理的0~0.54提高到6.05~7.90,GUS基因瞬时表达频率得到提高;筛选两个月后多数PLBs的GUS基因仍能稳定表达。说明超声波处理能提高农杆菌介导转化金钗石斛PLBs的频率。 展开更多
关键词 金钗石斛 杆菌 转化 超声波
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超声波处理提高红花遗传转化率的研究
12
作者 付宏岐 薛萍 史俊卿 《陕西农业科学》 2014年第11期38-40,共3页
为研究超声波处理对红花(Carthamus tinctorius L.)遗传转化效率的影响。试验以裕民无刺红花品种无菌苗子叶作为外植体,采用叶盘法转化红花,在根癌农杆菌侵染外植体时分别进行0 min、0.5 min、1 min、3min、5 min的超声波处理,采用PCR... 为研究超声波处理对红花(Carthamus tinctorius L.)遗传转化效率的影响。试验以裕民无刺红花品种无菌苗子叶作为外植体,采用叶盘法转化红花,在根癌农杆菌侵染外植体时分别进行0 min、0.5 min、1 min、3min、5 min的超声波处理,采用PCR检测筛选转基因红花阳性植株。结果表明,超声波处理0.5 min能有效提高红花遗传转化率。PCR检测初步证明重组目的基因已整合到转基因红花基因组中。 展开更多
关键词 红花 杆菌 超声波 遗传转化
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农杆菌介导霞多丽葡萄胚性细胞系遗传转化条件的优化 被引量:6
13
作者 邓杰 曹银生 +2 位作者 刘彩玉 刘新 薛仁镐 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期236-239,共4页
为建立葡萄(Vitis vinifera)遗传转化技术体系,以霞多丽葡萄(Chardonnay)胚性细胞系为靶组织,采用GUS检测法,对影响农杆菌介导葡萄遗传转化效率的主要因素进行了研究。结果表明,超声波处理时间长短对转化效率有较大影响,在所试的0.5、1... 为建立葡萄(Vitis vinifera)遗传转化技术体系,以霞多丽葡萄(Chardonnay)胚性细胞系为靶组织,采用GUS检测法,对影响农杆菌介导葡萄遗传转化效率的主要因素进行了研究。结果表明,超声波处理时间长短对转化效率有较大影响,在所试的0.5、1、5、10 min 4种不同时间的超声波处理中,以5 min时转化效率较好,平均达到9.11个蓝色斑点;AS浓度对转化效率有明显差异,当浓度为50μmol/L时,平均蓝色斑点数为8.89个,100μmol/L时,达到12.44个;DTT质量浓度对转化效率也有较大影响,在所试的3种质量浓度(1,2,3 mg/L)中,以3 mg/L为最佳,有16.67个蓝色斑点。通过GUS瞬时表达检测,确立了农杆菌介导葡萄胚性细胞系遗传转化的几个最适影响因素,从而为葡萄遗传转化技术体系的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄 杆菌 胚性细胞系 超声波 遗传转化
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根癌农杆菌介导的葡萄风信子遗传转化体系 被引量:9
14
作者 张海芹 刘雅莉 +1 位作者 张锋 刘爱玲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第2期135-142,共8页
【目的】以葡萄风信子亚美尼亚(Muscari armeniacum)的胚性愈伤组织为受体系统,建立高效稳定的葡萄风信子遗传转化体系,为葡萄风信子遗传改良及相关基因功能的研究奠定基础。【方法】通过GUS(β-葡萄糖苷酸酶)瞬时表达率,研究根癌农杆... 【目的】以葡萄风信子亚美尼亚(Muscari armeniacum)的胚性愈伤组织为受体系统,建立高效稳定的葡萄风信子遗传转化体系,为葡萄风信子遗传改良及相关基因功能的研究奠定基础。【方法】通过GUS(β-葡萄糖苷酸酶)瞬时表达率,研究根癌农杆菌的菌液浓度、侵染时间、共培养时间和超声波预处理时间等4个因素对葡萄风信子GUS瞬时表达效率的影响,并在最佳条件下将GUS基因转入葡萄风信子,获得稳定表达转化植株。【结果】葡萄风信子胚性愈伤组织GUS染色结果表明,随着根癌农杆菌菌液浓度的增加及侵染时间、共培养时间和超声波预处理时间的延长,GUS瞬时表达效率均呈现先增后降趋势;当根癌农杆菌菌液OD600为0.5、侵染时间20min、共培养4d、80W功率超声波预处理3min时,其GUS瞬时表达效率最高,分别为14.43%,13.73%,10.85%和75.36%;在最佳转化体系下将GUS基因转入葡萄风信子,获得207株潮霉素抗性植株。GUS组织化学检测结果表明:在抗性植株的不同部位都呈现不同程度的蓝色,PCR检测有7株为阳性植株,阳性率为7%;反转录PCR检测显示,7株阳性植株中有3株扩增出GUS基因目的条带。【结论】初步建立了根癌农杆菌介导的葡萄风信子遗传转化体系,该体系能显著提高葡萄风信子GUS瞬时表达效率。 展开更多
关键词 葡萄风信子 根癌杆菌 GUS 遗传转化 超声波
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农杆菌介导萌动种胚转化法将抗草甘膦基因导入蓖麻 被引量:3
15
作者 杨俊芳 王亚 +4 位作者 张欢欢 王亦学 郝耀山 郭志强 王宏伟 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期267-272,共6页
为简化和提高转化效率,以蓖麻品种汾蓖10号为材料,采用非组培的农杆菌介导萌动种胚转化法,获得抗草甘膦植株T0。方法是在生长点附近针刺3针,超声波(强度800W)处理后,与农杆菌共培养16h。在随机选取的800株转化处理植株中,检测到5株PCR... 为简化和提高转化效率,以蓖麻品种汾蓖10号为材料,采用非组培的农杆菌介导萌动种胚转化法,获得抗草甘膦植株T0。方法是在生长点附近针刺3针,超声波(强度800W)处理后,与农杆菌共培养16h。在随机选取的800株转化处理植株中,检测到5株PCR阳性植株,平均转化率为6.3‰;在喷施除草剂后存活的26株转化处理植株中,经PCR和Southern blot检测,获得了3株阳性抗草甘膦T0植株。本方法操作简单,成本低,避免了冗长繁琐的组织培养过程,为蓖麻遗传转化研究提供了新的思路和方法。 展开更多
关键词 蓖麻 杆菌介导的遗传转化 萌动胚 共培养 超声波
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甘薯SAAT法遗传转化条件的优化 被引量:8
16
作者 王欣 周忠 +2 位作者 李强 顾向华 马代夫 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第1期14-18,共5页
SAAT即声波辅助的农杆菌遗传转化方法。在遗传转化中,超声波处理可以在外植体上产生许多易于农杆菌进入的微小伤口和通道,从而提高转化率。该研究首次将SAAT法应用于甘薯遗传转化并对遗传转化体系进行优化,根癌农杆菌菌株为EHA101/pROA9... SAAT即声波辅助的农杆菌遗传转化方法。在遗传转化中,超声波处理可以在外植体上产生许多易于农杆菌进入的微小伤口和通道,从而提高转化率。该研究首次将SAAT法应用于甘薯遗传转化并对遗传转化体系进行优化,根癌农杆菌菌株为EHA101/pROA93(nptⅡ和gus),受体材料为甘薯品种栗子香的胚性悬浮细胞。结果表明,悬浮培养105 d,继代培养3 d,将经超声波处理30 s的胚性悬浮细胞侵染到OD600值稀释至0.5的对数生长期的EHA101菌液中10 m in,经4 d共培养后,GUS瞬时表达率最高,达到86.7%,稳定表达率为37.9%;转化时加入乙酰丁香酮亦能提高转化率;转基因植株筛选的适宜选择压为Kan 10 mg/L;适宜的抑菌剂为Carb 100 mg/L。 展开更多
关键词 甘薯 遗传转化 声波辅助杆菌遗传转化
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植物遗传转化的替代方法及研究进展 被引量:9
17
作者 李君 李岩 刘德虎 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期31-36,45,共7页
农杆菌介导法和基因枪法是两种目前应用最广泛和最可靠的植物遗传转化方法。由于其存在一些不足,因此,需要探索可替代它们的其他植物遗传转化方法以弥补农杆菌介导法和基因枪法的缺点,使其更加适用于特定目标植物的转化事件中,转化效率... 农杆菌介导法和基因枪法是两种目前应用最广泛和最可靠的植物遗传转化方法。由于其存在一些不足,因此,需要探索可替代它们的其他植物遗传转化方法以弥补农杆菌介导法和基因枪法的缺点,使其更加适用于特定目标植物的转化事件中,转化效率也随之提高。对这些可替代的遗传转化方法进行概述,并简要介绍各种方法的优缺点及其在农作物转化中的应用情况。 展开更多
关键词 植物遗传转化方法 花粉管通道法 茎尖转化 叶绿体转化 碳化硅纤维介导法 超声波辅助杆菌转化 真空渗入法 藻酸钙微珠介导法
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